化濁解毒湯對實驗性大鼠胃癌前病變的實驗研究*

河北省中醫藥研究院 王紅霞 郭喜軍 董笑一 孫園園 (石家莊050031)

隨著“濁毒”［1－2］概念的提出，人們對濁毒致病理論［3］的研究也越來越深入?；瘽峤舛緶枪曹娎蠋熢诙嗄甑呐R床實踐中治療胃癌前病變的經驗方，認為引起癌基因陽性表達率升高的致病因素之一是濁毒的形成。［4］前期臨床研究［5］運用此方在濁毒理論指導下治療慢性萎縮性胃炎癌前病變具有良好療效，本文對胃癌前病變的癌基因做了實驗研究，具體報道如下。

1 材料

1.1 實驗動物 50 只清潔級體質量為250 g 的Wistar 雄性大鼠，購于河北醫科大學實驗動物中心，合格證號(冀)2006－2－00。

1.2 實驗物品 化濁解毒湯組成:苦參6 g，蒲公英15 g，黃芩9 g，黃連6 g，白豆蔻9 g，砂仁6 g，茯苓15 g，白術6 g，半枝蓮、白花蛇舌草各9 g。購自河北省中醫藥研究院，均為免煎顆粒劑。胃復春片(杭州胡慶余堂藥業有限公司生產，國藥準字Z20040003)。雷尼替丁膠囊(石家莊四藥有限公司生產，國藥準字H13022482)。甲硝基亞硝基胍(MNNG):購自上海潤成生物科技有限公司。其余試劑均由河北省中醫藥研究院濁毒實驗室提供。即用型Bcl－2、c－myc 免疫組化染色試劑盒，DAB 顯色劑，購自北京賽馳生物科技有限公司。

2 方法

2.1 藥物制備及給藥方法 取將中藥顆粒用沸水溶解配成濃度為2.26 g/mL 液體，備用。雷尼替丁膠囊:每次使用時配置成5.74 mg/mL 溶液灌胃，以供造模。胃復春研細末，用蒸餾水配置成5.74 mg/mL 藥液，備用。用藥劑量，按照動物體表面積折算成等效劑量，根據等效劑量為人的1日劑量×0.018×5 (人的標準體質量按70 kg 計算)，所得劑量作為中劑量，中劑量的2 倍為高劑量，中劑量的1/2倍為低劑量;化濁解毒湯的1 倍量為13 g/kg·d－1，胃復春為15 mg/kg·d－1。

2.2 動物分組及造模 將50 只清潔級體質量為250 g 的Wistar 雄性大鼠按隨機數字法分為空白對照組10 只、造模組40 只(再分為模型組、胃復春組、中藥低劑量組、中藥高劑量組，各組10 只)。空白組正常喂養，造模組造模參照陸氏等［6］的綜合法造模:動物分籠飼養，室溫22℃，相對濕度50%，N－甲基－N－硝基－N－亞硝基胍(MNNG)先用去離子水配成1 g/L 的儲備液(每周配制1 次)，稀釋為50 μg/mL 濃度的溶液，4℃冰箱避光保存，裝入涂有黑漆的避光飲水瓶內給大鼠自由飲用，每日更換1 次。雷尼替丁膠囊按0.03 g/kg·d－1灌胃，每日1 次。饑飽失常，2天喂食保證足量，1 天停食，造模20 周。從造模組隨機抽取1 只大鼠，空白組隨機抽取1 只大鼠，檢殺，進行病理學檢查，符合胃癌前病變病理診斷標準［7］說明造模成功。造模后1日開始給藥治療，中藥低、高劑量組分別按6.5 g/kg·d－1、26 g/kg·d－1，1 次/d 灌胃;西藥治療組按15 mg/kg·d－1，1 次/d 灌胃;正常對照組、模型組喂予蒸餾水灌胃，共治療4 周。

2.3 標本采集 治療結束后24 h 禁食、水，斷頭處死取出全胃，沿胃大彎側剪開，從胃竇部取胃黏膜組織用氯化鈉沖洗后，再用10%多聚甲醛固定24 h。

2.4 檢測指標及其方法 胃黏膜細胞Bcl－2、c－myc 癌基因蛋白的表達免疫組化染色方法采用SP 法具體實驗步驟按照試劑盒說明書進行，陽性判斷標準:Bcl－2 以棕黃色顆粒陽性;c－myc 以棕色顆粒為陽性。

2.5 統計學處理 采用SPSS13.0 軟件統計包，計數資料采用χ2檢驗，計量資料用(±s)表示，兩組間用t 檢驗，以P＜0.05 表示差異有顯著性。

3 結果

3.1 一般情況 觀察通過觀察大鼠反應靈敏度、毛色光澤、進食、大便等情況，結果化濁解毒湯能使胃癌前病變大鼠的一般情況得到改善，中藥高劑量組較為顯著。

3.2 病理學形態觀察 肉眼見正常組胃黏膜規整，表面光滑呈粉紅色，黏膜皺襞規整;模型組可見黏膜粗糙，皺襞紊亂呈灰暗，部分皺襞變淺或消失、點片狀出血、糜爛等;中藥高劑量組胃黏膜可見陳舊性出血點，顏色呈粉紅色，皺襞規整;中藥低劑量組與胃復春組胃黏膜呈灰暗色，皺襞欠規整，見點片狀出血。結果顯示中藥具有逆轉大鼠胃癌前病變病理組織學表現的作用，其中中藥高劑量組效果較為明顯。

3.3 各組大鼠胃黏膜細胞癌基因Bcl－2、c－myc 陽性表達 Bcl－2、c－myc 癌基因的陽性表達率治療后均降低。中藥高劑量組Bcl－2、c－myc 癌基因的陽性表達率均明顯降低，且差異有非常顯著性(P＜0.01)。中藥低劑量組與胃復春組相比差異無顯著性(P＞0.05)。結果顯示，化濁解毒湯可以降低胃癌前病變大鼠Bcl－2、c－myc 癌基因的陽性表達率，且劑量越大效果越好。詳見表1。

表1 各組大鼠胃黏膜細胞Bcl-2、c-myc 癌基因陽性表達比較

4 討論

胃癌前病變是一病理組織學概念，是指較正常組織或其他病理改變更容易發生癌變的組織病理變化。具體發病機制目前不完全明確，但已經有研究發現該病變形成與細胞增殖凋亡失衡有關。細胞凋亡受癌基因、抑癌基因的調控。張氏等［8］研究認為胃黏膜在逐漸發生癌變的過程中，存在多種胃癌相關基因。其中Bcl－2、c－myc 是公認的細胞凋亡抑制基因，王氏等［9］發現Bcl－2 蛋白在胃癌中高表達，其陽性率隨著癌癥分化程度的增高而增加，隨著癌旁組織不典型增生程度的加重而升高。C－myc 癌基因屬核蛋白基因，具有轉化細胞的能力，并具有與染色體DNA 結合的特性，在調節細胞生長、分化及惡性轉化中發揮作用。目前有關中藥對于c－myc 在胃癌及胃癌前病變中的影響研究日益增多，胡氏等［10］研究姜黃素能明顯抑制胃癌C－myc表達。李氏等［11］烏梅丸能明顯抑制胃癌及癌前病變的c－myc 表達。

胃前病變多在萎縮性胃炎基礎上發生，其臨床癥狀與萎縮性胃炎相似，常見上腹部疼痛、脹滿、堵悶、燒心、食欲差、噯氣等，故包涵在中醫學的“胃脘痛”、“吐酸”、“痞滿”等范圍。該病的發生與飲食不節、情志失調等相有關。筆者認為其發病與肝脾的生理功能失調密切相關。過食肥甘厚膩傷及脾胃，脾失健運，脾虛濕盛壅滯中焦，郁而成濁，蘊久化熱，熱壅成毒，而成濁毒內蘊之病機。化濁解毒湯方具有化濁解毒、清熱燥濕作用?，F代藥理學研究顯示黃連、蒲公英、白花蛇舌草均具有良好的抗腫瘤作用。現代研究還發現苦參還可使Bcl－2 等基因的陽性表達降低［12］。沈氏等［13］認為蒲公英單昧提取物對腫瘤細胞的增殖有明顯抑制作用，。錢氏等［14］認為白花蛇舌草提取物可體外抗腫瘤。朱氏等［15］發現白花蛇舌草作用于腫瘤細胞可誘導腫瘤細胞凋亡。張氏等［16］通過實驗研究顯示半邊蓮通過抑制上皮細胞異型增生，從而抑制癌前病變細胞異常增殖。王氏等［17］研究發現茯苓含有的茯苓多糖通過增強肌體特異性免疫功能而發揮抗腫瘤作用。沈氏等［18］研究發現白術揮發油具有抗抗腫瘤作用?，F代藥理研究證明砂仁中揮發油能促進胃腸消化液的分泌。［19］本實驗研究結果顯示胃癌前病變已表現出癌基因的異常表達，與模型組比較各治療組Bcl－2 癌基因表達均有不同降低，以高劑量組為明顯，說明化濁解毒湯能夠成為胃癌前病變的有效方劑，作用機制可能是通過大劑量的化濁解毒中藥降低Bcl－2、c－myc 癌基因的異常表達而逆轉胃癌前病變。

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