子宮內膜、正常早孕及原因不明復發性流產患者蛻膜上Foxp3表達的意義

[摘要] 目的 探討子宮內膜、正常早孕和原因不明復發性流產患者蛻膜上Foxp3的表達情況。 方法 收集來我院進行治療的自然流產次數不低于3次的患者37例作為流產組；選取正常妊娠婦女40例作為正常妊娠組；孕齡期婦女的增生期內膜及分泌期內膜分別為25例、20例，對各組中的Foxp3的表達及分布情況采用統計學方法進行分析。 結果 （1）Foxp3在分泌期內膜的表達與正常妊娠組及URSA組比較明顯較低，在URSA患者蛻膜中的表達與正常妊娠組比較明顯較低（P < 0.05）。（2）蛻膜間質為URSA組Foxp3的主要表達部位，蛻膜腺上皮細胞為正常妊娠組患者Foxp3表達的主要位置，蛻膜腺上皮細胞為增生期內膜陰性表達及分泌期子宮內膜Foxp3的主要分布位置。 結論 在胚泡植入及早期妊娠的維持中分泌期子宮內膜和蛻膜組織中Foxp3的表達具有非常重要的意義，在URSA的發生發展過程中Foxp3的表達水平的降低可能具有重要的作用。

[關鍵詞] 子宮內膜；正常早孕；原因不明復發性流產；Foxp3

[中圖分類號] R714.21 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）21-0036-02

在育齡夫妻中復發性流產的發病率約為1%～2%，其中有超過一半的患者沒有明確的發病原因，即原因不明性復發性流產，該種疾病在臨床上較難治愈，給患者的心理及生理均造成嚴重的影響[1]。有報道表明，在胎兒免遭母胎界面同種異體免疫損害保護作用中CD4+CD25+調節性T細胞（T regulatory cell，Tr）發揮著重要的作用，在CD4+CD25+Tr發育和功能的維持中轉錄因子Foxp3是一個重要調節基因，其基因功能多態性對URSA疾病的發生及發展均具有重要的意義[2]。我們對正常妊娠婦女、URSA患者及增生期內膜、分泌期內膜中轉錄因子Foxp3的表達情況采用免疫組化法進行觀察，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究中收集2011年5月～2012年8月來我院進行治療的自然流產次數不低于3次的患者37例作為流產組，其中年齡最小為24歲，最大為39歲，平均（31.2±6.5）歲。研究對象均按照我院常規進行病因的篩查，微量淋巴細胞毒試驗結果表現為陰性，研究對象共檢測抗磷脂抗體3次，每間隔3周進行一次，均得到陰性的結果。選取同期來我院就診的正常妊娠婦女40例作為正常妊娠組，該組研究對象的妊娠時間均不超過12周并均有人工流產的意愿，其中年齡最小為21歲，最大為36歲，平均（28.1±6.8）歲，患者均不存在自然流產史、死胎及死產史等。將存在先兆流產癥狀和體征的研究對象排除出研究范圍；對其進行B超檢查，結果表明該組研究對象的胚胎發育正常。流產組及正常妊娠組均將染色體、內分泌等方面存在異常的研究對象排除出本次研究范圍，患者均不存在自身免疫性疾病及合并感染等。共收集來我院進行治療的孕齡期婦女的增生期內膜及分泌期內膜分別為25例、20例，患者年齡最小為25歲，最大為39歲，平均（32.7±7.6）歲，無自然流產、死胎、死產史。

1.2 研究方法

蛻膜組織均在手術后進行采集，使用4%多聚甲醛液進行固定，固定時間為24～48 h，常規脫水、石蠟包埋，每個標本均做3 μm片厚的連續切片，常規HE染色，對蛻膜形態進行觀察。對蛻膜Foxp3表達進行觀察的方法為S-P免疫組化染色法。其中以具有Foxp3表達的胸腺組織為陽性對照，陰性對照使用TBS代替一抗，為了達到將批內及批間存在的誤差降低到最低限度的目的集中切片進行染色。

1.3 結果的判斷依據[3]

結果判斷中對陽性反應的觀察采用雙盲法。Foxp3表達免疫組化陽性信號為棕黃色，位于胞漿，隨機抽取每張切片中的10個視野進行觀察，以在總細胞中陽性細胞所占的比例為依據將結果分為陰性、可疑陽性、輕度陽性、中度陽性及強陽性5級，具體標準如下：無陽性細胞存在為陰性（-）；陽性細胞數低于25%為可疑陽性（±）；陽性細胞數介于25%～50%之間為輕度陽性（+）；陽性細胞數介于50%～75%之間為中度陽性（++）；陽性細胞數高于75%為強陽性（+++）。

1.4 統計學分析

采用SPSS 13.0統計分析軟件包進行分析，各個組間數據的分析處理采用χ2檢驗，P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Foxp3的分布與不同組間表達水平的比較

Foxp3在妊娠后的蛻膜組織及分泌期子宮內膜中均有表達。Foxp3在URSA組的表達與正常妊娠組比較明顯較低（P < 0.05），Foxp3在分泌期內膜的表達與正常妊娠組及URSA組比較明顯較低（P < 0.05）。見表1。

2.2 Foxp3在各組中不同分布部位表達水平的比較

蛻膜間質為URSA組Foxp3的主要表達位置，與同組的蛻膜腺上皮細胞中的Foxp3表達水平比較明顯較高（P < 0.05）；蛻膜腺上皮細胞為正常妊娠組患者Foxp3表達的主要位置，與同組中的蛻膜間質中Foxp3表達水平比較明顯較高（P < 0.05）。Foxp3在增生期內膜陰性表達主要分布于蛻膜腺上皮細胞，與同組中蛻膜間質中的陰性表達比較差異具有顯著性（P < 0.05）；蛻膜腺上皮細胞為分泌期子宮內膜Foxp3的主要分布位置，與蛻膜間質細胞的分布比較明顯較高（P < 0.05）。見表1。

3 討論

不明原因復發性流產具有復雜的病因，其中主要為同種免疫型RSA，再次發生流產的風險隨著臨床妊娠丟失次數的增多而加大。正常的妊娠與同種異體移植具有相似性，母體對胚胎的免疫排斥在妊娠失敗的原因中占有較重要的位置[4]。有學者研究證明，CD4+CD25+Tr在人胸腺及外周血中天然存在，在人外周血CD4+T細胞中所占的比例約為5%～10%。CD4+CD25+高表達亞群中有人類調節性T細胞存在，而正常活化的T細胞在CD4+CD25+低表達T細胞亞群中占有較高的比例。在人類正常妊娠的孕早期中CD4+CD25+Tr出現明顯升高，其達到高峰的時間為孕中期，在產后CD4+CD25+Tr則慢慢地出現降低的趨勢[5]。本次結果表明，URSA與正常妊娠組比較具有明顯較低的外周血CD4+CD25+Tr細胞數量，結果提示在正常妊娠的維持過程中及病理妊娠的發生過程中CD4+CD25+Tr均具有重要的意義。

在CD4+CD25+Tr發育和功能維持中Foxp3是一個重要的調控基因，T2型細胞由初始型T細胞分化而來，CD4+CD25+Tr在該過程中具有非常重要的作用。BALB/c×BALB/c和BALB/c×C57BL/6孕鼠與同齡未孕鼠比較其子宮組織Foxp3 mRNA的表達明顯較高，前者約為后者的1 000倍，而Foxp3 mRNA表達在同種異體和同基因型的孕鼠間進行比較則差異無統計學意義，結果表明妊娠可能會導致Tr表達出現變化，同種抗原的刺激則不會導致Tr的表達出現變化。本次研究發現，Foxp3在分泌期子宮內膜、妊娠的蛻膜組織均出現表達，正常妊娠組和URSA組的蛻膜組織與分泌期內膜比較具有明顯較高的Foxp3表達水平，URSA組和分泌期內膜與正常妊娠組比較具有明顯較低的Foxp3表達水平，結果提示在正常妊娠的維持中Foxp3具有非常重要的意義，母胎界面局部免疫耐受形成的調控中Foxp3有可能是一項重要的因素，URSA的發生發展中Foxp3的表達異常發揮著重要的作用[6]。

子宮內膜具有兩個方面的免疫潛能，即免疫殺傷功能和免疫耐受或者免疫保護功能。在妊娠成功中子宮內膜兩個方面的作用平衡非常重要，在子宮局部免疫調節過程中均有參與，子宮內膜的形態和功能在分泌期和早孕期發生變化為其突出的變化。我們研究發現，Foxp3在分泌期內膜存在表達，妊娠蛻膜組織中Foxp3的表達水平明顯增加；Foxp3在正常妊娠組及URSA組的主要分布部位分別為腺上皮細胞及蛻膜間質，提示母體在胎兒免疫耐受的形成過程中子宮內膜、蛻膜組織在胎母界面均進行了參與，該參與方式可能是以自分泌或者旁分泌的方式進行的。

[參考文獻]

[1] 劉爽，霍紅. 復發性自然流產的病因學研究進展[J]. 中國當代醫藥，2013，20（2）：20-21.

[2] 梅珊珊，譚劍平，陳慧，等. CD4+CD25highT細胞和Foxp3在不明原因復發性自然流產中的作用[J]. 中山大學學報（醫學科學版），2010，31（4）：461-466.

[3] 楊卉，林其德，肖云山，等. Foxp3在子宮內膜、正常早孕和原因不明復發性流產患者蛻膜上的表達[J]. 現代婦產科進展，2005，14（2）：129-131.

[4] 陳玲，陳曉勇. 不明原因復發性流產的免疫學研究進展[J]. 江西醫藥，2012，47（7）：650-652.

[5] 蔣國靜，邱麗華，林其德. 原因不明復發性流產與蛻膜CD4+CD25+T調節細胞和CD8+CD28-T細胞的關系[J]. 現代婦產科進展，2008，17（12）：894-896.

[6] 劉愛珍，古亞麗，李靜. Foxp3和TGF-β1在復發性流產患者絨毛組織中的表達[J]. 中國誤診學雜志，2008，8（35）：8572-8574.

（收稿日期：2013-04-26）