太陽病(風寒表證)“欲解時”與白介素節律變化的實驗研究?

李 杰，陸東明，吳 萍，王仁媛，張發斌，張廣梅，劉占厚，趙協慧，陳湘紅

(青海大學醫學院，西寧 810001)

中醫時間醫學內容十分豐富，很多中醫經典理論經現代研究證實是有科學根據的。我們通過實驗研究表明，太陽病(風寒表證)“欲解時”與白介素存在著節律性變化，其對探討太陽病“欲解時”與人體免疫節律變化的內在物質基礎和聯系、闡釋病情變化與人體內在節律之間的關系都具有重要的意義，同時提供了增強擇時治療效果最佳時機的理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 昆明種小鼠1152只，雌雄各半，體質量19.6～22 g，購自蘭州大學醫學院動物實驗中心(蘭大動檢(08)第034號)。

1.1.2 試劑 小鼠IL-1、IL-2、IL-4、IL-10 ELISA定量檢測試劑盒96T，購自深圳達科為生物技術有限公司。

1.1.3 儀器 RT-2100酶標儀與洗板機(購自深圳雷杜公司)；TDL5M低速冷凍離心機；恒溫箱PY-2型。

1.2 方法

1.2.1 動物分組與造模 昆明種小鼠1152只，雌雄各半，體質量19.6～22 g，置于恒溫20±2 ℃、相對濕度40±5%的環境中，適應性喂養5 d后，按照雌雄各半隨機分為正常對照組576只、模型組576只。然后將各組動物按照雌雄各半再隨機分成16組，每組36只。模型組在文獻報道[1]“小鼠風寒表證”模型制作方法的基礎上，結合預實驗動物風寒表證模型研究的成功經驗，每5～6只小鼠放置1個鼠籠，放置溫度2～5 ℃、濕度60%、風力4～5級的自然光線環境中飼養7 d，小鼠自由活動攝食、飲水進行動物造模。造模組普遍出現蜷臥或團縮聚臥狀態、活動較少、弓背聳毛、打噴嚏、流涕、進食明顯減少、飲水增多、肛溫升高、體質量下降，即確認模型復制成功。對照組不做任何處理，在18～21 ℃室溫環境中飼養7 d。

1.2.2 檢測方法 (1)血清制備：造模成功后連續7 d，從對照組和模型組隨機抽取2組動物，每天分別于11∶00-13∶00和23∶00-1∶00均以眼球取血法獲取造模組與對照組小鼠全血2 ml，其中1 ml在4 ℃條件下離心15 min(3000 r/min)制備血清，獲取造模成功后連續7 d時的小鼠血清標本，并低溫保存備用以行各免疫指標測定,另1 ml全血測定外周血細胞計數。

標準品的稀釋、加樣與測定:根據試劑使用說明書的要求，分別配置小鼠IL-1、IL-2、IL-4、IL-10標準溶液，并在板孔內稀釋為不同濃度梯度，復孔制作標準曲線。設空白和質控復孔，樣品孔分別各加小鼠血清100 ul和生物素標記抗體50 ul，37 ℃溫育90 min后分別洗滌5次。每孔再加入親和素-HRP標記物50 ul，37 ℃溫育30 min后洗滌5次。然后分別加入TMB顯色劑，37 ℃溫育20 min后加終止液，酶標儀450 nm分別測取OD值并在標準曲線上查出其濃度。

2 結果

2.1 2組造模小鼠IL-1節律性變化

圖1顯示，實驗結果顯示，對照組、模型組IL-1存在晝低夜高的節律性變化；模型組IL-1表達與對照組節律基本平行一致，但在疾病期表達增強，尤以疾病第3～4天最為顯著。

2.2 2組造模小鼠IL-2節律性變化

圖2顯示，模型組和對照組IL-2的表達存在明顯的晝夜節律性，除了高峰外(第3天)表現為夜間高、白晝低的特點，2組IL-2的表達節律基本相一致；模型組IL-2的表達高于對照組，尤其模型組在發病初期(1～4 d)IL-2增高得更為明顯(P<0.01)，5 d后基本與對照組相一致。

2.3 2組造模小鼠IL-4節律性變化

圖3顯示，正常組小鼠體內IL-4水平變化呈現出一定的節律性。首先是其表達白天低，夜間高，表現出一定的晝夜節律性規律；其次連續7 d的觀察發現，其分泌量在欲解時初期逐步上升，3～4 d達到高峰，以后逐漸下降，表現出一定的周期節律性規律。模型組小鼠體內IL-4水平變化與正常組呈現同步的節律性變化。

2.4 對照組與模型組造模小鼠IL-10節律性變化

圖4顯示，小鼠IL-10晝夜表達有不同；總體水平表現為對照組存在晝低夜高的自然節律變化(P<0.01)，模型組表達為晝高夜低的節律變化(P<0.01)。

圖1 2組1周內IL-1含量變化情況

圖2 2組1周內IL-2含量變化情況

圖3 2組1周內IL-4含量變化的情況

圖4 2組1周內IL-10含量變化情況

3 分析與討論

實驗結果顯示，模型組與對照組小鼠外周血液中IL-1、IL-2、IL-4、IL-10的表達存在明顯的晝夜節律變化規律，其峰值在夜間陽氣極衰之時(23點)，谷值在白天陽氣最盛之時(11點)，其意義表現如下。

3.1 闡釋 “正氣”與人體物質基礎相關的內在聯系

中醫學很早就認識到人體原本就具有對抗疾病的自然免疫力，將之稱為正氣。它代表著人體對外界環境的適應能力、抗病能力以及康復能力，這與免疫系統的防御、監視、自穩的三大功能相一致。從功能而言，免疫防御抵抗病原微生物的感染與中醫正氣衛外功能；免疫自穩、清除自身抗原、穩定內環境與正氣調節陰陽，維持“陰平陽秘”；免疫監視與正氣協調臟腑經絡氣血，免生積聚的作用是相似的，因此說人體正氣包含免疫系統物質和功能概念。

太陽病“欲解時”為巳午未，此時為正午前后，白晝(11時)自然界陽氣最旺，試驗結果也顯示白介素含量表達最低，實驗小鼠體內免疫力最強，炎癥反應最輕，正氣勝邪，鼓邪外出，病情減輕，病勢緩解，故太陽病欲解于晝時，其病變在晝夜中陽氣最隆盛時得自然界之陽氣和人體陽氣活動節律高峰時的資助而欲解，揭示了太陽病(風寒表證)“欲解時”與人體免疫節律的內在物質基礎和聯系。

3.2 揭示病情變化與人體內在節律間關系

實驗小鼠在白晝“欲解時”白介素含量表達最低，表現炎性反應輕，與臨床患者的外感癥狀如鼻塞、流涕、頭痛、身痛等有所減輕一致。此為正氣驅邪外出、正勝于邪的表現；而與之相對的位置上為亥子丑，夜半前后陽氣入里潛藏，陰氣在外最盛，正不勝邪，太陽病(風寒表證)的炎性反應較重。再加之太陽經病本來又多是表寒證，在陰氣的作用下必然會使病情進展，病勢加重，在臨床相應地表現為外感癥狀晝輕夜重。故《靈樞·順氣一日分為四時》指出：“夫百病者，多以旦慧、晝安、夕加、夜甚……朝則人氣始生，病氣衰，故旦慧；日中人氣長，長則勝邪，故安；夕則人氣始衰，邪氣始生，故加；夜半人氣入臟，邪氣獨居于身，故甚也。”“人氣”屬于人體正氣的范疇，有人認為“人氣”就是“陽氣”[2]，因為陽氣有抗邪的作用，故臨床表現為旦慧、晝安、夕加、夜甚。由此可以看出，由太陽病(風寒表證)“欲解時”與白介素夜高晝低的節律變化，可準確判斷病情的輕重和病勢的發展。

3.3 提供增強擇時治療效果最佳時機的理論依據

疾病的“欲解時”非必解時，只說明疾病有解除的可能但非必愈。如果欲解，說明人體正氣較盛，邪不勝正，加上治療及時恰當，再得天時的幫助，其病痊愈。故臨床上醫生當借助天地陰陽之氣與人體陰陽之氣相應之時，藥易以入，假天地陰陽之氣而行人身陰陽之氣御邪外出之功，確定逐時分治之法，因勢利導，使病易以解。時間藥理學的研究也證明，藥物作用的時間節律性是普遍存在的，這主要與機體生理功能的節律變化有關。由于機體的生物系統內不斷發生節律性的變化，因而在不同的晝夜時相內，機體在生物化學方面的反應也不同。所以說，機體對不同時間所給予的相同刺激反應不同；同一種藥物、同樣的劑量，在不同的時間內對機體所起的作用也不同，這就是“藥物易感性節律”。鑒于這個觀點，通過我們的實驗研究，臨床上應用太陽病“欲解時”的理論擇時治療有以下兩方面的意義。

3.3.1 把握時機，因勢利導 疾病可以擾亂體內的生理節律，也可以使這些節律的出現提前或推遲。因此從這種意義上說，疾病的過程是由生理節律到病理節律的轉化過程。故而如果能在機體功能相對旺盛的時候用藥，就能借助機體自身的抗病能力，在祛除外邪的同時，造成一種與機體“自由節律”樣的同步人工漲落，從而誘導其重新恢復疾病前的正常節律，重新進入有序的陰陽消長轉化軌跡，使疾病向痊愈的方向發展。“太陽病欲解時，從巳至未上”。臨床治療太陽病就應選擇在上午9～11時使用解表藥。此時白介素含量表達也低，機體抗病能力強，同時陽氣浮盛于體表，抗邪力量強，腠理易開，有助于驅散表邪，藥物可憑借陽氣升浮外達之際使疾病汗出而愈，所以選擇此時服藥治療，可以增強藥物的療效。臨床已經有午前服用桂枝湯治療太陽病以提高療效的報道。如張玉才[3]用桂枝湯分別在上午11時和晚上20時服藥治療太陽中風證，結果上午11時服藥組效果與時間有明顯的相關性，；而20時服藥組效果與時間關系不大。崔慧娟[4]認為，正午服用桂枝湯治療發熱患者效果明顯。

3.3.2 提高臨床療效，減少毒副作用 太陽病在“欲解時”機體功能相對旺盛，對藥物的反應較敏感，如果選擇在此時給藥，就可使藥物發揮更大的作用；對于毒副作用較強的藥物，就可適當減少劑量，減輕毒副作用。有學者通過實驗研究也表明[5]，桂枝湯解熱作用最明顯的為白晝，鎮痛作用最明顯的也在白晝，而毒性作用主要在夜間。

綜上所述，人體生理結構及其機能活動與天地自然相應，而自然界固有的時序特點，也必然會對人體之生理、病理構成影響，并直接與疾病診治和預防相關。開展中醫理論的現代研究來分析人體生理、病理與時序、節律的相關性，并進而探索相應的診斷、治療和預防方法是非常必要的。

[1] 楊士友,孫備,裴月梅.風寒表證和寒凝血瘀證動物模型的研究[J].中國中醫基礎醫學雜志,1997,3(1)：54-56.

[2] 胡劍北,胡仲英,胡劍東,等.中西醫結合時間醫學[M].合肥:安徽科學出版社,2008:75.

[3] 張玉才.談桂枝湯的服藥時間[J]．山東中醫雜志,1987,6(5)：6.

[4] 崔慧娟,翟雙慶．依時辰治病的臨床應用[J]．河南中醫,1992,12(4):179-180.

[5] 胡劍北,胡仲英,胡劍東,等.中西醫結合時間醫學[M].合肥：安徽科學出版社,2008:282.