Smad2蛋白在正常宮頸、宮頸上皮內瘤變與宮頸浸潤癌中的表達及意義

[摘要] 目的 研究Smad2蛋白在正常宮頸、宮頸上皮內瘤變與宮頸浸潤癌中的表達，及與臨床病理學特征的關系。 方法 選擇宮頸上皮瘤變組織樣本67例（CIN組），宮頸浸潤癌組織樣本53例（ICC組），正常宮頸組織樣本30例（NCE組），采用免疫組化SP法檢測各組織中Smad2蛋白的表達。 結果 正常宮頸、宮頸上皮內瘤變與宮頸浸潤癌組織中Smad2陽性率、染色程度得分、陽性細胞占比得分及表達強度比較，差異均有統計學意義（P<0.01）。CIN1級、CIN2級、CIN3級Smad2陽性率和表達強度得分比較，差異有統計學意義（P<0.01），表達強度得分與宮頸上皮內瘤變分級呈負相關（P<0.05）。Smad2在宮頸浸潤癌組陽性表達與病理分級有關（P<0.05）。 結論 Smad2蛋白在宮頸浸潤癌組織中的表達低于正常宮頸組織和宮頸上皮內瘤變組織，Smad2蛋白與宮頸上皮內瘤變病變程度有關，且與宮頸浸潤癌惡性程度有關。Smad2蛋白低表達可能在宮頸癌前病變進展及宮頸癌發生發展中起重要作用。

[關鍵詞] 宮頸癌；浸潤癌；宮頸上皮內瘤變；Smad2

[中圖分類號] R713.44 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）29-0069-03

宮頸癌是女性最常見的惡性腫瘤，我國發病率呈逐年增長趨勢，并向年輕化發展，病死率高。宮頸上皮內瘤變屬宮頸良性病變，被認為是宮頸原位癌前病變，隨著病變程度進展將可能發展為宮頸原位癌，是早期宮頸癌篩查的高危人群。Smads蛋白家族是TGF-β唯一作用底物，其中Smad2蛋白是一種潛在的抑癌基因[1]。本研究通過對正常宮頸、宮頸上皮內瘤變與宮頸浸潤癌組織中Smads2蛋白的表達，探討Smads2蛋白在宮頸癌發生、發展中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料來源

選擇2010年2月～2012年12月在嘉興市婦幼保健院行手術或病理活檢的150例患者宮頸組織樣本，其中宮頸上皮瘤變組織樣本67例（CIN組），宮頸浸潤癌組織樣本53例（ICC組），正常宮頸組織樣本30例（NCE組），均經病理學診斷證實。年齡28～69歲，平均（49.38±10.84）歲。CIN1級23例，CIN2級28例，CIN3級16例。宮頸浸潤癌組織學類型：鱗癌22例，腺癌31例；按國際抗癌協會（UICC）TNM標準臨床分期：Ⅰ期14例，Ⅱ期20例，Ⅲ期19例；病理分級：Ⅰ級15例，Ⅱ級19例，Ⅲ級19例；淋巴結轉移21例，無淋巴結轉移32例。

1.2試劑與儀器

兔抗人Smad2單克隆抗體購自通派（上海）生物科技有限公司，DAB顯色劑、即用型快捷免疫組化檢測試劑盒均購自福州邁新生物技術開發有限公司。

1.3免疫組化檢測

所有樣本石蠟包埋以4 μm厚度連續切片，常規進行二甲苯脫蠟、梯度酒精脫水、H2O2滅活內源性過氧化物酶，高溫水浴修復抗原，采用即用型快捷免疫組化檢測試劑盒以免疫組化SP法檢測樣本Smad2水平，按試劑盒說明書進行，以PBS替代一抗作為陰性對照，DAB顯色、蘇木精復染、脫水、透明、封片。

1.4 結果判定[2]

細胞質或細胞核染色呈黃色或棕黃色顆粒為陽性，根據染色程度和陽性細胞占比評價染色結果：無染色為0分、淡黃色為1分、棕色2分、深棕色為3分；在高倍光鏡下隨機選擇5個視野計數500個細胞，計算陽性細胞占比，<10%計0分、10%～25%計1分、26%～50%計2分，>50%計3分。表達強度以兩項得分之和表示： 0～1分為陰性（﹣），2～4分為陽性（+），5～7分為中度陽性（++），>7分為強陽性（+++）。

1.5 統計學處理

采用SPSS18.0統計學軟件進行數據分析，計數資料用百分比表示，采用Chi-Square檢驗，計量資料采用（均數±標準差）表示，采用ANOVA，兩兩比較采用SNK-q檢驗，等級相關性采用Spearman相關系數分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Smad2在宮頸組織中的染色

Smad2染色定主要位于細胞質，少量位于細胞核，宮頸上皮內瘤變和宮頸浸潤癌組織中染色程度較正常宮頸組織淺，呈黃色，宮頸浸潤癌組織中染色程度較CIN組織淺，呈淡黃色或無染色。正常宮頸、宮頸上皮內瘤變與宮頸浸潤癌組織中Smad2陽性率、染色程度得分、陽性細胞占比得分及表達強度比較，差異均有統計學意義（P<0.01），見表1。

2.2 Smad2在宮頸上皮內瘤變組織中的表達

CIN1級、CIN2級、CIN3級Smad2陽性率和表達強度得分比較，差異有統計學意義（P<0.01），表達強度得分與宮頸上皮內瘤變分級呈負相關（r=0.392，P<0.05），見表2。

2.3 Smad2在宮頸浸潤癌組織中表達與臨床特征的關系

Smad2在宮頸浸潤癌組陽性表達與病理分級有關（P<0.05），與年齡、組織學類型、臨床分期、淋巴結轉移等臨床病理學特征無關（P>0.05），見表3。

3 討論

Smads蛋白家族是最早被發現的TGF-β受體激酶底物，在細胞質中介導TGF-β信號通路傳導，主要分為途徑抑制型、共同中介型和抑制型[3]。TGF-β在腫瘤的發生發展過程中具有抑制和促進的雙重作用，正常組織中TGF-β延續抑制細胞增殖作用抑制腫瘤生長，在腫瘤組織中則由于信號通路蛋白基因突變所介導的TGF-β失去對腫瘤的抑制作用，轉變為促進腫瘤細胞活性[4-6]。Smad2蛋白屬Smads蛋白家族中途徑抑制型蛋白，是脊椎動物TGF-β和活化素受體底物的，可被TGF-β激活后與共同中介型Smad蛋白結合形成符合物入核參與靶基因轉錄[7，8]。實驗研究顯示，Smad2蛋白在宮頸癌組織中表達異常，可能在TGF-β促進腫瘤生長生物學途徑中起抑制作用，是潛在的抑癌基因[9，10]。

本研究對比正常宮頸組織、宮頸上皮內瘤變組織和宮頸浸潤癌組織中Smad2蛋白的表達，結果顯示，Smad2蛋白染色顆粒主要位于細胞質，正常宮頸組織染色程度均較良性病變和惡性病變組織更深，標本陽性率和陽性細胞占比均更多，表達強度更強，表明Smad2蛋白在正常組織中的表達水平高，而病變組織中，尤其是惡性病變組織中卻呈現顯著降低的現象，提示其在細胞惡變過程中可能發生了生物學改變。由于宮頸上皮內瘤高分級病變進展為宮頸癌風險高，且病變程度與宮頸癌發生密切相關[11，12]，本研究對宮頸上皮內瘤變不同病變程度組織中Smad2蛋白表達進行比較，結果顯示，不同分級的宮頸上皮內瘤變組織中Smad2蛋白陽性率和表達強度得分均存在顯著性差異，CIN1級組織中陽性率和表達強度得分最高，而CIN3級組織中陽性率和表達強度得分最低，說明Smad2蛋白的表達在宮頸上皮內瘤變組織呈現隨著病變程度加重而降低的趨勢，等級相關分析檢驗顯示，Smad2蛋白表達強度得分與宮頸上皮內瘤變病變程度呈負相關，差異有統計學意義。Smad2蛋白在正常宮頸組織中的高表達而在宮頸癌前病變組織中隨病變程度進展降低，提示Smad2蛋白在正常組織中表達與TGF-β的抑制腫瘤生長作用有關，其低表達在宮頸癌的發展中發揮重要作用，可能與TGF-β促進腫瘤細胞生長作用的轉變過程相關，在此過程中發生突變等生物學改變，導致表達下調[13]。

本研究結果顯示，宮頸浸潤癌組織中Smad2蛋白表達與病理分級有關，病理分級反應腫瘤細胞惡性程度，Smad2蛋白表達對宮頸癌的作用可能表現為低分化細胞的惡性程度高，生長趨勢旺盛，侵襲性更強，Smad2蛋白低表達則使其抑制腫瘤生長作用嚴重削弱，從而更利于腫瘤細胞的增殖[14]。而與年齡、組織學類型、臨床分期、淋巴結轉移等臨床病理學特征無關，提示Smad2蛋白在宮頸癌發生和發展過程中主要在病理學基礎中發揮作用，與腫瘤體積大小、侵襲范圍、轉移、遷徙可能無顯著相關，也可能與本研究樣本量較小有關。筆者推測Smad2蛋白表達下調可能反應了宮頸組織細胞中抑制信號削弱，隨著宮頸上皮內瘤變等癌前病變的發生，Smad2蛋白的作用受抑制愈加顯著，而細胞則進一步發生癌變，可能與TGF-β/Smad信號通路轉導和TGF-β生物學效應的變異有關。

綜上所述，Smad2蛋白是一種潛在抑癌基因，在癌前病變及宮頸癌組織中表達下調，與細胞惡性程度有關，可能作為判斷宮頸組織癌變程度的指標，對宮頸癌預防和治療提供參考。

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（收稿日期：2013-06-18）