IL-12加強BCG初免對小鼠抗結核免疫效果

王 嬋，王新敏，章 樂，季 榕，吳江東，吳 芳，張萬江

(石河子大學醫學院1.病原生物學與免疫學教研室;2.病理生理教研室;3.第一附屬醫院泌尿外科;4.第一附屬醫院感染科;5.新疆地方與民族高發病教育部重點實驗室，新疆石河子832002)

長期以來各國一直使用卡介苗(Bacillus Calmette Gerin)來預防結核病，但BCG 在不同地區的免疫保護效果差異顯著，序貫免疫策略是單用一種疫苗產生的免疫效力不足時，使用相同或不同的疫苗來重復免疫接種可增強免疫效果［1-2］。本研究利用已經構建好的表達免疫調節因子的質粒(IL-12)作為在接種BCG 后連續使用，以觀察BCG 初次免疫后IL-12 進行免疫加強的免疫效果。

1 材料與方法

IL-4 和IL-2 含量。

2 結果

2.1 各組血清特異性抗體IgG 的比較:免疫后BCG 組、BCG/IL-12 組和BCG/pcDNA3.1 組在3 個時間點的IgG 較同時間段對照組均有顯著升高(P＜0.05)。其中，BCG/IL-12組IgG 高于其他各組(P＜0.05)(圖1)。

1.1 材料:SPF 級6～8 周齡BALB/c 雌性小鼠24 只，由［新疆醫科大學醫學實驗動物中心，使用許可證號SYXK(新)2003-0001］。IL-12 是以pcDNA3.1 為載體構建的表達型重組質粒(本實驗室構建保存)。BCG(本實驗室常規保存培養)。

1.2 方法

1.2.1 動物免疫:將小鼠隨機分為PBS 對照組、BCG 組、BCG/IL-12 組、和BCG/pcDNA3.1 組，每組6 只。給4 組小鼠分別在第1 周注射PBS、BCG、BCG 及BCG，第3 和5 周分別注射PBS、PBS、IL-12、pcDNA3.1。

1.2.2 特異性抗體IgG 的檢測(ELISA 法):以PBS 組小鼠血清作為陰性對照，將抗體滴度定義為:實驗組和陰性對照組A490比值≥2.0 時為最大血清稀釋倍數。

1.2.3 特異性淋巴細胞增殖實驗(MTT 法):加強免疫后4，6 和8 周，每組分別取2 只小鼠，脾細胞混合后分孔培養，實驗組加入PPD(1 μg/mL)刺激，培養結束前4 h 加XTT(5 g/L)4 μL 及VK3 2 μL(終濃度0.1 mmol/L)，培養終止后測定A450nm吸光度值，結果用刺激指數(stimulation index，SI)表示。……