冠心2號粉針中紅花的提取工藝研究※

李 洪 張 靜 高玉梅 姚東云 王 剛

(河北化工醫藥職業技術學院制藥工程系中藥制藥教研室，河北 石家莊 050026)

冠心2號粉針為河北化工醫藥職業技術學院制藥工程系研發自制中藥注射劑，主要由紅花、赤芍藥、丹參、川芎、降香5味中藥構成，具有活血止痛、化瘀行氣的功效。紅花是方中主要中藥，其主要有效成分為羥基紅花黃色素A[1]，能夠有效改善患者心肌供血、降低血小板凝聚、預防血栓形成等[2]。本研究通過以羥基紅花黃色素A為觀察指標，采用高效液相色譜(HPLC)法，觀察不同提取時間、提取次數、溶劑用量及提取溶劑的濃度對冠心2號粉針中羥基紅花黃色素A提取的影響[3]，選取最佳提取工藝，為冠心2號粉針的質量控制提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 高效液相色譜儀Agilent 1100(美國安捷倫科技有限公司)；CX-250型超聲波清洗器(北京醫療設備二廠)；電熱恒溫水浴鍋(天津中環實驗電爐有限公司)；賽多利斯BS210S電子天平(北京賽多利斯天平有限公司)；乙醇濃度檢測儀(河北省河間市宏利儀表廠)；冠心2號粉針(河北化工醫藥職業技術學院制藥工程系研發自制，藥物組成：紅花、赤芍藥、丹參、川芎、降香，中藥材均購自安國光明中藥飲片廠)；乙腈、甲醇為色譜純，其余為分析純；水為屈臣氏蒸餾水；羥基紅花黃色素A(中國藥品生物制品檢定所，111637-200901)。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相：甲醇-乙腈-0.7%磷酸水溶液(26∶2∶72)；檢測波長：403 nm；流速：1.2 mL/min。

1.2.2 觀察因素選取 紅花中主要活性成分羥基紅花黃色素A易溶于乙醇[4]，因此確定乙醇為提取溶劑，以提取時間、提取次數、乙醇用量(相對于藥材質量)及乙醇濃度為考察因素，每個因素設定3個水平層次(見表1)，采用4因素3水平9次[L9(34)]正交試驗進行研究測定。

表1 相關因素的3個水平層次劃分表

1.2.3 供試品溶液制備 按處方比例分別稱取5種中藥材，放入具塞錐形瓶中，精密稱質量，分別用規定濃度的乙醇按照正交設計進行超聲提取9次，放涼，再用同等濃度乙醇補足質量，定容，稱質量，合并提取液，用0.45 μm的微孔濾膜過濾，備用。

1.2.4 對照品溶液制備 取羥基紅花黃色素A對照品3.822 mg，精密稱定，置10 mL量瓶中，加入25%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上液1.0 mL置25 mL量瓶中，加入25%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

1.2.5 標準曲線制備 精密吸取對照品溶液1、2、4、6、8 μL分別注入高效液相色譜儀，按1.2.1項色譜條件下記錄色譜圖，測定峰面值。以羥基紅花黃色素A峰面積值為縱坐標，進樣量為橫坐標，做線性回歸，得回歸方程：Y=61 392X-15 816，R=0.999 9。結果表明，羥基紅花黃色素A對照品在0.072～0.395 μg的范圍內進樣量和峰面積與峰面積呈現良好的線性關系。

1.2.6 樣品測定 精密吸取供試品溶液15 μL，注入高效液相色譜儀，按1.2.1項色譜條件下記錄色譜圖，測定其峰面積值，根據標準曲線計算羥基紅花黃色素A含量，并根據試驗結果進行顯著性檢驗，列出方差分析表。

2 結果及分析

2.1 L9(34)正交試驗結果及方差分析結果 見表2、表3。

表2 L9(34)正交試驗結果

表3 方差分析結果

F0.05(2,2)= 19.00；F0.01(2,2)= 99.00

由表2、表3可見，以羥基紅花黃色素A為指標，對冠心2號凍干粉針中紅花提取工藝因素影響大小是：A> B> D> C，A因素對提取工藝影響最大，即提取時間。正交實驗結果顯示，冠心2號凍干粉針劑中羥基紅花黃色素A的提取工藝最佳條件：A2B2C3D3，即采用10倍藥材量的75%乙醇，提取2次，每次45 min。

2.2 工藝驗證 取紅花適量，按照最佳工藝條件確定的提取時間、提取次數、乙醇用量及濃度，平行試驗測定3組 見表4。

表4 工藝驗證

由表4可見，本方法檢驗結果穩定可靠。

3 討 論

本研究選取羥基紅花黃色素A為測定冠心2號凍干粉針中紅花的觀測指標，采用HPLC法檢測，以乙醇為提取試劑。取適量羥基紅花黃色素A對照品，加乙醇制成溶液，用紫外分光光度計掃描，結果在405 nm處有最大吸收，參考2010年版《中華人民共和國藥典》，確定檢測波長是403 nm。經L9(34)正交試驗得出影響冠心2號凍干粉針中紅花提取工藝的因素：提取時間>提取次數>乙醇用量>乙醇濃度，提取時間因素對提取工藝影響最大。冠心2號凍干粉針劑最佳提取工藝條件為：用10倍藥材量75%乙醇，提取2次，每次45 min。本方法簡便易行，準確可靠，可用于冠心2號凍干粉針的質量控制與檢測。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版：一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：141.

[2] 蘇慧，劉萍，溫薇，等.紅花黃色素凍干粉針對大鼠體內體外血栓形成的影響[J].中醫藥信息，2012，29(6)：29-30.

[3] 牛麗紅，劉軍凱，劉偉.紅花黃色素的提取與純化工藝研究[J].中成藥，2010，32(7)：1230-1232.

[4] 劉慶華，陳孝娟，于萍，等.紅花紅色素的提取工藝研究[J].新疆醫學，2011，41(5)：133-136.