玫瑰花微粉抗抑郁活性及初步安全性研究

摘要：目的：初步探討玫瑰花微粉的抗抑郁活性及安全性。方法：采用小鼠強(qiáng)迫游泳和懸尾2種行為絕望抑郁模型實(shí)驗(yàn)考察抗抑郁活性；采用小鼠急性毒性、亞急性毒性試驗(yàn)考察安全性。結(jié)果：025、05、10、20 g/kg純玫瑰花粉連續(xù)灌胃10 d，均能明顯縮短強(qiáng)迫游泳和懸尾小鼠的不動(dòng)時(shí)間；小鼠一日內(nèi)分3次按80 g/kg的最大給藥量灌胃，未見(jiàn)明顯急性毒性反應(yīng)；小鼠以10、20、40 g/kg劑量連續(xù)灌胃30 d，除各組體重增長(zhǎng)緩慢、高劑量組胸腺和脾臟系數(shù)及BUN明顯降低外，其余臟器系數(shù)和血清AST、ALT、Cre、BUN、UA與對(duì)照組相比無(wú)明顯變化，亦未見(jiàn)死亡或內(nèi)臟有明顯異常。結(jié)論：小鼠經(jīng)口灌服玫瑰花微粉抗抑郁活性明顯，其最大耐受量大于240 g/kgd，連續(xù)灌服30天的無(wú)毒性劑量為20 g/kg。

關(guān)鍵詞：玫瑰花微粉；抗抑郁；最大耐受量；亞急性毒性；無(wú)毒性劑量

中圖分類(lèi)號(hào)：R965文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1007-2349（2013）03-0046-03

玫瑰花是薔薇科植物玫瑰（Rosa rugosa Thumb）的干燥花蕾[1]，含有揮發(fā)油、多酚、黃酮類(lèi)等多種化學(xué)成份，具有抗氧化、抗血栓、抗癌、抗菌、免疫調(diào)節(jié)、降血脂和預(yù)防心臟病等生理活性[2]。中醫(yī)認(rèn)為，玫瑰花味甘微苦、性溫，最明顯的功效就是理氣解郁、活血散瘀和調(diào)經(jīng)止痛，是婦科常用藥材和美容保健佳品。本研究考察玫瑰花微粉的抗抑郁活性及初步安全性，為深入研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料

11受試物與試劑玫瑰花微粉，紫色粉末，云南中醫(yī)學(xué)院提供，批號(hào)20120501；鹽酸氯米帕明片，25 mg/片，批號(hào)20120301，江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)；均用純水配制。谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT，批號(hào)TR366/TR367）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST，DF681/DF682）、肌酐（Cre，171/030/3）、尿素氮（BUN，31074/9130/25/2）、尿酸（UA，15343/730/52/1）測(cè)定試劑盒，上海DiaSys生化試劑。

12動(dòng)物與飼養(yǎng)SPF級(jí)昆明種小鼠，18～22 g，雌雄兼用，昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，SCXK（滇）2005-0008、SCXK（滇）2005-0009（飼料）。飼養(yǎng)于IVC動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（滇）2005-0001。

13主要儀器AL104型電子分析天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；HHS-1型恒溫水箱，金壇市大地自動(dòng)化儀器廠；JJ2000型電子天平，常熟市雙杰測(cè)試儀器廠；Centrifuge 5810-R臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，eppendorf公司；奧林巴斯AU400生化儀。

14統(tǒng)計(jì)方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果以（ ±s ）表示，正態(tài)分布資料用t檢驗(yàn)，偏態(tài)分布用秩和檢驗(yàn)。

2方法與結(jié)果

21抗抑郁作用研究[3]

211對(duì)強(qiáng)迫游泳小鼠不動(dòng)時(shí)間的影響取18～20 g雌性小鼠，機(jī)分為6組：模型對(duì)照，氯米帕明50 mg/kg，玫瑰粉025、05、10、20 g生藥/kg組，每組12只。除陽(yáng)性對(duì)照組僅于實(shí)驗(yàn)當(dāng)日給藥1次外，其余各組動(dòng)物均每日灌胃給藥1次，連續(xù)10 d，模型對(duì)照給予20 mL/kg純水。末次給藥后30 min，將小鼠逐一放入直徑18 cm、水深15 cm、水溫（24±1）℃的杯中游泳，連續(xù)觀察6 min，以小鼠微卷軀體、保持垂直姿勢(shì)、鼻孔露出水面為不動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)，記錄后4 min內(nèi)小鼠保持不動(dòng)狀態(tài)的累計(jì)時(shí)間。結(jié)果見(jiàn)表1。

由表1可見(jiàn)，陽(yáng)性對(duì)照氯米帕明及玫瑰花粉4劑量組連續(xù)灌胃給藥10 d，均能明顯縮短強(qiáng)迫游泳小鼠的不動(dòng)時(shí)間。

212對(duì)懸尾小鼠不動(dòng)時(shí)間的影響取20～22 g雌性小鼠，分組及給藥同211。末次給藥后30 min，將小鼠尾端用膠布固定于一水平桿上，使其成倒掛狀態(tài)，距離桌面15 cm。連續(xù)觀察6 min，記錄后4 min內(nèi)小鼠保持不動(dòng)狀態(tài)的累計(jì)時(shí)間。結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2可見(jiàn)，陽(yáng)性對(duì)照氯米帕明、玫瑰花4個(gè)劑量組連續(xù)灌胃給藥10天，均能明顯地縮短懸尾小鼠的不動(dòng)時(shí)間。

22初步安全性研究[3]

221小鼠經(jīng)口灌胃急性毒性試驗(yàn)在預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用小鼠經(jīng)口最大給藥量試驗(yàn)評(píng)價(jià)玫瑰花粉的急性毒性。取18～20 g小鼠40只，按體重和性別隨機(jī)分為對(duì)照組及玫瑰花粉組，每組20只，雌雄各半。禁食不禁水8 h后，以02 g/mL的最大濃度、40 mL/kg的最大容積1日內(nèi)給小鼠灌胃3次，每次間隔6 h，對(duì)照組給予同容積的純水。連續(xù)觀察14 d，記錄中毒癥狀和死亡情況。觀察期結(jié)束脫臼處死動(dòng)物，解剖，肉眼觀察各組織和臟器的體積、顏色、質(zhì)地等有無(wú)明顯異常。

由表3可見(jiàn)，小鼠一日內(nèi)以02 g/mL的最大濃度、40 mL/kg的最大體積間隔6 h 3次灌服玫瑰花粉，在連續(xù)14 d的觀察期內(nèi)未見(jiàn)動(dòng)物發(fā)生明顯毒性及死亡，且2組體重增長(zhǎng)無(wú)明顯差異；對(duì)觀察期結(jié)束處死動(dòng)物的尸檢亦未發(fā)現(xiàn)組織或臟器有明顯異常。提示小鼠經(jīng)口灌服玫瑰花微粉對(duì)的最大耐受量大于24 g/kg。

222小鼠經(jīng)口灌胃亞急性毒性試驗(yàn)取19～21 g小鼠48只，雌雄各半，按性別和體重隨機(jī)分為4組：溶媒對(duì)照組；玫瑰花粉10、20、40 g/kg組，每組12只。各組動(dòng)物每日按劑量灌胃給藥1次，對(duì)照組給予純水，容積均為20 mL/kg，連續(xù)30天。每日觀察動(dòng)物的一般行為、中毒反應(yīng)及死亡情況，每周稱取體重一次以調(diào)整給藥劑量。末次給藥后禁食不禁水12 h，稱取動(dòng)物體重后，摘眼球取血分離血清，測(cè)定ALT、AST、Cre、BUN、UA；剖取心、肝、脾、肺、腎、胸腺于分析天平上稱重，計(jì)算臟器系數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表4～6。

由表4可見(jiàn)，試驗(yàn)期間各組動(dòng)物活動(dòng)自如、皮毛光澤，一般狀況良好，但玫瑰花3個(gè)劑量組的體重增長(zhǎng)均明顯低于對(duì)照組，并有明顯量-效及一定的時(shí)-效趨勢(shì)。除40 g/kg組于給藥第20天灌胃失誤致4號(hào)小鼠死亡（解剖證實(shí)）外，其余各組無(wú)一死亡。試驗(yàn)結(jié)束處死解剖動(dòng)物，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等內(nèi)臟組織，未見(jiàn)明顯異常。

由表5可見(jiàn)，小鼠以10、20、40 g/kg劑量連續(xù)灌服玫瑰花微粉30 d，除高劑量組血清BUN明顯降低外，其余肝、腎功能指標(biāo)與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異。

由表6可見(jiàn)，小鼠以10、20、40g/kg劑量連續(xù)灌服玫瑰花微粉30天，除高劑量組胸腺及脾臟系數(shù)明顯低于對(duì)照組外，其余臟器系數(shù)與對(duì)照組相比無(wú)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3討論與小結(jié)

玫瑰花是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥，具有悠久的栽培和藥用歷史。由于其藥性溫和，能夠溫養(yǎng)人的心肝血脈，舒發(fā)體內(nèi)郁氣，起到鎮(zhèn)靜、安撫、抗抑郁的功效，是女性偏愛(ài)的美容保健佳品。目前，對(duì)玫瑰花的解抑作用研究以復(fù)方或藥材的水浸出液為主[4～5]，其物質(zhì)基礎(chǔ)與民間常用服法存在一定差異，且長(zhǎng)期食用對(duì)肝腎功能的影響也鮮有報(bào)道。

本研究采用特殊工藝制備的玫瑰花微粉作為受試樣品，除保留了原藥材的全部物質(zhì)基礎(chǔ)外，更有利于提高其生物利用度。行為絕望模型具有簡(jiǎn)單、快速、敏感等特點(diǎn)，常用于抗抑郁藥物的快速篩選。玫瑰花微粉以025、05、10、20 g/kg劑量連續(xù)灌服10 d，均能明顯縮短兩種行為絕望抑郁模型小鼠的不動(dòng)時(shí)間；其最大耐受量大于240 g/kgd；在連續(xù)灌胃30天的亞急性毒性試驗(yàn)中，10、20、40 g/kg劑量除各組體重增長(zhǎng)緩慢、高劑量組胸腺和脾臟系數(shù)及BUN明顯降低外，其余臟器系數(shù)和血清AST、ALT、Cre、BUN、UA與對(duì)照組相比無(wú)明顯變化，亦未見(jiàn)死亡或內(nèi)臟有明顯異常。結(jié)果提示玫瑰花微粉抗抑郁活性明顯、服用安全，但其對(duì)體重的減輕和免疫的影響還有待于進(jìn)一步的研究。參考文獻(xiàn)：

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（收稿日期：2013-01-10）