ADAM33在IL-4刺激的人氣道平滑肌細胞中對NF-κB和TGF-β1表達的影響

陶 韜，朱小華，古嫦英，張孝彬，郭 武，廖秀清

(重慶市涪陵中心醫院呼吸內科，重慶408000)

哮喘的病因復雜，受遺傳和環境因素的雙重影響，以氣道高反應性和氣道重塑為特點，多種細胞、炎性介質和細胞因子參與其發生發展過程，但其發病機制仍不完全清楚。在氣道重塑過程中氣道平滑肌細胞(airway smooth muscle cells，ASMCs)增生、肥大，導致氣流阻塞、持續氣道高反應性，因此，研究ASMCs 增殖的細胞內信號傳導通路對完善哮喘發病機制有重要意義。哮喘以Th2 型免疫反應為主，而白細胞介素-4(interleukin-4，IL-4)是主要的Th2 型細胞因子［1-3］。解整合素-金屬蛋白酶33(a disintegrin and metalloprotease，ADAM33)的多態性與哮喘的嚴重程度、易感性、氣道高反應性和氣道重塑等相關［1，3-7］。轉化生長因子-β1 (transforming growth factor-β1，TGF-β1)是氣道重塑的重要細胞因子，可刺激氣道和血管平滑肌細胞增生和肥大［2，8］。核因子-κB(nuclear factor-kappa B，NF-κB)是一種核轉錄因子，參與多種基因的轉錄和表達，與哮喘也密切相關［9］。本課題組前期研究發現，IL-4 可引起HASMCs 中ADAM33 表達增高，并呈濃度依耐性，故本研究以濃度為50μg/L 的IL-4 刺激ASMCs，初步探討ADAM33 在人氣道平滑肌細胞IL-4/NF-κB/TGF-β1 信號通路中的作用，為進一步完善哮喘的發病機制和防治提供新思路。

1 材料與方法

1.1 材料

人氣道平滑肌細胞HASMCs(上海眾華生物科技有限公司)，人IL-4(PeproTech 公司)，RPMI-1640培養基、胎牛血清(Gibco 公司)，Lipofectamin RNAiMAX Reagent 試劑盒(Invitrogen 公司)，RNA提取試劑盒(Omega 公司)，Primscript RT reagent Kit with gDNA Eraser 試劑盒和SYBR Premix ExⅡTaq熒光定量 PCR 試劑盒(TaKaRa 公司)，兔抗ADAM33抗體(Gene Tex 公司)，兔抗TGF-β1 抗體(Bioworld 公司)，兔抗NF-κB p65 抗體和兔抗GAPDH抗體(Immunoway 公司);蛋白定量試劑盒(Pierce 公司)，蛋白印跡發光液和PVDF 膜(Millipore 公司)，余Western blot 相關的試劑(碧云天公司);引物均由上海生工生物工程技術服務有限公司合成(表1)，ADAM33-siRNA 由上海吉瑪制藥技術有限公司設計并合成(表2)。……