金水寶膠囊對慢性支氣管炎大鼠內皮素-1和一氧化氮含量的影響※

魏 東 支 政 高 侃 耿 惠 丁 旭 張 冬 方朝義

(河北省辛集市第二醫院急診科，河北 辛集 052360)

慢性支氣管炎為氣管、支氣管黏膜及其周圍組織的慢性非特異性炎癥，臨床以咳嗽、咯痰或伴有喘息及反復發作的慢性過程為特征，是一種嚴重危害患者身心健康的常見病、多發病，屬中醫學咳嗽、喘證、痰飲、肺脹等范疇。金水寶膠囊具有補腎保肺、秘精益氣之功效，是臨床治療慢性支氣管炎的常選藥物。為研究金水寶膠囊對慢性支氣管炎的作用特點和機制，我們應用金水寶膠囊干預慢性支氣管炎大鼠，并檢測了大鼠內皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)的含量變化，結果如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 健康SD大鼠50只，雌雄各半，體質量(200±20)g，由河北省實驗動物中心提供，動物合格證號：冀醫動字04057號。飼養于12 h光照/12 h黑暗的環境中，自由攝食和飲水。室溫控制在18～22 ℃，日照充足，相對濕度維持在60%～70%。

1.1.2 實驗藥物 金水寶膠囊(江西濟民可信金水寶制藥有限公司，國藥準字Z10890003)，實驗時用蒸餾水配制成所需濃度的混懸液；桂龍咳喘寧膠囊(山西桂龍醫藥有限公司，國藥準字Z20053135)，實驗時用蒸餾水配制成濃度為0.09 g/mL的混懸液。

1.1.3 主要試劑 ET放免藥盒由中國人民解放軍總醫院科技開發中心放免所提供；NO試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組 將50只SD大鼠隨機分為5組，即空白對照組、模型對照組、金水寶膠囊低劑量組、金水寶膠囊高劑量組和陽性藥對照組，每組各10只。

1.2.2 模型制備 除空白對照組外，其余4組大鼠用1%戊巴比妥鈉50 mg/kg腹腔注射麻醉，仰臥位固定于操作臺，暴露聲門，以靜脈套管針代替氣管導管，拔除針芯，快速插入氣管，將脂多糖(LPS)(美國Sigma公司提供) 200 μg注入氣管內?？瞻讓φ战M大鼠氣管內滴入0.9%氯化鈉注射液0.5 mL/只。

1.2.3 給藥方法 金水寶膠囊低、高劑量組分別予0.03、0.06 g/mL的金水寶膠囊混懸液，每日1次灌胃，每日用藥劑量為0.3、0.6 g/kg，分別相當于臨床成人用藥量的7、14倍。陽性藥對照組予0.09 g/mL的桂龍咳喘寧膠囊混懸液，每日1次灌胃，每日用藥劑量0.9 g/kg，相當于臨床成人用藥量的14倍?？瞻讓φ战M、模型對照組予0.9%氯化鈉注射液10 mL/kg，每日1次灌胃。5組均于造模結束后第2 d起連續灌胃給藥21 d。大鼠給藥劑量換算參照文獻[1]。

1.3 樣本制備及指標檢測 灌胃給藥結束后第2 d，斷頭取血，立即以4 ℃ 3 500 r/min離心5 min，分離血漿，并取血清，-20 ℃凍存待檢。肺組織勻漿的制備：將肺組織用冰0.9%氯化鈉注射液沖洗，濾紙吸濕后，稱取濕質量0.3 g左右，加入預冷的0.9%氯化鈉注射液，用電動勻漿器研磨，鏡檢未見完整細胞，制成10%的肺組織勻漿。4 ℃ 6 000 r/min離心5 min，提取上清液，用雙縮脲法測定蛋白含量，-20 ℃凍存待檢。ET-1采用放射免疫法，NO采用硝酸還原酶法。

2 結 果

2.1 各組大鼠血漿、肺組織中ET-1含量變化 見表1。

表1 各組大鼠血漿、肺組織中ET-1含量變化 ±s

與空白對照組比較，*P<0.01；與模型對照組比較，△P<0.01；與金水寶膠囊低劑量組比較，#P<0.05，##P<0.01；與陽性藥對照組比較，◇P<0.05

由表1可見，模型對照組大鼠血漿、肺組織中ET-1含量均高于空白對照組(P<0.01)，說明造模成功。金水寶膠囊高劑量組、陽性藥對照組大鼠血漿中ET-1含量均高于模型對照組(P<0.01)，金水寶膠囊低劑量組、金水寶膠囊高劑量組、陽性藥對照組大鼠肺組織中ET-1含量均高于模型對照組(P<0.01)。金水寶膠囊高劑量組、陽性藥對照組大鼠血漿、肺組織中ET-1含量均低于金水寶膠囊低劑量組(P<0.05，P<0.01)。金水寶膠囊高劑量組大鼠血漿中ET-1含量低于陽性藥對照組(P<0.05)。

2.2 各組大鼠血清、肺組織中NO含量變化 見表2。

表2 各組大鼠血清、肺組織中NO含量變化 ±s

與空白對照組比較，*P<0.01；與模型對照組比較，△P<0.01；與金水寶膠囊高劑量組比較，#P<0.05，##P<0.01

由表2可見，模型對照組大鼠血清、肺組織中NO含量均低于空白對照組(P<0.01)，說明造模成功。金水寶膠囊低劑量組、金水寶膠囊高劑量組、陽性藥對照組血清中NO含量均高于模型對照組(P<0.01)，金水寶膠囊高劑量組、陽性藥對照組肺組織中NO含量均高于模型對照組(P<0.01)。金水寶膠囊高劑量組血清、肺組織中NO含量均高于金水寶膠囊低劑量組、陽性藥對照組(P<0.05，P<0.01)。

3 討 論

根據中醫學對慢性支氣管炎的傳統認識和現代研究成果，我們以具有補腎保肺、秘精益氣功效的金水寶膠囊對慢性支氣管炎大鼠模型進行干預，觀察其對慢性支氣管炎過程中氣道舒縮狀態的作用機制。我們采用氣管內滴注LPS方法復制大鼠慢性支氣管炎模型，其組織病理學改變與文獻報道相近[2]，符合慢性支氣管炎病理學特征。

ET-1在肺血管收縮、氣道平滑肌痙攣及氣道和肺血管平滑肌增生等病理發展過程中起重要作用[3]。生理狀態下，ET-1能被迅速降解，以防止肺支氣管的過度收縮。但在病理狀態下，ET-1合成釋放過多，既能引起支氣管平滑肌痙攣，又可通過釋放多種炎性介質，促進白細胞黏附和平滑肌的增生引起氣道炎癥。NO是人體血管內皮細胞合成的重要物質之一，具有強大的舒張血管、抑制血管平滑肌細胞增殖及抗血小板凝集、黏附和釋放活性物質的作用，可防止血管痙攣和血栓形成[4]。

本研究結果顯示，采用氣管內滴注LPS復制的慢性支氣管炎大鼠模型，其血漿和肺組織中ET-1含量均較空白對照組明顯升高(P<0.01)，血清和肺組織中NO含量則明顯低于空白對照組(P<0.01)，表明在慢性支氣管炎發生、發展過程中，氣道炎癥促使血管內皮細胞和氣道上皮細胞釋放ET-1，ET-1過多合成，又進一步加重了氣道的炎癥反應和組織損傷。慢性支氣管炎狀態下，由于組織缺血缺氧，ET引起肺及周圍血管強烈收縮，增加心臟負荷，此為血管活性藥物的臨床應用提供了理論依據。

在慢性支氣管炎時，細支氣管及肺組織周圍有大量以淋巴細胞為主的慢性炎性細胞浸潤，并引起血管內皮細胞破壞，從而使NO生成減少，消耗增加，致使ET-1和NO比例嚴重失調。

經用藥干預，金水寶膠囊高劑量組、陽性藥對照組大鼠血漿、肺組織中ET-1含量均低于模型對照組(P<0.01)，金水寶膠囊高劑量組血漿中ET-1含量明顯低于陽性藥對照組(P<0.05)，說明金水寶膠囊高劑量組尤其是對血漿中ET-1的釋放有抑制作用。金水寶膠囊高、低劑量之間具有良好的量效關系。金水寶膠囊高劑量組、陽性藥對照組大鼠血清、肺組織中NO含量均高于模型對照組(P<0.01)，提示金水寶膠囊、桂龍咳喘寧膠囊均能提高大鼠血清、肺組織中NO的活性，金水寶膠囊高劑量組的作用更加明顯(P<0.05，P<0.01)。

金水寶膠囊可以有效抑制ET-1的產生，顯著提高NO活性，從而恢復肺血管、支氣管平滑肌正常舒縮狀態，控制肺臟慢性炎癥。

[1] 藥理實驗基礎知識系列之一：給藥劑量換算[EB/OL].http：//wenku.baidu.com/view/c1444b6b1eb91a37f1115c08.html.

[2] 李文杰.肺心平對肺心病肺動脈高壓大鼠ET和NO的影響[J].遼寧中醫雜志，2003，30(5)：348-349.

[3] 陳玲，羅文侗.慢性阻塞性肺病血漿內皮素-1含量的動態變化[J].中華內科雜志，1996，35(1)：51-52.

[4] 趙黎明，李兵，修清玉，等.持續氣道正壓通氣對阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征小型豬血漿NO、ET濃度及心肌結構的影響[J].第二軍醫大學學報，2009，30(6)：680-683.

[5] Barnes PJ，Belvisi MG.Nitric oxide and lung disease[J].Thorax，1993，48(10)：1034-1043.