豬肺炎支原體巢式PCR診斷方法的建立及應用

吉 瑪,娘 洛,張淑云

(青海省果洛州班瑪縣動物疫病預防控制中心,青海 果洛 814300)

豬肺炎支原體巢式PCR診斷方法的建立及應用

吉 瑪,娘 洛,張淑云

(青海省果洛州班瑪縣動物疫病預防控制中心,青海 果洛 814300)

為建立一種快速診斷豬肺炎支原體病原的方法，根據GenBank上登錄的Mhp基因組序列，在保守區基因內部設計合成2對引物，經過PCR反應條件的優化，建立了檢測豬肺炎支原體的巢式PCR方法。結果表明，該方法對雞毒支原體、豬鼻支原體、豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌、豬圓環病毒2型、豬偽狂犬病毒的擴增結果均為陰性；第1次擴增的敏感性是10 pg，第2次擴增的敏感性是0.1 pg，第2次比第1次擴增的敏感性高100倍。巢式PCR檢測方法具有特異性強、敏感性高、重復性好等優點，可以在短時間內準確快速的檢測出低含量的Mhp病原，為豬肺炎支原體的快速診斷與凈化奠定基礎。

豬肺炎支原體；巢式PCR；診斷

豬肺炎支原體(Mycoplasmahyopneumoniae，Mhp)是引起豬支原體肺炎(MycoplasmaPneumoniaeofswine，MPS)俗稱豬氣喘病的主要致病原，感染豬常表現為豬呼吸道病綜合征(Porcine Respiratory Disease Complex，PRDC)[1]。豬氣喘病具有高度傳染性，雖死亡率不高，但發病率極高，感染豬主要表現為咳嗽并伴有呼吸困難、肺組織病變或大理石樣病變等臨床癥狀和病理變化[2-3]。該病可引起豬的生長受阻，導致飼料轉化率大幅下降，豬生產性能降低。目前呈全球性流行與分布，其高發病率給養豬業造成了巨大的經濟損失[4-7]。鑒于此，迫切需要加強對本病病原、流行病學、疫苗和診斷方法的深入研究，PCR診斷方法具有操作簡單、特異性強、靈敏度高、可以檢測早期感染等優點，為豬肺炎支原體的診斷提供了新的模式。……