臍血間充質干細胞移植治療失代償期肝硬化的臨床療效觀察

公建莊，杜晨旭，陳雅寧，韓雙印，張延瑞

肝硬化是一種常見病、多發病，進入失代償期后可逐漸發展為肝功能衰竭。原位肝移植是目前行之有效的肝硬化治療方法，但因供體局限、費用昂貴、移植后需長期后續治療等原因使得僅有一小部分肝硬化患者的生命能夠得到挽救。隨著科學技術的進步，干細胞移植治療肝硬化取得了長足發展。臍血間充質干細胞作為一種多能干細胞[1]，具有橫向分化能力，在一定條件下可以分化為肝細胞[2-4]，且臍血來源充足、采集方便、免疫原性弱、擴增能力強，為失代償期肝硬化的治療開辟了新途徑。本研究旨在探討臍血間充質干細胞移植治療失代償期肝硬化的臨床療效。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年8月—2011年2月在鄭州大學附屬鄭州市中心醫院就診的失代償期肝硬化患者46例，采用隨機數字表法分為治療組24例，對照組22例。治療組中男17例，女7例；年齡32～74歲，平均48歲；病程10～40年，平均23年；肝功能Child-Pugh分級B/C級。對照組中男14例，女8例；年齡30～71歲，平均46歲；病程10～38年，平均25年；肝功能Child-Pugh分級B/C級。兩組患者性別、年齡、病程、肝功能Child-Pugh分級間具有均衡性。所有患者有或出現過腹腔積液，并經B超或CT檢查等提示失代償期肝硬化、門靜脈高壓、脾大、腹腔積液等，排除肝占位性病變患者。本研究在征得所有患者及家屬知情同意后進行，詳細告知其治療的獲益和風險，并簽訂知情同意書。

1.3 治療方法 對照組患者給予常規治療，即還原性谷胱甘肽(古拉定，意大利斯德大藥廠生產)1.2 g加入5%葡萄糖溶液100 ml靜脈滴注，1次/d，復方二氯醋酸二異丙胺注射液(甘樂，丹東醫創藥業有限公司生產)80 mg加入5%葡萄糖溶液100 ml靜脈滴注，1次/d，不應用利尿劑、清蛋白及血漿，限鈉限水。治療組在常規治療基礎上加用臍血間充質干細胞移植治療，移植術前檢測血常規、凝血四項、凝血因子Ⅷ、凝血因子Ⅸ、甲胎蛋白(AFP)、肝功能；移植途徑：肝固有動脈途徑14例，由介入科醫生經股動脈插管至肝固有動脈，將臍血間充質干細胞經微量泵緩慢泵入，泵入完畢后拔管，按壓穿刺點，彈力繃帶加壓包扎，穿刺側髖關節制動24 h；外周靜脈途徑10例，采用輸血器將臍血間充質干細胞緩慢輸入。

1.4 觀察指標 觀察兩組患者治療前，治療1、2、4、8、12周時血漿清蛋白、前清蛋白、總膽紅素水平變化及不良反應發生情況，并于治療前、治療12周時對治療組患者進行SF-36量表(中文版)評分[5]，該量表包括軀體功能、軀體角色、肢體疼痛、總的健康狀況、活力、情緒角色、社會功能、心理衛生共8大領域，各領域得分為0～100分，其中前4個領域為軀體功能，后4個領域為心理功能。由于各領域包含的條目不同，為便于比較引入轉換公式[6]，各領域終得分=(實際初評分-理論最低初評分)×100/(理論最高初評分-理論最低初評分)。

圖1 臍血間充質干細胞表型分析

Table1 Comparison of albumin，prealbumin，total bilirubin levels between the two groups before and after treatment

組別例數 清蛋白(g/L)治療前 治療1周 治療2周 治療4周 治療8周 治療12周對照組2228 59±5 0428 84±4 2530 42±3 8128 63±3 1130 72±3 3431 18±3 12治療組2428 72±5 2829 80±4 5531 10±3 9731 77±3 9432 61±3 6233 31±3 22t值0 0850 7381 7212 3793 5514 322P值0 9320 4650 9300 0380 0180 004組別 前清蛋白(mg/L)治療前 治療1周 治療2周 治療4周 治療8周 治療12周對照組92 11±34 0893 84±33 3596 66±33 0499 76±33 06103 01±33 62105 33±33 26治療組91 33±34 8789 77±34 2398 01±33 26103 22±33 68108 34±35 50112 87±34 03t值0 0771 3220 1362 1794 2886 870P值0 9390 1260 8920 0460 0340 017組別 總膽紅素(μmol/L)治療前 治療1周 治療2周 治療4周 治療8周 治療12周對照組53 46±26 9448 21±23 9042 44±23 3834 78±18 4928 49±14 2720 00±7 18治療組52 67±28 2157 54±27 5440 22±21 8832 22±21 8824 33±8 9717 67±6 63t值0 0974 1440 3330 4271 0581 144P值0 9230 0010 7410 6720 3900 259

注：對照組治療1周、治療組治療8周時各有1例患者失訪

表2 治療組患者治療前后SF-36量表(中文版)評分比較分)Table 2 Comparison of SF-36 Scale scores before and after treatment in the treatment group

2 結果

2.1 血漿清蛋白、前清蛋白、總膽紅素水平 兩組患者治療前，治療1、2周時時血漿蛋白、前清蛋白水平比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；治療組治療4、8、12周時血漿清蛋白、前清蛋白水平高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)；兩組患者治療前，治療2、4、8、12周時總膽紅素水平比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；治療組治療1周時總膽紅素水平高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05，見表1)。

2.2 SF-36量表(中文版)評分 治療后，治療組患者軀體功能、肢體疼痛、總的健康狀況、活力、社會功能、心理健康領域評分高于治療前，差異均有統計學意義(P<0.05)，且均有臨床和社會意義；而軀體角色、情緒角色評分治療前后比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，亦無臨床和社會意義(見表2)。

2.3 不良反應 治療組患者均移植成功，其中3例移植術后出現低熱，體溫未超過38 ℃，未予特殊處理，嚴密觀察，體溫自降；兩組患者均未出現皮疹、惡心、出血、感染等不良反應。

3 討論

臍帶血是嬰兒出生后留在臍帶和胎盤中的血液，含有豐富的干細胞，具有多向分化潛能[7]。2000年Erices等[8]將臍帶血中分離出來的單核細胞進行體外培養并發現間充質干細胞。2002年Schwartz等[9]研究發現，臍血間充質干細胞在體外有著類似骨髓間充質干細胞的生長特征、形態和表面相關抗原。Danet等[10]研究證實，臍血間充質干細胞可以分化為肝細胞，預示著臍血間充質干細胞用于治療肝臟疾病的可能。2003年Kakinuma等[11]研究證實，臍血間充質干細胞可以誘導分化為肝移植細胞來源的肝樣細胞，這就為臍血間充質干細胞移植治療肝硬化打下了理論基礎，展示了良好的應用前景。

臍血間充質干移植細胞治療失代償期肝硬化的作用機制主要有以下4個方面：(1)在肝損傷時，體內微環境中的細胞因子(生長因子)或應激(炎性)信號分子刺激或誘導間充質干細胞轉化為肝細胞或肝樣細胞而行使正常肝細胞的功能；(2)在移植間充質干細胞后可以誘導機體分泌生長因子，這些生長因子刺激肝臟產生新的肝細胞；(3)間充質干細胞通過誘導“歸巢受體”而將干細胞融合入肝臟，進而使干細胞轉化為肝樣細胞而發揮作用；(4)間充質干細胞與體內的肝細胞“融合”后導致基因重排而行使肝細胞的功能[12-14]。

肝硬化是臨床常見病、多發病，發展到失代償期后病死率較高，但傳統的治療手段已顯得捉襟見肘，失代償期肝硬化的治療已成為醫學界面臨的一個嚴峻課題。隨著對肝臟損傷和再生機制的深入研究，國內外大量基礎研究已證實臍血間充質干細胞能有效地改善肝功能，其在失代償期肝硬化的治療中起著重要作用。

本研究結果顯示，治療組治療1周時血漿總膽紅素水平較對照組升高，治療4、8、12周時血漿清蛋白、前清蛋白水平亦較對照組升高，治療組患者治療后軀體功能、肢體疼痛、總的健康狀況、活力、社會功能、心理健康領域評分均高于治療前，并均有臨床和社會意義，而兩組患者在治療過程中均未出現皮疹、惡心、出血、感染等不良反應。表明臍血間充質干細胞移植治療失代償期肝硬化安全有效，能有效改善患者肝功能和生活質量，延緩其病程進展，是一種全新的治療方法[15-16]。相對于其他來源的間充質干細胞，臍血間充質干細胞來源更廣、易于獲得、取材方便、擴增迅速，且無倫理道德的局限，具有其他來源的間充質干細胞不可比擬的優勢及廣闊的應用前景。但本研究樣本量較少，觀察時間較短，臍血間充質干細胞移植治療失代償期肝硬化的遠期療效還有待于進一步觀察；且由于研究條件限制，臍血間充質干細胞移植的部位及途徑選擇、移植施放的最佳劑量、最佳療程、分離培養及大量擴增的標準程序、體內良好示蹤劑的尋找、如何提高移植后細胞歸巢率等實際問題還需深入研究。因此，臍血間充質干細胞移植治療失代償期肝硬化最終能否逆轉患者結局還有待進一步研究。

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