潤燥合劑治療去勢雄兔干眼模型實驗研究

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(南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210029)

潤燥合劑治療去勢雄兔干眼模型實驗研究

劉莉，何慧琴*

(南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210029)

目的：觀察去勢雄兔前后淚液分泌量的改變及淚膜穩(wěn)定性的變化，比較潤燥合劑與必嗽平治療去勢雄兔干眼癥療效上的差異。方法：取健康雄兔18只，隨機(jī)分為空白對照組、必嗽平組和潤燥合劑組,每組6只。空白對照組和治療組制作成干眼模型。分別于去勢前和去勢后第1、2、3、4、6、8周檢查造模組的淚液分泌量、淚膜破裂時間(BUT)情況。必嗽平組與潤燥合劑組在去勢4周后開始給予藥物治療。結(jié)果：去勢2周后，造模雄兔出現(xiàn)干眼癥狀；去勢6周后，必嗽平組和潤燥合劑組2組雄兔淚液分泌量比較于治療前明顯增加，淚膜破裂時間延長；去勢8周后,統(tǒng)計表明潤燥合劑組雄兔治療效果優(yōu)于必嗽平組，必嗽平組與潤燥合劑組組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.01)。結(jié)論：潤燥合劑和必嗽平都能夠緩解干眼癥狀，但潤燥合劑對該病因引起的干眼針對性更強(qiáng)，療效優(yōu)于必嗽平。

干眼模型;潤燥合劑;雄兔平;鬼針草;赤芍;川芎;地龍;茯苓

干眼癥是由于淚液質(zhì)和量的異常或淚液動力學(xué)的異常而引起的淚膜不穩(wěn)定，并伴有眼部不適的眼表疾病。臨床研究發(fā)現(xiàn)，由于激素水平紊亂而導(dǎo)致干眼癥的發(fā)病率也在逐年升高。本研究的主要目的是觀察家兔去睪丸后，隨著激素水平的下降而引發(fā)干眼癥的病理變化及潤燥合劑的治療效果。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組方法 取健康成年雄兔18只，雄性，體質(zhì)量(2.0±0.5)kg，喂養(yǎng)于無特殊病菌的恒溫條件下(由南京中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供)。將18只雄兔隨機(jī)分成3組，空白對照組6只、潤燥合劑組6只、必嗽平組6只。

1.2 藥品制劑及主要實驗儀器 20%烏拉坦、4%甲醛(南京中醫(yī)藥大學(xué)實驗中心提供)、2%利多卡因、2%熒光素鈉、潤燥合劑(組成鬼針草、赤芍、川芎、地龍、茯苓、山藥、黃精7味藥)、西藥必嗽平(由南京市中醫(yī)院提供)。裂隙燈、常規(guī)HE染色組織學(xué)研究儀器、日本BX-40顯微鏡、SSOOPP半自動生化分析儀、2035切片機(jī)、玻璃棒、2.5 mL注射器、102型定性濾紙。

1.3 動物模型的制作 除正常組外，其余家兔用20%的烏拉坦(5 mL/kg)沿耳緣靜脈注射全身麻醉，并加用2%利多卡因局麻后固定于兔架上，先后將雙側(cè)睪丸擠入陰囊，且同時捏緊，勿使其滑入體內(nèi)，在陰囊上切一小口，盡力擠出睪丸，結(jié)扎精索靜脈及輸精管，切除睪丸及附睪，連續(xù)縫合陰囊皮膚后局部涂碘酊預(yù)防感染。喂食高脂飼料，同時減少喂水。

1.4 治療方法 潤燥合劑組與必嗽平組在去勢4周后開始給藥。2組雄兔每次給藥劑量根據(jù)雄兔體質(zhì)量的比率(1 mL/kg)灌腸給藥，每天給藥1次，連續(xù)給藥1個月。

1.5 檢查方法和標(biāo)本采集 實驗雄兔均由同1人檢查，每次檢查時間、地點(diǎn)、照明亮度、濕度及溫度相同，分別于去勢前與去勢后1、2、3、4、6、8周行Schirmer I試驗、淚膜破裂時間(BUT)和角膜熒光素染色檢查。Schirmer I試驗方法用102型定性濾紙(35 mm×6 mm)，前段5 mm反折置于下眼瞼顳側(cè)結(jié)膜囊內(nèi),檢測記錄5 min后試紙淚液浸潤的長度(不包括反折)。角膜熒光素染色:用玻璃棒蘸熒光素滴于兔下眼結(jié)膜囊內(nèi)，瞬目后于裂隙燈下觀察角膜上皮的染色情況。淚膜破裂時間檢測(BUT):用玻璃棒蘸熒光素滴于兔下眼結(jié)膜囊內(nèi)，瞬目后于裂隙燈下記錄從最后1次瞬目后睜眼至角膜第1個黑斑出現(xiàn)的時間。飼養(yǎng)8周后檢查造模組家兔淚液分泌量、淚膜破裂時間及角膜熒光素染色情況，檢查后對雄兔行耳靜脈推注空氣處死，立即取其淚腺、角膜浸泡于4%甲醛液中,常規(guī)石蠟切片及HE和PAS染色，然后在光學(xué)顯微鏡下觀察角膜上皮變化。

2 結(jié)果

2.1 淚液分泌量的檢查及淚膜破裂時間測定 見表1，表2。

表1 4組雄兔Shirmer I試驗試紙浸濕長度測定比較 mm

注：與空白對照組比較，##Plt;0.01；與必嗽平組比較，△Plt;0.05。

表2 4組雄兔淚膜破裂時間測定比較 mm

注：與空白對照組比較，##Plt;0.01；與必嗽平組比較，△Plt;0.05。

從上述實驗數(shù)據(jù)中發(fā)現(xiàn),去勢2周后，模型組雄兔淚液分泌量及淚膜破裂時間明顯低于正常組,模型組去勢前與去勢2周后比較有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.01)。空白對照組去勢6、8周淚流量與BUT無明顯改善；去勢4周開始給藥至6周后，潤燥合劑組與必嗽平組雄兔淚液分泌量及淚膜破裂時間均比較于治療前有所好轉(zhuǎn)；潤燥合劑組與必嗽平組組間淚液分泌量和BUT檢查的差異分別有統(tǒng)計學(xué)意義。去勢8周后，治療組淚液分泌量及淚膜破裂時間與去勢前差異明顯縮小，潤燥合劑組與必嗽平組組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2 病理學(xué)觀察 空白對照組角膜上皮層細(xì)胞增生，排列紊亂，各層細(xì)胞輕度水腫，基底層細(xì)胞增生變厚；治療組角膜上皮層細(xì)胞和基底層細(xì)胞輕度增生，排列尚整齊。

3 討論

干眼癥是臨床上常見的眼表疾病之一。Krenzer等[1]研究表明，雄激素降低是主副淚腺分泌功能降低的主要因素，激素調(diào)控分泌淚液的腺體和瞼板腺功能。研究[2]發(fā)現(xiàn)，淚腺上皮細(xì)胞為雄激素的靶細(xì)胞，雄激素可使淚腺細(xì)胞合成和分泌小片顯著增加，促進(jìn)IgA抗體在淚腺組織中聚集。羅豐年等[3]在相關(guān)動物實驗研究中證明，睪酮對淚腺分泌有調(diào)節(jié)作用，淚腺組織中存有睪酮受體，這種受體在淚腺分泌淚液的功能中起到一定的調(diào)節(jié)作用。中醫(yī)的《五輪學(xué)說》中認(rèn)為胞瞼對應(yīng)臟腑為脾胃，脾胃濕熱，氣機(jī)不利，運(yùn)化功能失調(diào)，津液不能上濡胞瞼而蘊(yùn)濕成痰，濕滯熱蒸化瘀，且肝開竅于目，肝主疏泄，肝主藏血，腎藏精，精血同源，如肝血充沛，肝氣調(diào)達(dá)，則能運(yùn)行血液上達(dá)于目，滋養(yǎng)濡潤目珠，因此眼部的營養(yǎng)與肝腎兩臟也有關(guān)。潤燥合劑方以活血化瘀，祛濕化痰，補(bǔ)益肝腎為主要治療原則。方中君藥鬼針草又名婆婆針，除了治療瘧疾、腹瀉、痢疾等，鬼針草還可有引起“流淚”的不良反應(yīng)[4]。鬼針草中植物堿能夠增強(qiáng)淚腺與副淚腺肌上皮細(xì)胞的收縮功能，促進(jìn)腺胞內(nèi)淚液的排空，從而增加淚液的分泌量。臨床研究[5-6]也表明鬼針草是一種植物雄激素，可明顯改善干眼的癥狀；赤芍、川芎同入肝經(jīng)，輔助鬼針草活血化瘀；茯苓味甘淡平，以健脾利水祛濕為主；淮山藥味甘平，以補(bǔ)益脾腎，益氣養(yǎng)陰為主，并同黃精助以茯苓健脾化痰祛濕的功效；地龍具有清邪熱、通經(jīng)絡(luò)的作用。本實驗結(jié)果表明，潤燥合劑能夠有針對性的改善淚膜的穩(wěn)定性和角膜上皮的完整性，增加淚液分泌量。筆者在治療過程中發(fā)現(xiàn)，藥物治療能最大程度上的緩解干眼癥狀，但達(dá)不到完全治愈效果。對于干眼癥的治療還需進(jìn)一步深入研究。

[1]Krenzer KL,Dana MR,Uilman MD,et al.Effect of androgen deficiency on the human meibomian gland and ocular surface[J].Clin Endocriaol Metab,2000,85:4874-4882.

[2]劉超,張振華,耿燕.去勢雄兔干眼癥模型淚腺組織NFKBp65亞基及NO2表達(dá)[J].齊魯醫(yī)學(xué)雜志,2009,24(1):43-44.

[3]羅豐年,張汗承,孫敘清.去勢雄兔淚液分泌及淚膜穩(wěn)定性改變[J].中華眼科雜志,2001,37(6):458-459.

[4]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中醫(yī)藥大辭典[M].上海:上海人民出版社,1997:694.

[5]王黎.鬼針草霧化治療干眼癥的臨床研究[D].南京:南京中醫(yī)藥大學(xué),2011.

[6]李橋,施偉,王育良,等.鬼針草治療局部滴用阿托品的兔干眼療效評價[J].江蘇中醫(yī)藥,2009,41(5):74-75.

R285.5

A

1007-4813(2013)03-0396-02

劉 莉(1984-)，女，碩士。研究方向：干眼癥。

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何慧琴，女，主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師,E-mail:178270133@qq.com。

2013-02-22)