反相高效液相色譜法測定麻仁丸中苦杏仁苷和芍藥苷的含量

劉立新，柳兵 （吳都醫藥牛尾巴大藥房，湖北 鄂州436054）

談發明 （宜昌市中醫院，湖北 宜昌443003）

麻仁丸由火麻仁、大黃、蘆薈、白芍、枳實、苦杏仁等中藥組成，具有瀉熱通腸、涼血解毒、逐瘀通經之功效［1］。苦杏仁苷是苦杏仁的主要有效成分，苦杏仁苷在經酶作用分解形成氫氰酸的同時，也產生苯甲醛，后者可抑制胃蛋白酶的活性，從而影響消化功能［2］。芍藥性微寒、味苦酸，有養血柔肝、緩中止痛、斂陰收汗的功能，芍藥苷是芍藥的主要有效成分之一［3］。筆者參照有關文獻，采用反相高效液相色譜法 （reversed phase high-performance liquid chromatography，RP-HPLC），建立麻仁丸中苦杏仁苷和芍藥苷的含量測定方法，為麻仁丸的質量控制和評價提供一定的科學依據。

1 儀器與試劑

Dionex-P680液相色譜儀，UVD170U檢測器，四元低壓梯度泵，HKZJZ2830171BAF戴安變色龍高效液相數據處理系統，美國戴安公司；5200H型超聲波清洗器，上海科導超聲儀器有限公司；SZ-97自動三重純水蒸餾器，上海亞榮生化儀器廠；AT-201電子分析天 （d=0.01mg，瑞士）；麻仁丸 （按2010版藥典自制）；苦杏仁苷對照品，供含量測定用，中國藥品生物檢定所，批號：110820-201305；芍藥苷對照品，供含量測定用，中國藥品生物檢定所，批號：736-200320；乙腈為色譜純；水為重蒸餾水 （自制）；甲酸等其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 溶液的配制

2.1.1 對照品溶液的制備 取經五氧化二磷減壓干燥器中干燥36h的苦杏仁苷對照品和芍藥苷對照品適量，分別精密稱定，加甲醇制成每1ml含苦杏仁苷和芍藥苷各100μg的溶液。

2.1.2 麻仁丸供試品溶液的制備 參照文獻 ［4-5］。

2.1.3 陰性對照溶液的制備 按麻仁丸處方比例和工藝，制備不含苦杏仁和白芍的陰性樣品。按供試品溶液制備方法制得陰性對照溶液。

2.2 色譜條件

色譜柱：Aglient TC-C18柱 （4.6mm×250mm，5μm）；流動相：乙腈-0.1% （11：89）；流速：1.0ml／min；柱溫：30℃；檢測波長：221nm［6-7］。

2.3 系統適用性試驗

取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μl進樣，按照上述色譜條件測定，記錄色譜圖。結果：理論板數按苦杏仁苷峰計算不低于7000，按芍藥苷峰計算不低于10000，苦杏仁苷和芍藥苷峰與其它雜質峰分離度均大于1.5，峰形對稱，陰性無干擾。對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液在此色譜條件下的色譜圖見圖1～3。

圖1 對照品溶液色譜圖

圖2 供試品溶液色譜圖

圖3 陰性對照溶液色譜圖

2.4 線性關系考察

制備濃度為200μg／ml的苦杏仁苷和200μg／ml的芍藥苷的混合對照品溶液，精密吸取上述對照品溶液1、2、4、6、8、10ml分別置于10ml容量瓶中，加入甲醇定容，搖勻。分別精密吸取上述對照品溶液10μl，各進樣2次，按上述色譜條件測定。以峰面積平均值為縱坐標 （Y），以進樣量為橫坐標（X）繪制標準曲線。結果表明，苦杏仁苷在0.2～2.0μg范圍內線性關系良好，回歸方程為Y=0.1955X+6.7365，r=0.9996；芍藥苷在0.2～2.0μg范圍內線性關系良好，回歸方程Y=0.1256X+7.5868，r=0.9993。

2.5 精密度試驗

精密吸取苦杏仁苷、芍藥苷對照品溶液10μl，連續進樣6次，按上述色譜條件測定，結果苦杏仁苷的峰面積RSD為0.31%，芍藥苷的峰面積RSD為0.45%。表明精密度良好。

2.6 穩定性試驗

取同一供試品溶液，按上述色譜條件，分別于0、2、4、8、12、24h測定峰面積。苦杏仁苷的峰面積RSD為0.60%，芍藥苷的峰面積RSD為0.98%，試驗結果表明，供試品溶液在24h內穩定性良好。

2.7 重復性試驗

按照含量測定的方法，對同一樣品測定5次，結果苦杏仁苷和芍藥苷含量平均值分別為2.2387mg／g、2.2278mg／g，RSD分別為1.3%、1.1%。

2.8 加樣回收試驗

取已知含量的麻仁丸樣品 （苦杏仁苷含量為2.2387mg／g、芍藥苷含量為2.2278mg／g）6份，每份約0.7g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，分別精密加入對照品溶液15ml，精密加甲醇35ml，按2.1.2項下供試品溶液制備方法制備，分別按上述色譜條件測定。結果見表1、2，表明本法苦杏仁苷和芍藥苷回收率為分別為99.36%、99.16%，RSD分別為1.3%、2.0%。

表1 苦杏仁苷加樣回收試驗結果

表2 芍藥苷加樣回收試驗結果

2.9 含量測定

按上述含量測定方法，對3批麻仁丸的含量進行測定，外標法計算樣品中苦杏仁苷和芍藥苷的含量，結果見表3。

表3 麻仁丸中苦杏仁苷和芍藥苷的含量測定結果

3 討論

本試驗用RP-HPLC法，流動相為乙腈-0.1%甲酸 （11∶89），可使苦杏仁苷和芍藥苷有良好的分離度。選擇測定波長時，苦杏仁苷最大吸收波長208nm，而芍藥苷為230nm，我們選定217、219、211、213nm4個波長進行比較，經試驗確定221nm時苦杏仁苷和芍藥苷的檢測靈敏度比較好。此方法簡便、準確、重現性好、精密度高，陰性無干擾，可作為麻仁丸中苦杏仁苷和芍藥苷含量測定的方法。

［1］劉晉華，蔡大偉，屈梅，等 .復方麻仁丸質量標準的研究 ［J］.中國藥師，2004，7（10）：778-780.

［2］邢國秀，李楠，楊美燕，等 .天然苦杏仁昔的研究進展 ［J］.中成藥，2003，25（12）：1007-l009.

［3］胡南，許惠玉，陳志偉，等 .芍藥苷的藥理學研究進展 ［J］.齊齊哈爾醫學院學報，2007，28（9）：1093-1095.

［4］夏其樂，王濤，陸勝民，等 .苦杏仁苷的分析、提取純化及藥理作用研究進展 ［J］.食品科學，2013，7（16）：1-9.

［5］李坤平，李康，孔繁晟，等 .正交設計研究白芍總苷的超聲提取工藝 ［J］.食物與生物技術學報，2009，28（4）：201-504.

［6］閆正國，楊壘.HPLC測定十味扶正膠囊中芍藥苷的含量 ［J］.中國現代醫藥，2007，9（5）：24-26.

［7］左力.HPLC法測定補脾益腸丸中苦杏仁苷含量 ［J］.遼寧中醫藥大學學報，2013，15（7）：78-79.