擬步甲部分種核基因18SrDNA序列及分子系統(tǒng)學研究

摘 要：擬步甲（Tenebrionidae）是鞘翅目的一個較大的類群，全球已知12個亞科100多族1 500多屬約25 000種，我國已知9亞科45族280余屬近1 300種。實驗利用18SrDNA基因片段序列對擬步甲科的部分種進行系統(tǒng)發(fā)育分析，并對靶序列進行排序、比較、分析，計算核苷酸組成、變異位點和DNA序列差異，構(gòu)建了分子系統(tǒng)進化樹（NJ，ME），確定各類群間的系統(tǒng)關(guān)系，驗證了宏觀形態(tài)分類學。

關(guān)鍵詞：擬步甲科；核18SrDNA；DNA序列；分子系統(tǒng)學

中圖分類號 S435.622 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2013）19-25-03

在依據(jù)外部形態(tài)分類鑒定及相關(guān)學者工作的基礎(chǔ)上，以擬步甲科的部分種類為研究對象，利用PCR技術(shù)通過對擬步甲科部分種類核18SrDNA基因序列的研究，探討擬步甲科不同族之間、不同種之間的DNA分子的差異，研究選擇類群的分類地位和親緣關(guān)系，為豐富擬步甲科的分子系統(tǒng)學研究，進一步完善擬步甲科的分類系統(tǒng)，揭示其系統(tǒng)發(fā)育和演化提供分子水平的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 選用擬步甲6個族中的9種進行實驗，所用的昆蟲標本采自寧夏（中衛(wèi)、賀蘭山、固原、中寧等縣市）。材料來源及代號具體如表1所示。

1.2 實驗方法

1.2.1 基因組DNA的提取采用SDS-蛋白酶消化法提取昆蟲的DNA，該方法參考印紅[1]、代金霞[2]、樸美花[3]、張大治[4]、張迎春[5]、田英芳[6]等的方法并加以改進。即從100%的無水酒精中取出樣本，用滅菌過的小剪刀將其腿部剪開，取出其腿部肌肉，濾紙吸干，研磨，用SDS/蛋白酶K消化液消化5h左右。用常規(guī)的酚/氯仿抽提法（酚∶氯仿∶異戊醇=25∶24∶1）提取基因DNA，乙醇促沉淀后溶解在48μL無菌水中，置-20℃環(huán)境備用。……