重組siRARγ腺病毒構建及其對小鼠肝臟祖細胞分化的影響

周建武，何 昀，龔夢嘉，畢 楊

(重慶醫科大學附屬兒童醫院兒研所干細胞實驗室兒童發育疾病研究教育部重點實驗室重慶市干細胞治療工程技術研究中心，重慶400014)

全反式維甲酸(all-trans retinoic acid，ATRA)是維生素A 在體內的重要活性形式，在胚胎發育，組織器官形成，細胞的增殖分化，腫瘤的發生發展中具有重要的作用［1］。全反式維甲酸主要通過與維甲酸核受體(α、β、γ 3 種亞型)結合激活維甲酸信號傳導途徑，參與下游靶基因的轉錄調控，發揮維持機體正常生理穩態的生物學作用［2］。維甲酸核受體γ 是研究相對較少的一種亞型，主要與皮膚的發生、生長、分化及免疫細胞功能調節相關［3－4］，目前RARγ 與肝臟相關疾病的研究較少，僅有少數報道顯示與脂肪代謝和肝腫瘤的發生有關［5－6］。

前期結果表明，ATRA 對小鼠胚胎肝臟祖細胞的成熟分化有很強的誘導作用，而在小鼠肝臟發育過程中，胚胎期RARγ 的表達較低，但是在出生后呈現非常明顯的上調趨勢［7］，提示RARγ 在肝細胞成熟分化過程中的重要作用。本實驗采用Ad-easy 腺病毒系統，成功構建并篩選出能有效抑制RARγ 表達的siRNA 腺病毒，并在體外探討RARγ 抑制對ATRA 誘導肝細胞成熟分化的影響，為研究維甲酸信號傳導途徑調控肝臟正常發育及肝腫瘤的發生發展奠定了重要基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

Ad-easy 腺病毒系統(包括穿梭質粒pSESHUS，攜帶腺病毒骨架質粒pAdEasy-1 的大腸桿菌BJ5183(由美國芝加哥大學何通川教授饋贈);來自于胚胎期14.5 d的小鼠胚胎肝臟祖細胞(Hepatic progenitor cells HP 14.5 d)由本實驗室分離構建［5］;DH5α 大……