時間分辨熒光免疫檢測技術在唐氏篩查中的應用價值

鄧國生，何 芳，李麗麗

（廣西玉林市婦幼保健院，廣西 玉林537000）

為了探討時間分辨熒光免疫檢測技術在唐氏（唐氏綜合征、21－三體綜合征）篩查中的應用價值，使用芬蘭PE公司生產的1420時間分辨熒光測定儀Wallac MultiCalc行唐氏篩查，篩查陽性者部分進行羊水產前診斷胎兒染色體核型，統計分析如下。

1 對象與方法

1.1 對象

2012年1月至2012年11月30日玉林市婦幼保健院圍產保健門診及外院接受唐氏篩查孕婦，年齡20－34歲，孕周15－20＋6周單胎，羊水產前診斷羊膜腔穿刺術孕周18－22＋6周，病人來源于地級玉林市城郊，以及轄區陸川、博白、容縣、北流和興業等縣市區。

1.2 儀器與試劑

唐氏篩查使用芬蘭PE公司生產1420時間分辨熒光測定儀 Wallac MultiCalc、微孔板洗板機－DELFIA Platewash、自動振蕩器－DELFIA Plateshake、hAFP／Free hCGβ二聯篩查檢測試劑盒及LifeCycle 3.0產前篩查風險評估軟件；產前診斷使用美國Forma3111CO2培養箱，美國CHANG MEDIUM○RD和德國Cytogen培養基。

1.3 唐氏篩查方法

抽取孕婦空腹靜脈血2－3ml，自然凝固后，離心分離血清－20℃冰箱保存，實驗室設專人1周集中檢測1次，嚴格按說明書程序進行孕婦血清中hAFP／Free hCGβ濃度檢測，測定結果結合孕婦年齡、體重、有無糖尿病及吸煙史等參數，采用公司風險評估軟件，將檢測結果與相應年齡和孕周實驗項目檢測結果的中位數比較，計算得出中位數倍數（MoM值），根據孕婦信息進行風險校正，最后得出風險值，21－三體綜合征高風險切割值為1∶270，≥1∶270為21－三體綜合征高風險。開放性神經管畸形正常參考值（AFPMoM＜2.5）。唐氏先天愚型高風險孕婦建議做羊水產前診斷，開放性神經管畸形（NTD）高風險孕婦建議B超診斷。對唐氏先天愚型高風險孕婦進行遺傳咨詢，其中511例高風險孕婦接受羊水產前診斷胎兒染色體核型分析。

1.4 羊水產前診斷胎兒染色體核型方法

在B超引導下穿刺針經母腹抽取羊水20ml送檢，培養瓶法染色體分析（320條帶），G顯帶。即抽取羊水20ml分2支15ml離心管，1 500rpm離心10分鐘，在生物安全柜無菌操作，棄上清液后分別加入5ml不同廠家培養基用吸管打勻并分別放入2個培養瓶于2個獨立CO2培養箱中培養，5天后細胞生長良好，即可加秋水仙素3小時收獲、處理、制片及G顯帶。G顯帶分析（320條帶），計數20個中期分裂相，分析5個核型，異常者加倍分析、計數，染色體核型分析按人類細胞遺傳學國際命名體制（ISCN2009）進行，染色體多態應結合C顯帶的方法確定其核型。

2 結果

2.1 唐氏篩查狀況

唐氏篩查總例數12937例，檢出高風險孕婦1087例，篩查陽性率8.40%，其中檢出唐氏先天愚型高風險912例，陽性率7.05%；開放性神經管畸形（NTD）高風險175例，陽性率1.36%。

2.2 羊水產前診斷胎兒染色體核型狀況

511例唐氏先天愚型高風險孕婦接受羊水產前診斷胎兒染色體檢查，胎兒染色體異常核型31例，檢出率為6.07%，其中，2例唐氏綜合征，胎兒核型為47，XY，＋21和46，XY，der（14；21），＋21；2例羅伯遜易位攜帶者，胎兒核型為45，XX，der（13；14）（q10；q10）；1例平衡易位，胎兒核型為46，XX，t（7；14）（q31；q11）；4例嵌合體，胎兒核型為46，XY，t（4；7）（q35；q22），r（13）[26]／46，XY，r（13）[24]、47，XYY[25]／46，XY[25]、47，XX，＋7[2]／46，XX[51]、47，XY，＋9[2]／46，XY[48]；2例 Y 倒位，胎兒核型為46，X，inv（Y）（p11q11）；20例染色體多態，胎兒核型為46，X，Yqh＋1例、46，XX，1qh＋1例、46，XX，9qh＋ 2例、46，XX，inv（9）（p11q13）6例、46，XY，inv（9）（p11q13）4例、46，XX，14pss 1例、46，XX，15pstk＋1例、46，XX，21pstk＋ 2例、46，XX，22pstk＋1例、46，XX，22p＋1例。

3 討論

唐氏綜合征是人類常見的常染色體異常疾病，主要的發病機制是卵母細胞減數分裂不分離，95%的病人受精卵中21號染色體額外復制，還有4%的羅伯遜易位和1%的嵌合現象[1]，本調查表明，2例唐氏綜合征，胎兒核型為47，XY，＋21和46，XY，der（14；21），＋21。張宏紅等[2]報道，貴州省唐氏綜合征222例患者嵌合型占2.25%、易位型占4.05%、單純型占92.35%，合并其他染色體異常者占1.35%。

唐氏綜合征患兒目前無改變染色體異常的有效方法，只能通過篩查找到高風險對象進行產前診斷明確胎兒染色體狀況，對染色體異常建議終止妊娠達到減少出生缺陷、提高出生人口素質的目的[3]，在我國，在分娩前對畸形胎兒進行終止妊娠是合法的。產前診斷是一種創傷高風險醫療行為，存在感染，流產等并發癥的可能，因此，不能替代篩查對所有的孕婦進行產前診斷。

本調查表明，采用1420時間分辨熒光測定儀Wallac MultiCalc行唐氏篩查，可以評估胎兒唐氏綜合征患病風險，可有效降低有創產前檢查胎兒染色體。時間分辨熒光免疫檢測技術在唐氏篩查的應用效果，根據楊延東等[4]報道，采用時間分辨熒光免疫檢測技術在孕中期進行唐氏綜合征篩查，共篩查767例，篩查陽性36例，陽性率為4.69%，其中有32例孕婦自愿接受了產前診斷，有4例證實為唐氏綜合征，有篩查陽性中，有12.50%為唐氏綜合征胎兒。根據楊延東等[5]報道，孕中期時間分辨熒光法檢測血清標志物1976例，唐氏綜合征患病高風險94例，高風險率為4.76%。根據徐聚春等[6]報道，對8864例孕婦采用時間分辨熒光法進行唐氏篩查，唐篩陽性430例，陽性率為4.8%，唐篩陽性中行羊水穿刺365例，21－三體綜合征8例，占唐篩陽性的2.2%。根據王丹等[7]報道，應用時間分辨熒光免疫法對3657例孕中期（14～20＋6周）婦女進行唐氏篩查，唐篩陽性212例，陽性率為5.80%，其中，68例接受產前診斷，確診唐氏綜合征3例，唐氏綜合征檢出率占唐篩陽性的4.41%。大量文獻顯示，時間分辨熒光免疫檢測技術在唐氏篩查中有較好篩查效果，可以評估胎兒唐氏綜合征患病風險，有效降低有創產前檢查胎兒染色體。

[1]彭 薇，王春枝，何璽玉，等.唐氏綜合征篩查研究進展[J].中國優生與遺傳雜志，2012，20（7）：4.

[2]張宏紅，周從容，吳小平，等.貴州省222例唐氏綜合征患者的細胞遺傳學分析[J].中國婦幼保健，2011，26（24）：3766.

[3]羅 艷，符可鵬.唐氏綜合征發病狀況調查分析[J].中國婦幼保健，2009，24（17）：2404.

[4]蔣 瀅，曹 利，向時慶，等.唐氏綜合征母體血清時間分辨熒光免疫篩查和產前診斷分析[J].重慶醫學，2009，38（1）：70.

[5]楊延冬，王 莉，姜秀清，等.孕中期時間分辨熒光法檢測血清標志物在產前篩查中的應用[J].現代醫藥衛生，2010，26（14）：2085.

[6]徐聚春，曹 利，胡 華，等.8864例孕婦唐氏綜合征篩查與羊水穿刺結果分析[J].中國優生與遺傳雜志，2012，20（1）：30.

[7]王 丹，劉 麗，宋朝暉，等.3657例孕中期唐氏篩查及產前診斷的臨床價值分析[J].中國產前診斷雜志（電子版），2010，2（3）：17.