LPS上調(diào)大鼠HIF-1和GLUT表達

嚴潔萍，俞 佳，吳 越，呂良忠，2*

(1.浙江省人民醫(yī)院藥學部臨床藥學室，浙江杭州310014;2.浙江中醫(yī)藥大學藥學院藥理教研室，浙江杭州310053)

葡萄糖轉運體(glucose transporter，GLUT)是一類調(diào)控細胞外葡萄糖進入細胞內(nèi)的跨膜蛋白家族，參與糖代謝，炎性反應和免疫應答等過程［1］。本研究前期已發(fā)現(xiàn)大鼠腹腔注射脂多糖(lipopolysacchride，LPS)可致內(nèi)毒素血癥［2］，引起代謝因子應激變化［3-4］，影響葡萄糖吸收和GLUT1 表達變化［5］。病理狀態(tài)GLUT 表達豐度和變化趨勢都不盡相同，其分布和功能具有潛在的選擇特異性值得進一步探討。

低氧誘導因子(hypoxia-inducible factor-1，HIF-1)參與調(diào)控GLUT 表達，HIF-1 活性調(diào)節(jié)依賴于HIF-1的穩(wěn)定表達。前期已發(fā)現(xiàn)LPS 促ALD A 表達呈HIF-1 依賴性上調(diào)［2］，提示HIF-1 可參與調(diào)控葡萄糖代謝。

本研究觀察LPS 對GLUT 家族表達影響及HIF-1可能的調(diào)控作用，以揭示GLUT 在病理狀態(tài)可能的生物學功能。

1 試劑與方法

1.1 主要試劑與材料

LPS(Sigma 公司);PMSF，aprotinin，leupeptin，丙烯酰胺，雙丙稀酰胺，Tris，甘氨酸，引物序列及RTPCR 反應試劑(上海生工生物工程);IL-1 測定試劑盒(南京建成生物有限公司);硝酸纖維素膜(Milipore 公司);Western blot 所用二抗為辣根過氧化物酶標記的抗羊IgG，辣根過氧化物酶標記的抗兔IgG，辣根過氧化物酶標記的抗鼠IgG 和β-actin 抗體(Santa Cruz Biotechnology 公司);ECL 化學發(fā)光試劑盒(Pierce 公司);Lowry 法測蛋白含量試劑盒(Bio-Rad 公司);GLUT1 抗體(杭州安博公司);HIF-1抗體(ABCam 公司)。

1.2 實驗動物

清潔級SD 大鼠，雄性，體質量180～250 g［浙江大學醫(yī)學實驗動物中心，動物合格證號:SCXK(浙)2004-0014］。

1.3 LPS 給藥、體溫檢測和樣本采集

大鼠12 只均分為對照組(腹腔注射0.9%氯化鈉注射液)及LPS 給藥組(注射2 mg/kg LPS)。LPS給藥后0、6、12、16 和24 h 檢測兩組大鼠肛溫。LPS作用24 h 后，下腔靜脈取血備用。……