尿N—乙酰—β—葡萄糖苷酶和血清胱抑素C聯合檢測在糖尿病腎病診斷中的意義

[摘要]目的 研究尿N-乙酰-β-葡萄糖苷酶（NAG）和血清胱抑素C（Cys-C）在糖尿病腎病患者不同階段尿中及血中的表達水平，探討其在糖尿病腎病診斷中的意義。 方法 收集我院住院的2型糖尿病患者252例，根據尿微量白蛋白排泄量（UAE）分成3組：正常蛋白尿組81例（A）：<30 mg/d；微量蛋白尿組85例（B）：（30～300） mg/d；大量蛋白尿組86例（C）：>300 mg/d。收集患者的尿標本及血標本分別檢測尿NAG及血清胱抑素C水平等。 結果 ①尿NAG與對照組相比明顯升高，且隨著糖尿病腎病的發展逐漸升高。②血清胱抑素C在正常蛋白尿期就已經開始升高，隨著糖尿病腎病的進展逐漸升高，且其升高早于肌酐的升高。③血清胱抑素C聯合尿NAG檢測可明顯提高早期糖尿病腎病的診斷率。 結論 尿NAG和Cys-C是糖尿病腎病早期診斷的指標，二者聯合檢測可提高糖尿病腎病早期的診斷率。

[關鍵詞] 糖尿病；糖尿病腎病；尿NAG；血清胱抑素C

[中圖分類號] R587.1 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）21-0018-03

糖尿病的慢性并發癥累及全身各器官，其中糖尿病腎病（DN）的發病率和死亡率較高，約占西方國家終末期腎病的20%～40%。傳統的理論認為，DN主要病理改變為腎小球硬化——腎小球基底膜肥厚及細胞外基質的沉積[1]。Thomas等[2]研究認為：DN除了存在腎小球病變之外，還存在腎小管改變。尿N-乙酰-β-葡萄糖苷酶（NAG）是腎小管損害的指標，也是小管功能改變的指標，尿NAG與其他指標對比有很高的特異性（87.5%）及敏感性（100%）[3]。血清胱抑素-C（Cys-C）作為腎功能損害的指標，在腎小球功能發生改變的早期，敏感性要高于肌酐。本文將二者聯合檢測，評價其分別對DN早期診斷的價值及聯合檢測對DN早期診斷的意義。

1 資料與方法

1.1臨床資料

糖尿病組：根據1999年WHO糖尿病診斷標準選擇我院內分泌科2008年3月～2009年10月住院的2型糖尿病患者252例，男120例，女132例，平均年齡（55±12）歲。排除感染、腫瘤及其他原因腎病，實驗前2周停用ACEI或ARB類藥物。根據尿微量白蛋白排泄量（UAE）分成3組：正常蛋白尿組81例（A）：<30mg/d；微量蛋白尿組85例（B）：（30～300）mg/d；大量蛋白尿組86例（C）：>300mg/d。

對照組：我院體檢中心隨機選擇與糖尿病組年齡、性別相匹配的健康志愿者112例為對照組，所有對照者沒有糖脂代謝異常。其中男52例，女60例，平均年齡（62±11）歲。

兩組性別、年齡、體重差異不顯著（P > 0.05），見表1。

表1 兩組的臨床參數比較

1.2 方法

1.2.1 尿標本的收集及NAG的測定 連續3 d收集各組患者24 h的尿液，將24 h尿液混勻后取10 mL，然后以1000 r/min離心10 min，取上清液2 mL于-70℃冰箱中保存。采用矯正的雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA，上海吳昊生物有限公司）測定尿NAG的濃度，取3次結果的平均值。操作嚴格按照試劑盒說明進行，標本經鹽酸和氫氧化鈉預處理。為減少尿液稀釋和濃縮對結果的影響，尿NAG以其與肌酐的比值表示。

1.2.2 觀察指標 所有患者均常規檢測血清胱抑素（Cys-C）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、血尿酸（UA）、血肌酐、糖化血紅蛋白、尿肌酐等指標。

1.2.3 尿微量白蛋白的測定 連續3 d收集患者的24 h尿，將24 h尿液混勻后取10 mL，應用全自動免疫分析儀檢測患者的尿微量白蛋白，取平均值，根據24 h尿量計算UAE。

1.3 統計學處理

采用SPSS16.0統計軟件，計量資料以（x±s）表示，采用單因素方差分析判斷多組間差異，采用獨立樣本t檢驗判斷兩樣本間差異，計算Pearson相關系數判斷兩個變量的相關關系。

2結果

2.1各生化指標的比較

對照組及糖尿病組的體重、腰圍、BMI、肌酐、性別、年齡均無統計學意義（P > 0.05）。如表2所示，尿NAG與對照組相比明顯升高，差異具有統計學意義（P < 0.05）。尿NAG在正常蛋白尿組已升高，隨著DN的加重逐漸升高，C組與B組、A組相比最高，差異均具有統計學意義：[A vs.C（P < 0.01），A vs.B （P < 0.01），B vs.C（P < 0.01）]。

與對照組比較，DM組的血清胱抑素C水平明顯升高，具有統計學意義（P < 0.05）。與對照組相比，A組的血清胱抑素水平開始升高，并且隨著DN的進展逐漸升高，均有統計學意義（P < 0.05）。

與對照組比較，DM組CHO、UA水平均升高，差異有顯著性（P < 0.05）。DM各組比較，隨著DN的發展CHO、UA水平逐漸升高，差異有顯著性（P < 0.05）。

尿蛋白定性結果：糖尿病組中，陰性171例，陽性81例，其中（+）36例，（++）30例，（++++）15例，陽性率32.1%；尿微量白蛋白升高171例，陽性率67.8%；尿NAG和血清胱抑素升高196例，陽性率77.8%；其中81例正常蛋白尿組中，2項均升高33例，檢出率40.7%，單項增高分別45和42例，檢出率55.6%和51.9%。

2.2相關分析

血尿酸、胱抑素、肌酐、CHO、尿NAG（u/gCr）與尿蛋白排泄量呈正相關（P < 0.001，r值分別是0.357、0.602、0.434、0.285、0.344、0.303、0.863）。

3討論

NAG是一種高分子量糖蛋白，屬于細胞內溶酶體酶之一，主要存在于腎近曲小管上皮細胞溶酶體中，正常時不能通過腎小球濾膜，平時尿液中少量的NAG是腎小管上皮細胞在胞吐過程中漏出的，而糖尿病患者在糖代謝紊亂時導致局部血流減少，血管內皮細胞缺血缺氧及高血糖對血管內皮細胞長期慢性損害，使血管內屏損傷，從而尿中的NAG含量會增加，其含量隨腎小管上皮細胞的損傷程度增加，是腎小管間質損傷及評價腎功能的敏感指標。

Cys-C為122個氨基酸的低分子量（1.33 JDa） 的蛋白質， 由腎小球分泌，由小管代謝而且已經被用作腎臟損害的預測指標，人體所有有核細胞都能持續產生Cys-C且相當恒定，可以影響肌酐的腎外因素對血清胱抑素C幾乎沒有影響，許多報道已經強調了它在糖尿病腎臟損害中的作用，其敏感性要高于血肌酐等，認為其是糖尿病腎功能不全早期診斷的指標。

結果顯示，糖尿病患者的尿NAG和血Cys-C的水平都明顯高于正常對照組（P均< 0.01），相關性研究表明血Cys-C和尿NAG水平與UAE呈正相關關系（P < 0.001），相關系數分別是0.602和0.863），即兩者隨著DN的發展逐漸升高，同時兩者的升高在正常蛋白尿組就已經出現，這說明兩者不僅參與了DN的發生發展，而且可能發生在DN的早期。

研究發現，尿NAG和血Cys-C與UAE相比在DN的診斷中有更高的陽性率，尿NAG和血Cys-C陽性率均是77.8%，UAE陽性率67.8%，在正常蛋白尿中2項均升高者33例，檢出率40.7%，單項增高者分別有45和42例，檢出率55.6%和51.9%，與其他指標相比有更高的敏感性，其與Mohammadi等[4]結果一致，所以我們認為測尿NAG和血Cys-C對于DN的早期診斷及評價腎功能損害非常有意義，可明顯提高DN的診斷率，可將它們作為常規篩選指標。

在我們的研究中還發現，與對照組相比較，DM組CHO、水平均升高，差異有顯著性（P < 0.01），DM各組間相比，隨著DN的發展CHO水平逐漸升高，差異有顯著性（P < 0.01），相關性分析表明CHO、TG、LDL與UAE呈正相關（P < 0.001，r分別是0.285、0.344、0.303）這提示血脂異常可能是DN的危險因素，且隨著DN的進展，血脂異常就愈加明顯，它可能是因為DM患者脂蛋白酶活性降低及胰島素對TG的合成與分解代謝影響不平衡造成的。

傳統用來評價糖尿病腎病的指標包括微量白蛋白的出現，肌酐清除率的下降及血肌酐的升高[5]，但是因為糖尿病腎病患者腎功能下降并不一定出現蛋白尿所以我們就需要一個糖尿病腎病腎功能損害的其他指標，以更早地對糖尿病腎病做出診斷。而且在糖尿病腎病發展中小管損害要早于小球損害，因為幾個小管蛋白和酶在出現微量蛋白尿和肌酐升高前就已經被檢測[6，7]，尿NAG和血清胱抑素C就是這些指標之一。綜上，本研究表明，血清胱抑素C和尿NAG的測定對糖尿病腎病的早期診斷是非常有意義的，特別是對于正常蛋白尿患者。兩者聯合檢測可明顯提高早期糖尿病腎病的診斷率，是早期糖尿病腎病診斷的非常有用的標志物。

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（收稿日期：2012-07-19）