Ezrin介導(dǎo)中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶誘導(dǎo)的人氣道上皮細(xì)胞株分泌黏蛋白增加

李 琪，李 娜，尤列．皮爾曼，維克多．科羅索夫，周向東*

(1．重慶醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，重慶400010;2.俄羅斯醫(yī)學(xué)科學(xué)院遠(yuǎn)東呼吸生理與病理研究中心，布拉戈維申斯克675000)

慢性阻塞性肺疾病急性加重期及哮喘重度發(fā)作尤其是致死性哮喘發(fā)作的患者，中性粒細(xì)胞在氣道大量募集，氣道黏液常呈“爆發(fā)式”分泌狀態(tài)，短時(shí)期內(nèi)急劇增多的黏液致廣泛黏液栓形成，出現(xiàn)嚴(yán)重氣道阻塞、導(dǎo)致窒息甚至死亡。此現(xiàn)象與細(xì)胞的胞吐行為密切相關(guān)。胞吐行為主要?dú)w因于細(xì)胞的極性活動(dòng)。Ezrin 作為膜連接蛋白(ezrin/radixin/moesin，ERM)家族的一員，是膜蛋白和肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架間確切的連接分子，存在于富含肌動(dòng)蛋白的表面結(jié)構(gòu)，在肺組織里也有明顯表達(dá)，其能參與細(xì)胞的多種功能活動(dòng)如細(xì)胞黏附、遷移以及細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)的組裝，與細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)及極性分泌有關(guān)［1］。故此推測(cè)，Ezrin 是否與氣道上皮細(xì)胞的極性分泌有關(guān)?是否參與氣道的黏液分泌過程?本研究以中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(neutrophil elatase，NE)作為氣道黏蛋白(mucin，MUC)主要病理性表型MUC5AC 分泌的誘導(dǎo)因素，對(duì)Ezrin 在其中的作用作一探討，以期明確氣道炎性反應(yīng)時(shí)黏蛋白胞吐的潛在動(dòng)力機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

人氣道上皮HBE16 細(xì)胞株(上海復(fù)祥生物科技有限公司);pEGFP-N1-Ezrin-Wt、pEGFP-N1-Ezrin-T567D 和 pEGFP-N1-Ezrin-T567A (法國 Monique Arpin 教授饋贈(zèng));pEGFP-N1 空載體(Clontech 公司);DEME/Ham's F12 培養(yǎng)基、HEPES、Trizol 和小牛血清(Sigma 公司);NE(Calbiochem 公司);兔抗Ezrin(H-276)多克隆抗體、HRP-羊抗兔抗體、HRP-兔抗鼠抗體(Santa Cruz 公司);小鼠抗MUC5AC 45M1 單克隆抗體(Neomarkers 公司);OPTI-MEM 無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)(Invitrogen 公司);X-treme GENE9DNA 轉(zhuǎn)染試劑(Roche 公司);MMLV(重組鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶)第一鏈cDNA 合成試劑盒(上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司);其余試劑均為國產(chǎn)分析純。……