大蒜素聯合頭孢哌酮對多重耐藥鮑曼不動桿菌體外抗菌活性的影響

[摘要] 目的 評價大蒜素與頭孢哌酮聯合用藥對臨床分離的多重耐藥鮑曼不動桿菌（MDR-ABA）體外抗菌活性。 方法 采用棋盤法設計，微量肉湯稀釋法測定不同濃度組合的2組抗菌藥物，分別對15株敏感ABA和15株耐頭孢哌酮ABA的最低抑菌濃度，并計算FIC指數判定聯合效應。 結果 大蒜素與頭孢哌酮聯合應用后，其MIC50顯著降低；FIC指數分布： FIC≤0.5占40.8%～65.1%；0.52為0。 結論 大蒜素與頭孢哌酮聯用后，對鮑曼不動桿菌基本表現為協同作用和相加作用，特別是能顯著提高頭孢哌酮對耐藥鮑曼不動桿菌的殺菌活性。

[關鍵詞] 大蒜素；頭孢哌酮；鮑曼不動桿菌； FIC index

[中圖分類號] R446.5 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）21-0068-02

鮑曼不動桿菌（ABA）是目前醫院感染主要致病菌之一。研究表明，近幾年來其耐藥性迅速增長[1]，甚至出現了只對多黏菌素敏感而其他抗生素均耐藥的菌株[2]，近年來鮑曼不動桿菌的耐藥問題逐漸成為學者們關注的焦點。這種日趨嚴重的耐藥現象迫使我們急需一種新的抗菌藥物或聯合用藥來控制和減少耐藥菌株產生。大蒜素（allicin）是大蒜的主要成分，有抗菌、消炎及抗病原微生物、抗腫瘤等多種藥理作用[3]，臨床已將其廣泛應用于抗感染的治療。本文在文獻研究的基礎上通過對大蒜素聯合頭孢哌酮對多重耐藥鮑曼不動桿菌的殺傷效果進行了觀察，以期為臨床上泛耐藥的鮑曼不動桿菌的治療提供新的視點。

1 材料與方法

1.1 分離菌株

30菌株臨床分離的ABA，均經VITEKCompact細菌鑒定儀鑒定，其中包括15株敏感ABA和15株耐頭孢哌酮ABA，排除同一患者同一部位的重復菌株。質控菌為大腸埃希菌ATCC 25922。

1.2 抗菌藥物

大蒜素，批號：H32025640，江蘇正大天晴藥業股份有限公司；頭孢哌酮鈉，批號130420-200304，含量96.5%，中國藥品生物制品檢定所。

1.3 培養基與藥敏紙片

K-B法檢測臨床常用藥物敏感試驗藥敏試驗方法采用微量肉湯稀釋法。藥敏紙片均為英國Oxoid公司生產。根據2009年美國臨床實驗室標準化研究所（CLSI）規定的判斷標準判定菌株對抗菌藥物的敏感性。

1.4儀器

微量加樣器和微量離心管由Eppendorf 中國有限公司生產；恒溫培養箱由Thermo公司生產；比濁儀，VITEK全自動細菌鑒定儀和哥倫比亞血瓊脂均由法國生物梅里埃公司生產。

1.5 方法

1.5.1 菌懸液的配制 挑取4～5個已分純的菌落，接種于肉湯中增菌，6 h后取3 mL菌液通過比濁儀校正其濁度至0.5 MacFarland，然后再用M-H肉湯稀釋至1.5×105 CFU/mL。

1.5.2 微量肉湯稀釋法 將大蒜素和頭孢哌酮的藥物濃度依次倍比稀釋，設置11個稀釋濃度。按棋盤法設計， 將不同濃度的大蒜素與抗菌藥物兩兩組合后取50μL加入96孔平板中，再將1.5×105 CFU/mL的菌液100μL加入孔中，37 ℃培養過夜。記錄MIC值，計算（部分抑菌濃度指數）FIC指數，FIC指數=MIC甲藥聯用/MIC甲藥單用+MIC乙藥聯用/MIC乙藥單用。

1.5.3判讀標準[4] FIC指數≤0.5時，兩種藥為協同作用；FIC指數為0.5～1.0，兩種藥為相加作用； l.02.0，兩種藥為拮抗作用。

2 結果

2.1 藥敏率

大蒜素與頭孢哌酮聯合應用后，其MIC50和MIC90顯著降低。見表1。

表1 大蒜素與頭孢哌酮聯用對敏感和耐藥鮑曼不動桿菌MIC（mg/L）

2.2 FIC指數分布

大蒜素與頭孢哌酮聯用對鮑曼不動桿菌的FIC指數分布構成比， 結果顯示，FIC指數分布：FIC指數≤0.5占40.8%～65.1%；0.52為0。見圖1。

圖1 大蒜素與頭孢哌酮聯用對鮑曼不動桿菌的FIC指數分布構成比

3 討論

ABA廣泛分布于自然界和醫院環境中，是引起嚴重致死性院內感染的重要病原菌[5]。由于近年來抗生素的大量使用或濫用，導致多重耐藥甚至泛耐藥ABA的大量出現，已成為臨床治療面臨的嚴峻挑戰，引起了醫學界高度重視[6]。從我國國家細菌耐藥性監測中心可以了解到[7]，2004～2005年與2009年ABA對亞胺培南敏感率由65.1%下降至60.6%，對美羅培南敏感率由56.8%下降至55.5%，截止2009年全國12所醫院（MDR-ABA）已經達到47.7%。因此，在缺乏安全有效的單一抗菌藥物治療之前，聯合用藥成為控制和減少耐藥菌株產生的有效手段[8]。

大蒜素是一種天然抗菌藥物， 常被作為食療及中藥治病。具有一定的抑制病原菌和真菌的作用，生物學性能良好，刺激性小，無毒副作用，無抗原性，揮發性大[9]。現代研究表明，抗菌機制可能是由于其參與了氧化應激參反應，且大蒜中含有蒜酶、過氧化物酶、磷酸醋酶以及一些水解酶，對細菌有氧化和水解作用[10-12]。大蒜素還能特異性地抑制其他細菌的酶，如醋酸激酶和磷酸轉乙酰-輔酶A合成酶[3]。

最低抑菌濃度指藥物抑制細胞生長所需要的最低濃度，是測量抗菌藥物抗菌活性大小的一個指標，最低抑菌濃度的大小與細菌對抗菌藥物的敏感度高低呈負相關，即最低抑菌濃度值越小，細菌對該抗菌藥物的敏感度越高，一般用MIC50及MIC90值評價抗菌效果。

大蒜素是蒜氨酸經蒜酶裂解后生成并發揮活性作用[13]，具有廣譜抗菌的活性。既往研究表明[13～15]，大蒜素對大腸桿菌，沙門菌，金黃色葡萄球菌鏈球菌，克雷伯菌，變形桿菌，芽孢桿菌等均有抗菌作用，但其對ABA尤其是MDR-ABA是否具有抗菌活性，目前尚未見文獻報道。通過本研究我們發現，大蒜素與頭孢哌酮聯用后，能顯著降低頭孢哌酮的MIC值，尤其是MDR-ABA，能夠使其MIC值降到臨床推薦使用劑量之內。大蒜素作為植物性天然廣譜抗生素，可以作為感染性疾病治療中的一種首要的候選藥物，是一種值得在臨床推廣使用的新型藥物，但對其在體內ABA的作用機制有待進一步研究。

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（收稿日期：2013-05-14）