MMP-2、MMP-9在胃癌中表達的相關(guān)性及其與胃癌生物學行為的關(guān)系

趙 丹 龔光偉 李勝文 楊 坤 鄭威強 魏 俊

胃癌是我國較常見惡性消化道腫瘤之一，浸潤和轉(zhuǎn)移是影響胃癌患者預后的關(guān)鍵因素。基質(zhì)金屬蛋白酶 ( matrix metalloproteinases,MMPs)家族中的基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)和基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)與腫瘤的浸潤與轉(zhuǎn)移的關(guān)系最為密切。本研究采用免疫組化SP法檢測胃癌組織與正常胃黏膜組織中MMP-2和MMP-9的表達情況,探討MMP-2和MMP-9的表達與胃癌生物學行為之間的關(guān)系及其兩者在胃癌組織中表達的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集本院2009年9月-2012年9月手術(shù)切除的經(jīng)病理明確診斷為胃腺癌標本65例,其中男性49例,女性16例,年齡35～78歲,平均年齡58.3歲。組織學分型:高分化癌7例，中分化癌11例,低/未分化癌47例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者48例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者17例。TNM分期:Ⅰ期8例,Ⅱ期13例,Ⅲ期32例,Ⅳ期12例。另取胃潰瘍或十二指腸潰瘍手術(shù)切除標本中的正常胃黏膜組織20例作對照,并經(jīng)病理明確診斷證實且排除重度不典型增生，其中男性16例,女性4例,年齡42～79歲,平均年齡57.6歲。所有患者術(shù)前均未使用非甾體抗炎藥物及無放、化療治療史,且有完整的臨床和病理資料。

1.2 方法

1.2.1 試劑來源 采用免疫組化(SP)染色法,即用型兔抗人MMP-2單克隆抗體和MMP-9單克隆抗體，購自SantaCruz公司。S-P試劑盒及DAB顯色試劑盒均購自上海生研生化試劑有限公司，并以該公司提供的標準陽性切片作為陽性對照。PBS代替一抗作為陰性對照,操作步驟嚴格按照SP免疫組化試劑盒說明書進行。

1.2.2 結(jié)果判定 MMP-2和MMP-9陽性表達主要位于細胞膜和細胞質(zhì)，為棕黃色或棕褐色顆粒狀著色。高倍鏡下(×400)隨機選擇5個視野,計算陽性細胞占視野總細胞數(shù)的百分比，取平均值。MMP-2和MMP-9陽性細胞數(shù)<25%為陰性表達,≥25%為陽性表達。染色結(jié)果由2名有經(jīng)驗的病理科醫(yī)師根據(jù)雙盲原則進行評定。

1.3 統(tǒng)計學處理

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行分析。采用χ2檢驗及Fisher精確概率法統(tǒng)計MMP-2和MMP-9與不同臨床病理特征的差異性比較和兩者表達的相關(guān)性分析，檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 胃組織中MMP-2和MMP-9的表達

胃癌組織中的MMP-2、MMP-9陽性率分別為67.7%(44/65)、72.3%(47/65)，均高于其在正常胃組織中的陽性率15.0%(3/20)、25.0%(5/20),差異均有統(tǒng)計學意義(χ2=17.178、14.411，P均<0.001)。

2.2 MMP-2和MMP-9表達與胃癌臨床病理學特征的關(guān)系

MMP-2、MMP-9的陽性率與患者年齡、性別、腫瘤大小無明顯相關(guān)性(P>0.05),而與腫瘤的浸潤深度、組織學分化程度、胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期有顯著相關(guān)性(P<0.05),見表1。

表1 MMP-2、MMP-9表達與胃癌臨床病理學特征的關(guān)系

2.3 胃癌組織中MMP-2和MMP-9表達的相關(guān)性

相關(guān)性分析表明胃癌組織中的MMP-2和MMP-9表達具有相關(guān)性，且呈正相關(guān)(P<0.001,γ=0.599),見表2。

表2 胃癌組織中MMP-2和MMP-9表達的相關(guān)性

3 討論

近年來國內(nèi)外許多學者做了大量有關(guān)人類腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移與MMPs表達之間的關(guān)系的研究，研究證實了在神經(jīng)膠質(zhì)瘤、食管癌、胃癌、乳腺癌、宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、喉癌等多種惡性腫瘤中均有MMP-2和MMP-9表達,且與臨床分期、病理組織學分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)[1-7]。

本實驗也證實了MMP-2和MMP-9在胃癌組織中的陽性表達率分別為67.7%(44/65)和72.3%(47/65)，明顯高于在正常胃黏膜組織中的陽性表達率15%(3/20)和25%(5/20),二者的差異具有顯著統(tǒng)計學意義(χ2=17.178，14.411；P均<0.001)。且MMP-2和MMP-9的陽性率與患者年齡、性別、腫瘤大小無明顯相關(guān)性(P>0.05)，而與腫瘤的浸潤深度、組織學分化程度、胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期有顯著相關(guān)性(P<0.05)。隨著腫瘤細胞浸潤深度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期的增加，兩者的表達陽性率也明顯升高，但組織學分化程度越低，兩者陽性表達率越高。這些實驗結(jié)果都與上述學者的研究結(jié)果相符合。雖然MMP-2及MMP-9被不少實驗研究證實了與腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，但它們之間的具體作用機制及相互調(diào)控關(guān)系仍未完全明了，有待我們進一步研究探討。Lekstan等研究證明在胰腺癌中MMP-2和MMP-9具有高陽性率，且兩者表達高度一致性，共同作用使胰腺癌具有高侵襲性[8]。Hu等認為MMP-2和MMP-9的協(xié)同作用增加了肺癌轉(zhuǎn)移的風險[9]。本次實驗也證實了MMP-2和MMP-9 在胃癌組織中的表達具有正相關(guān)性，這與上述學者的報道結(jié)果相符。

這些結(jié)果提示在胃癌浸潤和轉(zhuǎn)移的過程中MMP-2和MMP-9兩者可能存在著協(xié)同作用，共同影響著胃癌相關(guān)的生物學行為及胃癌患者的預后。 綜上所述，在胃癌組織中MMP-2 和MMP-9的陽性率顯著增高，且兩者表達呈正相關(guān)，推斷其可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用。臨床上對MMP-2 和MMP-9的檢測具有預后價值。

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