NF-κB及其調控的miRNA在宮頸癌移植瘤及癌旁組織中的活化和表達

甘自立，諶模武，林 紅，李 勇，熊秋迎，劉絲蓀，郭 菲

(南昌大學第一附屬醫院1.燒傷中心;2.腫瘤科;3.病理科;4.婦產科;5.南昌大學研究生院;6.南昌縣疾控中心，江西南昌330006)

宮頸癌是發生在全球婦女中第二大常見的惡性腫瘤，其死亡率已躍居各類婦科惡性腫瘤之首［1］，近年來，宮頸癌的診斷及綜合治療水平取得了很大的進展，但其發病率和死亡率并未發生根本性的變化，因此對宮頸癌防治的研究必須高度重視。NF-κB是一種重要的核轉錄因子，也是細胞護性因子，可上調“保護性或抗凋亡蛋白”，在腫瘤發生過程中可提高腫瘤細胞生存率，抑制細胞凋亡［2］。大量研究表明宮頸癌中存在NF-κB 的組成式激活［3］，然而癌旁組織作為重要的腫瘤微環境，其在宮頸癌發生發展中的作用未見報道。本實驗利用實時熒光定量和免疫組化的方法，研究癌旁組織中是否存在NF-κB 信號通路的活化，探討NF-κB信號通路在宮頸癌發生的早期分子事件中所起的作用，可否成為宮頸癌預防治療的新靶點。

1 材料與方法

1.1 材料

鼠源性宮頸癌細胞系U14(江西省醫學科學研究所)，清潔級昆明小鼠，雌性，5 ～7 周齡，20 ～22 g，32 只［南昌大學實驗動物科學部，合格證號:贛(動)-96021］。

1.2 主要試劑

miRNA 反轉錄試劑盒(TaKaRa 公司);PCR Master Mix(北京全式金生物技術有限公司);Trizol試劑(Invitrogen 公司);HRP 標記Ⅱ抗;NF-κB(P65)I 抗(中杉金橋公司)。

1.3 實驗方法

1.3.1 小鼠U14 宮頸癌移植腫瘤模型的建立:取小鼠U14 宮頸癌細胞懸液接種于2 只小鼠腹腔，2 周后急性頸椎脫臼處死腹水飽滿的小鼠，抽取乳白色腹水為瘤源，錐蟲藍檢測細胞成活率大于95%后調整細胞濃度至2×107/mL，向30 只小鼠右側腋窩皮下接種細胞懸液，每只0.2 mL。……