RE-HPLC法測定芩翹通竅膠囊中黃芩苷的含量

河北省邯鄲市邯山區衛生監督所

楊俊捧 朱學梅△ 陳 征△ 丁 錘△△ 李國川△(邯鄲056001)

芩翹通竅膠囊是由黃芩、辛夷、蒼耳子、防風、白芷等中藥組成，具有清熱、散風、通竅的功效，用于風熱犯肺，內郁化火，氣血凝滯所至的傷風鼻塞，時輕時重，鼻癢氣熱，流涕黃稠，或鼻塞無歇，嗅覺遲鈍;急慢性鼻炎、鼻竇炎見上述諸證者。［1］由石家莊市中醫院制劑室制備供內部使用，其中對君藥黃芩中黃芩苷的含量測定未做規定，本文采用RE-HPLC法測定芩翹通竅中黃芩苷的含量，可用于該制劑的質量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀 (日本島津)，SPD-15C紫外檢測器;色譜柱為Diamonsil C18柱 (4.6 mm×200 mm，5 μm);KQ-500DV數控超聲波清洗器;石英自動雙重純水蒸餾器 (1810-BC);賽多利斯電子天平 (CP225D);紫外可見分光光度計 (756MC);水浴鍋 (TDA-8002);電子天平 (JA2103)。

1.2 試藥 ⑴ 試劑:黃芩苷對照品 (中國藥品生物制品檢定所，批號20100827);甲醇為色譜純，水為去離子水，其它試劑為分析純。⑵藥材:芩翹通竅膠囊 (石家莊市中醫院批次20110905、20110921、20111009)。

2 方法

2.1 色譜條 色譜柱為Diamonsil C18柱 (4.6 mm×200 mm，5 μm);流動相為甲醇-水-磷酸 (50︰50︰0.2);流速為1.0 mL/min;檢測波長為280 nm［2］;進樣量為10 μL;柱溫為室溫。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備:精密稱取黃芩苷對照品適量，置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至10 mL，制得64 μg/mL的黃芩苷對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備:取芩翹通竅膠囊內容物精密稱取0.2g，置50 mL錐形瓶中，加入70%乙醇［3］40 mL，超聲處理 (功率100 W，頻率50 Hz)50 min，取出，放冷，濾過，取續濾液用70%乙醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性溶液的制備:取不含黃芩的芩翹通竅膠囊陰性制劑，按2.2.2項下方法要求制得黃芩苷的空白對照溶液。

2.3 專屬性試驗 按上述色譜條件，分別取黃芩苷對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各10 μL注入高效液相色譜儀進行測定，結果表明黃芩苷分離效果較好，陰性對照無干擾。

2.4 精密度試驗 取同一對照品溶液進樣量 (64 μg/mL)10 μL，重復進樣6次，按上述色譜條件測定各自峰面積并計算RSD值。其結果表現精密度良好。精密度試驗結果是峰面積分別為 2 693 267、2 724 086、2 678 230、2 840 117、2 813 627、2 731 518，RSD值為2.648 1%。

2.5 線性關系考察 精密稱取黃芩苷對照品配制20.16、40.32、80.64、120.96、161.28 μg/mL 不同濃度的黃芩苷對照品溶液。分別精密吸取上述黃芩苷不同濃度對照品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，分別按照色譜條件項下方法測定峰面積積分值，以進樣濃度 (μg/mL)為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標繪制標準曲線。計算，得回歸方程為Y=31 006.238 2x-21 140.201 2，r=0.999 2其結果表明黃芩苷20.16～161.28 μg/mL范圍內線性關系良好。

2.6 重復性試驗 分別稱取同一批號樣品5份，按照供試品溶液的制備方法，制備5份供試液，按上述色譜條件，測定各自峰面積積分值并計算RSD值，其結果表明重復性良好。重復性試驗結果是峰面積分別為2 160 911、2 188 373、2 177 941、2 186 604、2 215 913、2 193 058，RSD值為0.91%。

2.7 穩定性試驗 取同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、12 h，按上述色譜條件測定各時間段的峰面積積分值，計算RSD值，其結果表明穩定性良好。穩定性試驗結果峰面積分別為19 397 009、1 915 524、1 929 499、1 943 547、1 929 312，RSD值為0.565 1%。

2.8 加樣回收試驗 取已測定含量的樣品約0.1 g，精密稱定，分別精密加入黃芩苷對照品 (1.120 00 mg)，按照供試品溶液的制備方法進行，進樣測定，測定峰面積積分值，計算回收率及RSD值，其結果表明回收率良好。詳見表1。

表1 加樣回收試驗

2.9 含量測定 取3批樣品，每批樣品取0.2 g，依法制備供試品溶液，檢測3批芩翹通竅膠囊中黃芩苷的含量。詳見表2。

表2 黃芩苷含量測定結果 (mg/粒)

3 討論

通過紫外可見分光光度計，對黃芩苷對照品溶液進行波長掃描，發現最優波長為280 nm。在提取過程中對提取時間進行了考察，發現超聲50 min提取已比較充分，方法簡單，故采用此法。本實驗方法具有專屬性強、準確度高、方法簡便、干擾小等優點，可作為芩翹通竅膠囊中黃芩苷的含量測定方法。

［1］裴香萍，張淑蓉.高效液相色譜法測定安肺膠囊中黃芩苷的含量［J］.世界中西醫結合雜志，2010，5(1):40

［2］楊存愛.正交試驗法優選清熱明目顆粒的水提工藝 ［J］.河北中醫藥學報，2010，25(2):37-38

［3］中國藥典委員會.中華人民共和國藥典 (一部) ［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010.282