二參湯對心肌缺血大鼠血管內皮損傷的影響

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(長春中醫藥大學，吉林 長春 130117)

二參湯對心肌缺血大鼠血管內皮損傷的影響

吳澤民，鄒佳宏，李欣*

(長春中醫藥大學，吉林 長春 130117)

目的：通過觀察二參湯對心肌缺血大鼠血管內皮損傷指標NO、ET的影響，探討二參湯治療心肌缺血的機制。方法:將健康Wistar大鼠隨機分為5組，二參湯高、中、低劑量組(100、50、20 g/kg)，空白對照組和模型對照組，每組10只，觀察二參湯對心肌缺血大鼠血管內皮損傷的影響，采用ELISA法測定血清NO值,以免疫組化方法測定心肌ET表達。結果：與模型對照組比較，二參湯組大鼠血清NO值顯著提高(Plt;0.05)，心肌組織ET表達顯著降低(Plt;0.05)。結論：二參湯具有改善血管內皮功能，對血管內皮損傷具有一定保護作用，其作用機理可能與藥物調節NO、ET表達有關。

二參湯；心肌缺血；血管內皮損傷；大鼠

二參湯是吉林省著名老中醫肖永林教授結合數十年臨床經驗創立的治療冠心病的經驗方[1-2]。具有益氣養陰、活血化瘀之功。本研究擬從血管內皮損傷角度探討二參湯治療冠心病心肌缺血的作用機理，揭示二參湯對心肌缺血大鼠血管內皮損傷指標一氧化氮(NO)及內皮素(ET)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 1)藥物：二參湯組成：黃芪、黨參、丹參、川芎、五味子、木香、三七、降香、麥冬、水蛭、薤白、甘草，常規煎煮，藥液濃縮至含生藥1 g/mL，4 ℃冰箱冷藏備用。2)動物：健康雄性Wistar大鼠50只，體質量(200±20)g，購自吉林大學白求恩醫學院動物實驗中心。3)試劑:ET免疫組化試劑盒購置北京中杉公司；NO ELISA試劑盒購置美國Ramp;D公司。4)儀器：Motic型自動圖像分析儀，離心機，全自動酶標儀。

1.2 方法 將大鼠隨機分為5組：正常對照組、心肌缺血模型組給予生理鹽水灌胃，2 mL/d;二參湯高、中、低劑量組，用濃度分別為100、50、20 g/kg的二參湯灌胃，2 mL/d，連續用藥14 d后，除正常對照組外，其余5組大鼠用垂體后葉素20 U/kg腹腔注射造成心肌缺血模型。采用雙抗體夾心法按照NO試劑盒說明書操作，酶標儀450 nm處測定樣品吸光度(A),繪制標準曲線，測定NO濃度。用10%水合氯醛麻醉各組大鼠，取心臟，生理鹽水沖洗，采用10%多聚甲醛固定心肌組織，石蠟包埋，5 μm厚連續切片，二甲苯脫蠟及梯度乙醇脫水后,按ET說明書操作，在光學顯微鏡視野下觀察,陽性著色為棕黃、棕褐及淺黃色胞漿。陰性對照用PBS液代替抗ET蛋白抗體。隨機計數10個視野并計算灰度值，然后取平均值作為該切片的灰度值。

2 結果

2.1 二參湯對心肌缺血大鼠血清NO含量的影響 見表1。

表1 對心肌缺血大鼠血清NO含量的影響 mg/mL

2.2 二參湯對心肌缺血大鼠心肌組織ET含量的影響 見表2。

表2 對心肌缺血大鼠心肌組織ET含量的影響 AU

3 小結

本研究采用ELSIA方法[3-4]觀察急性心肌缺血大鼠血清NO表達情況,結果顯示，心肌缺血模型組血清NO含量明顯低于對照組(Plt;0.5)，二參湯治療組NO水平明顯提高，提示二參湯治療心肌缺血可能通過提高NO表達發揮作用。ET是目前已知的最強的縮血管物質之一。本研究采用免疫組化方法[5]檢測心肌缺血大鼠心肌組織ET表達水平，結果顯示模型對照組ET表達明顯高于對照組，二參湯組可降低ET表達。通過以上實驗發現，二參湯能明顯提高NO表達，并抑制缺血心肌ET的釋放，提示二參湯在抗內皮損傷有顯著作用，可調節NO與ET之間平衡，進而減少冠心病急性心肌缺血引起的心肌損傷及壞死。

[1]李欣,周麗雅.二參湯對急性心肌缺血模型大鼠心肌細胞凋亡影響的實驗研究[J].吉林中醫藥,2012,32(4):398.

[2]周麗雅,李欣.二參湯對異丙腎上腺素致大鼠心肌缺血損傷的保護作用[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(13):204.

[3]欒杰男,李根,焦燕.通脈地仙丸對促進缺血心肌血管新生作用的研究[J].長春中醫藥大學學報,2011,27(4):667.

[4]羅千古,周玖瑤,吳俊標.丹參飲對心肌缺血小鼠血清ET-1、NO的影響[J].中藥材,2011,34(3):432-434.

[5]牛占忠,沈娟,范書萍.血府逐瘀湯對大鼠心肌缺血模型NO、ET-1含量的影響[J].河北中醫,2006,28(11):865-866.

R285.5

A

1007-4813(2013)03-0395-01

吉林省中醫藥管理局基金項目(編號:2010-080)。

吳澤民(1956-)，男，實驗師。研究方向：中藥生物化學研究。

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李 欣，講師，E-mail:xinxin2011@sina.com。

2013-01-28)