生鱉甲與醋鱉甲抗肝纖維化有效部位的HPCE指紋圖譜分析

陳 凱

江蘇省中醫院，江蘇 南京 210029

鱉甲為鱉科動物鱉的背甲，具有軟堅散結、滋陰潛陽以及除蒸退熱功效，常用于治療肝纖維化，入藥一般為醋制鱉甲[1]。中醫認為，生鱉甲具有非常強的潛陽熄風與養陰清熱功效，主要用于虛風內動、內傷虛熱或者熱病傷陰等病癥。

1 實驗材料

5000型BeckmanP/AsystemHPCE儀;FD-1A-50冷凍干燥機;78-1型磁力加熱攪拌器;KQ-250B超聲波清洗器。水為雙蒸水，鱉甲藥材來自浙江衢化醫院，其中所選10批醋鱉甲是根據《中華藥典》由10批生鱉甲炮制而成。

2 方法與結果

2.1 供試品溶液的制備 稱取25g生鱉甲粉，加水200ml進行20min的超聲提取，抽濾，所留殘渣加10ml水，超聲10min，合并濾液，抽濾，冷凍，取凍干粉，加入少量水進行溶解，并放在透析膜中，200ml的純水膜外溶液，2次透析，5h/次，合并膜外溶液，同時冷凍干燥。對5.0mg/ml凍干粉水溶液進行精密稱取，在通過0.22μm的濾膜進行過濾，根據鱉甲供試品相同炮制方法，對醋鱉甲供試品溶液進行炮制。

2.2 有效組分對照組與對照品溶液的制備 從本實驗中鱉甲有效抗肝纖維化物質中所分離出的活性五肽，進行0.1mg/ml濃度水溶液的配制，并將其視為對照品溶液;同時把實驗中藥理篩選與經柱色譜分離出的活性組酚酞，進行0.1mg/ml濃度水溶液的配制，并將其視為有效組分對照組溶液，對兩溶液進行分析對比。

2.3 色譜條件 57cm×75μm的熔融未涂層石英毛細管，49cm的有效長度，100mmol/L優級純三氰甲基氨基甲烷-20mmol/L磷酸氫二鈉的運行緩沖液，18KV的分離電壓，254nm的檢測波長，20℃的柱溫[2]。

2.4 指紋圖譜的測定

2.4.1 生鱉甲有效物質部位HPCE指紋圖譜 通過毛細管區電泳法對供試品溶液進行制備，并根據以上色譜條件對生物鱉有效物質部位HPCE進行測定，對電泳圖進行30min的記錄。對17個共有峰進行標定，指紋圖譜中峰面積較大與較穩定的14號峰屬于參照峰s，對各共有峰保留時間和相對峰面積進行測定。結果發現，17個生鱉甲指紋圖譜共有峰，存在0.94以上的HPCE圖譜相似度。

2.4.2 醋鱉甲有效物質部位HPCE指紋圖譜 采用相同方法對供試品溶液進行制備，并根據以上色譜條件對生物鱉有效物質部位HPCE進行測定，對電泳圖進行30min的記錄。對19個共有峰進行標定，指紋圖譜中峰面積較大與較穩定的15號峰屬于參照峰s，對各共有峰保留時間和相對峰面積進行測定。結果發現，19個生鱉甲指紋圖譜共有峰，存在0.93以上的HPCE圖譜相似度。

對照10批醋鱉甲與生鱉甲指紋圖譜，兩批相似度下降，為0.86-0.93。此外，對照10批生鱉甲與醋鱉甲指紋圖譜，兩批相似度也下降，為0.86-0.92。由此表明，鱉甲醋制前后，其含量與化學成分存在很大差異性。

3 討論

實驗對炮制鱉甲前后的HPCE指紋圖譜進行對比與分析發現，生鱉甲與醋鱉甲抗肝纖維化有效物質部位HPCE指紋圖譜峰面積與指紋峰數量都有非常大的差異性，而且醋鱉甲指紋峰要比生鱉甲多，由此表明，醋鱉甲中含有新活性五肽HGRFG指紋峰，從而闡釋了醋鱉甲抗桿纖維化要比生鱉甲效果好，同時也為醋鱉甲治療肝纖維化提供有效科學依據，為鱉甲醋法炮制機理進行深入探討奠定良好基礎。

[1]高建蓉，張赤志，邵志華，等.鱉甲對肝星狀細胞增殖影響的研究[J].實用醫學雜志，2007，23(11):1618-1620.

[2]陳進文，高建蓉，王光忠，等.鱉甲抗肝纖維化有效物質部位高效毛細管電泳指紋圖譜研究[J].中藥材，2009，32(6):848-851.