干擾SULT2B1下調MMP-2抑制Hepa1-6肝癌細胞的體外遷移與侵襲

楊曉明，李曉波，殷蓮華

(1.寧夏醫科大學基礎醫學院病理生理學系，寧夏銀川750004;2.復旦大學基礎醫學院生理與病理生理學系，上海200032)

基質金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase，MMP-2)、MMP-9 過表達及活性增強引起細胞外基質的降解是肝癌細胞侵襲和轉移的關鍵環節［1］。羥基類固醇硫酸基轉移酶(hydroxysteroid sulfotransferases)2B1 (SULT2B1)是一種催化氧化固醇硫酸化反應的關鍵酶。研究表明，SULT2B1 在肝臟中的生長、分化和代謝中起到重要的調控作用［2-4］。本實驗前期研究發現，SULT2B1 可促進肝癌細胞的體內外增殖［5］。但SULT2B1 能否調節MMP-2 和MMP-9 的表達水平影響肝癌細胞的侵襲與遷移能力?本研究以Hepa1-6 細胞系為研究對象，探討SULT2B1 與肝癌細胞侵襲、遷移生物學行為的關系，分析其可能的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 細胞系:小鼠肝癌細胞系(Hepa1-6)源自American Type Culture Collection (ATCC)。

1.1.2 實驗試劑:DMEM 培養基和胎牛血清(Gibco公司)、Trizol Reagent(Invitrogen 公司)、RevertAIdTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit #1622(Fermentas 公司)、SYBR GREEN supermix(Bio-rad 公司);BCA-100 蛋白質定量試劑盒(上海申能博彩生物科技有限公司)、RIPA 蛋白裂解液(上海碧云天生物)、ECL化學發光檢測試劑盒(北京康維世紀)、0.25%胰蛋白酶(杭州吉諾生物公司)、Transwell 24 孔板(Corning Costar 公司)、Matrigel 膠和明膠(Sigma 公司)、SULT2B1 兔多克隆抗體(Abcam 公司)、Tubulin 兔多克隆抗體(Bioworld 公司)、山羊抗兔IgG 抗體、山羊抗兔FITC 標記IgG 抗體(Santa Cruz 公司)、DAPI染色液(武漢博士德生物);SULT2B1 慢病毒干擾載體(SULT2B1-LV)和對照病毒載體(GFP-LV)由上海吉凱基因化學有限公司合成;引物由上海桑尼公司合成。

1.2 實驗方法

1.2.1 細胞培養:Hepa1-6 細胞用含10%胎牛血清的DMEM 培養液培養，待細胞培養至鋪滿瓶底后用含0.25%的胰蛋白酶消化液消化細胞，每3～4 天換液，培養條件為37 ℃、5% CO2、飽和濕度。

1.2.2 Hepa1-6 細胞免疫熒光染色:將Hepa1-6 細胞接種……