Fascin在膀胱尿路上皮癌中的表達及意義＊

孟淑娟，陳小君，尹 豐，王 勇，于永利

（唐山鋼鐵集團有限公司醫院1．病理科，2．泌尿科；3．曹妃甸區工人醫院，河北 唐山063000）

膀胱癌是泌尿系統最常見的惡性腫瘤，90%以上為膀胱尿路上皮癌，其生物學行為表現為易發、多發和浸潤轉移。復發和浸潤轉移是膀胱癌治療失敗的主要原因。腫瘤細胞運動能力的增高是實現浸潤和轉移的前提。侵襲的腫瘤細胞常表現出特殊的形態特征［1］。Fascin蛋白是細胞骨架蛋白的一種，能與F－肌動蛋白緊密結合，與細胞運動能力和細胞間的相互作用密切相關，其作為結合細胞突起作用的結合蛋白，來輔助完成細胞附著、細胞之間相互作用和細胞移動的功能［2］。

1 對象與方法

1．1 研究對象 收集2009年9月～2012年10月在唐鋼醫院泌尿外科手術切除并保存完好的石蠟標本：膀胱尿路上皮癌109例，均為初發病例，術前均未接受放、化療；年齡55～85歲，中位年齡68歲，其中男性78例，女性31例。腺性膀胱炎20例，年齡38～74歲，中位年齡58歲，其中男性15例，女性5例。對照組為10例癌旁膀胱粘膜組織，均取自開放性手術斷端，距腫瘤邊緣大于5cm，經病理確診無癌組織浸潤。所有病例的臨床病理資料完整，經高年資病理醫師復查H．E切片，證實病理診斷，并確定每例膀胱尿路上皮癌的組織學分級及臨床分期。根據1973年WHO公布的膀胱惡性腫瘤病理分級方法：G1：28例，G2：45例，G3：36例。臨床分期根據UICC－TNM標準：淺表型（Tis～T1）：63例，浸潤型（T2～T4）：46例。腫瘤單發35例，多發74例。術后證實18例伴有淋巴結轉移，91例無淋巴結轉移。

1．2 實驗試劑 鼠抗人Fascin單克隆抗體（工作液，克隆號FCN01），S－P通用二抗試劑盒，DAB顯色劑均購自上海太陽生物科技有限公司。

1．3 試驗方法

1．3．1 采用免疫組化S－P法染色 組織經10%中性甲醛固定，石蠟包埋，切成厚度4μm組織切片；將組織切片貼附于經多聚賴氨酸處理的載玻片上，并經60℃烤2小時。實驗步驟嚴格按試劑說明書進行。陽性對照用脾組織切片，BPS代替一抗作陰性對照。

1．3．2 免疫組化結果判定 所有組織切片的評分由兩名病理醫師在不知情的前提下各自獨立進行，遇到結果不一致時，兩名醫師討論，得出綜合分析意見。

Fascin表達陽性信號為棕黃色至棕褐色顆粒，定位于細胞胞漿和（或）胞膜，依據染色強度和陽性細胞計數得分相乘評分。①染色強度計分標準：用以確定為陽性的乳腺癌標本的反應強度作為對照，無色為0分、表達強度弱于它為1分、與其相同為2分、比之強為3分。②陽性細胞計數：普通光鏡相同放大倍數下計數陽性細胞數，少于25%為1分、25%～50%為2分、51%～75%為3分、75%以上為4分。兩項得分相乘分為4個級別：0分（－）、1～4分（＋，弱陽性）、5～8分（＋＋，中度陽性）、9～12分（＋＋＋，強陽性）。統計學分析時，（＋）以上視為陽性。

1．4 統計學分析 運用SPSS 11．5統計軟件，數據處理采用χ2檢驗和Spearman相關性檢驗，小樣本資料采用Fisher精確概率檢驗法，P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果

Fascin在膀胱癌旁粘膜中無表達，20例腺性膀胱炎中2例（10%）表達弱陽性，其余表達陰性；109例膀胱尿路上皮癌中18例（16．5%）表達陰性，91例（83．5%）表達陽性：其中39例（35．8%）為弱陽性，35例（32．1%）為中度陽性，17例（15．6%）為強陽性。膀胱癌旁粘膜組與腺性膀胱炎組表達差異無顯著性（P＞0．05），膀胱癌旁粘膜組與膀胱尿路上皮癌組、腺性膀胱炎組與膀胱尿路上皮癌組比較，差異有顯著性（P＜0．05），見表1，圖1。

表1 Fascin在膀胱癌旁粘膜、腺性膀胱炎及膀胱尿路上皮癌中的表達Table 1 The expression of fascin in bladder cancer adjacent mucosa，cystitis glandular and bladder urothelial carcinoma

圖1 Fascin在膀胱尿路上皮癌中的表達（IHC×200）Fig．1 Negative expression of fascin in bladder urothelial carcinoma（IHC×200）

Fascin在不同組織學分級的膀胱尿路上皮癌中的表達陽性率分別為：G1：71．4%（20／28），G2：80．0%（36／45），G3：97．2%（35／36），Fascin的表達陽性率在不同的組織學分級中，總體有顯著性差異（P＜0．05）。不同臨床分期Fascin表達的陽性率為淺表型（Tis～T1）74．6%（47／63），浸潤型（T2～T4）95．7%（44／46），Fascin在膀胱尿路上皮癌淺表型（Tis～T1）及浸潤型（T2～T4）分組間陽性率的差異顯著（P＜0．05）。Fascin有淋巴結轉移組陽性率為100%（18／18）、無淋巴結轉移組為80．2%（73／91），其陽性率有顯著性差異（P＜0．05），見表2。

表2結果顯示，在膀胱尿路上皮癌的患者中，Fascin的表達與性別、腫瘤數目等臨床病理特征無關，而與腫瘤臨床分期和組織學分級則呈正相關。隨著膀胱尿路上皮癌的臨床分期和組織學分級的增高，腫瘤細胞中Fascin表達增強，有淋巴結轉移的Fascin的表達明顯高于無淋巴結轉移的。

表2 膀胱尿路上皮癌中Fascin的表達與臨床病理特征的關系Table 2 The relationship between expression of Fascin in bladder urothelial carcinoma and clinical pathological parameters

3 討論

Fascin蛋白是細胞骨架蛋白的一種，分子量為55kD，由Bryan等［3］首先在海膽卵母細胞胞質中發現，其結構獨特、進化保守，廣泛存在于無脊椎動物與脊椎動物之中。Fascin在正常上皮細胞中不表達或較低，而在骨骼肌和平滑肌細胞、樹突細胞、神經元和神經膠質細胞、血管內皮細胞等一些特殊的細胞中高表達［4］。研究發現在人體多種上皮來源的腫瘤細胞中出現Fascin的表達上調，并與這些腫瘤的高病理分級和臨床分期及侵襲轉移等相關［5～8］。因此，在上皮惡性腫瘤中Fascin的表達上調是一種普遍現象，與腫瘤的惡性生物學行為存在一定的關系。mi－133a和miR－145存在FSCN1mRNA 的靶序列，可直接與FSCN1mRNA結合，從而抑制FSCN1mRNA和蛋白的表 達［9］。 實 驗 發 現 轉 染 miR－133a、mi－145 和 si－FSCN1的膀胱癌細胞活動力明顯被抑制，同時Fascin在侵襲性膀胱癌中的表達明顯高于非侵襲性膀胱癌。有研究表明Fascin蛋白在正常膀胱黏膜中不表達，在膀胱良性病變如膀胱炎（腺性、囊性）、經典的外生性乳頭狀瘤、內翻性乳頭狀瘤中表達無增加；但在表淺乳頭狀膀胱癌中42%呈片狀或弱彌漫表達、浸潤性膀胱癌95%呈強彌漫分布；并且Fascin表達增強常常出現在微浸潤前沿腫瘤細胞中；這些均提示Fascin表達增強與膀胱癌侵襲力增加具有一致性［10，11］。Fascin在膀胱癌的浸潤中發揮著重要作用，Fascin在浸潤性尿路上皮癌中的表達明顯高于非浸潤性尿路上皮癌，但對于腫瘤的組織學分級的關系還需要進一步研究。

本實驗說明Fascin的表達可能對膀胱癌的侵襲和淋巴結轉移具有一定的促進作用，Fascin的高表達使患者更易出現淋巴結的轉移，膀胱癌分級越高，患者預后越差。這與以往Fascin蛋白在上皮性腫瘤組織中的研究結果一致。

研究證實Fascin的過表達會導致腫瘤細胞增殖周期變短，細胞膜突起增多，細胞間連接消失，粘附力下降，細胞運動能力增強［12］。綜合分析Fascin在膀胱尿路上皮癌中表達情況，發現在組織學分級較高的腫瘤中以及腫瘤浸潤邊緣細胞Fascin蛋白染色較強，腫瘤分化越低其染色強度越強。同時可見偽足樣突起的細胞，淋巴結轉移組中該腫瘤細胞數較多。分析其原因，可能為Fascin表達使腫瘤細胞的細胞骨架重排，細胞膜突起增多，使其具有較強的侵襲、轉移能力，與高級別腫瘤更具有侵襲性，更易發生轉移相關。在試驗中，在乳頭狀尿路上皮癌中，分化好的乳頭中央軸心血管染色陽性，而緊鄰其膀胱癌細胞染色陽性，但是乳頭邊緣的細胞卻染色陰性，形成明顯的對比。分析原因，可能與靠近乳頭軸心的腫瘤細胞侵襲性較強有關，具體機制和原因有待進一步研究。

在上皮性來源的腫瘤中Fascin表達上調具有普遍性，但陽性表達率有明顯差異，在乳腺癌中陽性率只有16%［12］，而在非小細胞肺癌中陽性率為98%［13］。Fascin的高表達與腫瘤的惡性程度和患者預后有一定的聯系，但其調節通路還在進一步研究中。有觀點認為不同組織來源的腫瘤在發生機制上可能存在差異，同一腫瘤也可能受多種途徑調節，但Fascin表達與各腫瘤不同的發生機制存在或多或少的聯系。

4 結論

Fascin蛋白在不同臨床分期和組織學分級及有無淋巴結轉移的膀胱癌中的陽性率存在差異，本研究結果提示可將其作為預測膀胱癌惡性程度及患者預后的一種指標。

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