miR-124a通過抑制TGF-β通路促進人胎盤間充質干細胞向胰腺祖細胞分化

陳冬梅，馬海濱，劉淑丹，王立斌，李玉奎，魏 軍

(寧夏醫科大學總醫院干細胞研究所生育力保持教育部重點實驗室，寧夏銀川750004)

胎盤間充質干細胞(placenta mesenchymal stem cells，PMSCs)，免疫原性低［1］，具有跨胚層分化為內胚層來源細胞的潛能，可能成為β 細胞缺失替代治療的重要方法［2］。研究顯示組織特異性轉錄因子的異源表達能夠有效提高間充質干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)向胰島素生成細胞分化，例如:外源過表達PDX-1 能夠產生具有糖反應能力的胰島素生成細胞［3］。同樣外源過表達組織特異的微小RNA(microRNA，miRNA)也能夠調控細胞的表型。目前還沒有利用外源表達miRNA 成功獲得胰島素生成細胞的報道。胚胎發育過程中，上皮間質轉化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是細胞分化的重要事件，這一過程中TGF-β 信號起了主導作用［4］。本研究試圖通過研究miR-124a 參與的轉錄后調控，通過抑制TGF-β 信號通路受體:轉化生長因子β Ⅰ型受體(transforming growth factor beta type Ⅰreceptor，TGFBR1)和骨形成蛋白β Ⅰ型受體(bone morphogenic proteins receptor type ⅠB，BMPR1B)的表達，阻斷TGF-β 信號通路，實現細胞的間質上皮轉化(mesenchymal-epithelial transition，MET)，同時阻止細胞的成骨分化，促進PMSCs 向胰腺祖細胞的分化，為進一步獲得胰腺功能細胞提供實驗基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

人胎盤來源于寧夏醫科大學總醫院行剖腹產的健康產婦，經醫院倫理學委員會批準且獲得患者知情同意。HEK293FT 細胞(寧夏人類干細胞研究所保存)。胎牛血清、L-DMEM、H-DMEM、胰蛋白酶和Trizol(Invitrogen 公司);Activin A(R＆D 公司);DNA酶Ⅰ、A 型膠原蛋白酶(Roche 公司);反轉錄試劑盒、轉染試劑TurboFect 和qPCR 試劑盒(Thermo 公司);限制性內切酶，T4 連接酶和T-載體(TAKARA 公司);四環素誘導型慢病毒載體系統Tet-On 3G(Clontech公司);山羊抗人多克隆抗體Insulin 和PDX-1(Santa cruz 公司);CY3 和FITC 標記兔抗山羊二抗(博士德公司)。……