慢性阻塞性肺病患者冷敏受體高表達及其臨床意義

李敏超，李 娜，尤列·皮爾曼，維克多·科羅索夫，周向東*

(1.重慶醫科大學附屬第二醫院呼吸內科，重慶400010;2.俄羅斯醫學科學院遠東呼吸生理與病理研究中心，俄羅斯布拉戈維申斯克675000)

冷空氣刺激是慢性氣道炎性疾病，如慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)和哮喘等疾病的重要急性加重因素［1］。此類患者常在輕微受涼或氣候稍變化時表現急發加重，而后續細菌感染、炎性因子浸潤及黏液分泌等事件使疾病呈現更復雜的病理改變［2-3］。從某種意義上講，冷空氣刺激對于此類疾病的觸發或急性加重在一定程度上起著“扳機點”的作用［1］，故深入探究冷刺激作用于氣道的受體機制及相關信號通路，對于此類疾病的防治有極重要的臨床意義。瞬時受體電位蛋白-8(transient receptor potential protein-8，TRPM8)作為一種特異的冷刺激感應受體，是研究外周溫度感受器對冷刺激反應的最佳候選靶目標［4-5］，本實驗檢測COPD 患者支氣管黏膜上皮內是否有TRPM8 蛋白的高表達及人氣道上皮細胞TRPM8 受體的基本特性。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及材料

兔抗TRPM8(C-term)多克隆抗體、非免疫源性正常兔IgG(Abgent 公司);兔SP Kit (SP9001)、DAB Kit (ZLI9018)(北京中杉金橋生物技術有限公司);小鼠抗β-actin 單克隆抗體、HRP 標記的羊抗兔或羊抗小鼠IgG(武漢博士德生物有限公司);PrimeScript RT reagent Kit 試劑盒、SYBR Premix EX TaqTM、DL2000 marker 和TriZol 試劑盒(TaKaRa Biotechnology 公司);TRPM8 引物(上海生工)。TRPM8通道特異性阻斷劑BCTC、TRPM8shRNA 和對照shRNA(美國鹽湖城猶他大學Christopher A.Reilly教授惠贈);正常人氣道上皮16HBE 細胞(美國標準培養收集所ATCC);RPMI 1640 培養基、胎牛血清(Hyclone 公司);Fluo3-AM(北京碧云天生物技術研究所);脂質體2000(Invitrogen 公司)。

1.2 組織標本

收集因周圍型肺癌……