C6膠質瘤微環境中大鼠BMSCs惡性轉變與NF-κB高表達的相關性

燕 莎，朱 靜*，田 杰，2，張春敏，譚 彬，崔建邦，楊春梅

(重慶醫科大學附屬兒童醫院1.兒童發育與疾病研究教育部重點實驗室兒科學重慶市重點實驗室;2.心血管內科，重慶400014)

惡性腫瘤的治療一直是醫學研究的熱點，骨髓間充質干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)因具有極好的遷移能力和腫瘤趨向性，而被作為是靶向治療腫瘤的最佳載體細胞，然而干細胞在特定的微環境中會有惡性轉變的風險，有文獻報道BMSCs 在異常的微環境中受到多種與腫瘤發生相關的信號通路的調控與影響［1-2］。本研究前期數據已經證實將BMSCs 置于C6 膠質瘤細胞的微環境中會發生惡性轉變［3-5］。NF-κB(nuclear factor-κB，核轉錄因子κB)和STAT3(signal transducers and activators of transcription3，信號傳導與轉錄活化因子3)的高表達及激活與多種腫瘤的發生發展密切相關［6-7］。本實驗將從NF-κB 和STAT3 信號通路的角度出發來探討BMSCs 在C6 微環境中發生惡性轉變的相關機制，為BMSCs 的安全應用提供實驗基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

SPF 級SD 大鼠(3～4 周齡、體質量40 ±10 g)，SPF 級SD 24 h 新生鼠均由重慶醫科大學動物中心提供［合格證書SCXY(渝)20120001］)。DMEM/F12 培養基及胎牛血清(Gibico 公司)，胰蛋白酶(Sigma 公司)。0.45 μm 1 次性無菌過濾器(Millipore 公司)。熒光定量PCR 試劑盒(大連寶生物公司)。NF-κB P65、STAT3 和c-Myc 引物(上海英俊生物公司)。大鼠IL-6 ELISA 檢測試劑盒(Westang公司)。抗體:NF-κB P65、STAT3、P-STAT3、c-Myc和CD90(Abcam 公司);CD105(Origene 公司);CD45(Biolegend 公司)。ECL 化學發光試劑盒(南京凱基生物)。

1.2 方法

1.2.1 BMSCs 細胞培養及分組:取大鼠脛骨和股骨骨髓，貼壁法篩選、分離、培養和擴增BMSCs，用含10%胎牛血清DMEM/F12 培養，待細胞增殖至80%～90%匯合以1∶2 傳代培養;取24 h 新生鼠的大腦皮質，差速貼壁法體外分離、培養及擴增星型膠質細胞;C6 膠質瘤細胞系用含10% 胎牛血清DMEM/F12 培養基常規培養。……