三種方法檢測(cè)乙型肝炎表面抗原的臨床應(yīng)用及評(píng)價(jià)

孫蜀勇，廖 蓉，龔弘局

（武警四川總隊(duì)成都醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川成都 610041）

我國(guó)是乙型肝炎病毒（HBV）感染的高發(fā)區(qū)，其傳染性強(qiáng)、傳播途徑多、流行面廣、發(fā)病率高。其感染會(huì)導(dǎo)致血漿中出現(xiàn)特異性的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）及其他系列特性的血清標(biāo)志物。因此，血清中檢出HBsAg是乙型肝炎的早期診斷指標(biāo)之一［1］。但由于試劑、儀器、方法學(xué)等存在差異，在HBV感染初期，血漿中HBsAg的濃度較低，不同方法在檢測(cè)結(jié)果方面存在差異，會(huì)造成一定程度的誤診或漏診，甚至引發(fā)一系列醫(yī)療糾紛。本文對(duì)324例患者標(biāo)本利用不同檢測(cè)方法進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析比較。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本選擇 隨機(jī)選擇2010年1～10月本院住院部324例患者血清，其中198例乙型肝炎患者為試驗(yàn)組，126例非乙型肝炎患者為對(duì)照組。

1.2 試劑與儀器 時(shí)間分辨熒光免疫分析法（TRFIA）檢測(cè)試劑為上海新波生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的HBsAg定量檢測(cè)試劑盒，儀器為上海新波生物技術(shù)有限公司提供的SYM-810。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)試劑為北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的ELISA法定性試劑盒，儀器為深圳雷杜RT-6000酶標(biāo)儀。膠體金法（ACON）法采用的試劑由艾康生物技術(shù)（杭州）有限公司提供。

1.3 方法 324份血清標(biāo)本分別以TRFIA、ELISA、ACON同時(shí)測(cè)定HBsAg。其中ACON按照試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，TRFIA和ELISA除了按照試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)和作業(yè)指導(dǎo)書(shū)的要求進(jìn)行操作［2］外，這兩種方法同時(shí)加做各自的質(zhì)控品。

1.4 結(jié)果判定 ACON參照說(shuō)明書(shū)中判定方法并于實(shí)驗(yàn)后10～20min內(nèi)判讀結(jié)果；ELISA則用酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)定并記錄試驗(yàn)結(jié)果；TRFIA則根據(jù)試劑盒內(nèi)提供的不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線同時(shí)測(cè)定樣本濃度并記錄結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所得數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果利用SPSS分析，3種檢測(cè)方法，樣本例數(shù)大于40例，所以只看Pearson結(jié)果，P＜0.05，按α＝0.05的水準(zhǔn)拒絕H0接受H1，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 TRFIA、ELISA、ACON 3種方法檢測(cè)198例乙型肝炎患者血清和126例非乙型肝炎患者血清樣本、其靈敏度分別是98.0%、97.6%、91.4%；特異性分別是98.4%、97.6%、94.4%。可見(jiàn)，3種 HBsAg檢測(cè)方法的靈敏度和特異性：TRFIA＞ELISA＞ACON。所引起的假陽(yáng)性或假陰性均是ACON明顯高于TRFIA和ELISA（見(jiàn)表1和表2）。

表1 三種方法檢測(cè)324例血清HBsAg結(jié)果（n）

表2 三種檢測(cè)方法的靈敏度、特異性、假陽(yáng)性、假陰性比較（%）

3 討 論

ACON檢測(cè)HBsAg時(shí)，采用高度特異性抗體抗原反應(yīng)及免疫層析分析技術(shù)，試劑含有被預(yù)先固定于膜測(cè)試（T）的抗HBsAg抗體和包被在金標(biāo)墊上的抗HBsAg抗體金標(biāo)聯(lián)結(jié)物，利用雙抗體夾心法快速檢測(cè)樣本中是否含有HBsAg。具有操作簡(jiǎn)便、快捷以及操作人員不需技術(shù)培訓(xùn)，無(wú)需特殊儀器設(shè)備，試劑穩(wěn)定、便于保存等特點(diǎn)、可批量或單個(gè)測(cè)定樣本，不易受系統(tǒng)誤差的影響，可達(dá)到快速早期診斷的目的［3］。

ELISA具有操作簡(jiǎn)便、快速、敏感性高、特異性強(qiáng)、實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求簡(jiǎn)便、無(wú)放射性核素污染等優(yōu)點(diǎn)，可對(duì)HBsAg進(jìn)行定性分析，目前已成為臨床上應(yīng)用最為廣泛的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)之一。2010年，王靖等［4］提出血樣中內(nèi)源性物質(zhì)的干擾、外源性物質(zhì)的影響均可導(dǎo)致ELISA檢測(cè)HBsAg的準(zhǔn)確度降低。當(dāng)血樣中HBsAg濃度過(guò)高時(shí)，易引起鉤狀效應(yīng)，造成假陰性結(jié)果。

TRFIA是近年發(fā)展的應(yīng)用于定量檢測(cè)HBsAg濃度的新興標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)［5］。是使用三價(jià)稀土離子作為示蹤物，與具有雙功能結(jié)構(gòu)的螯合劑以及抗原形成稀土離子－螯合劑－抗原螯合物。當(dāng)標(biāo)記抗原、待測(cè)抗原共同競(jìng)爭(zhēng)抗體，形成復(fù)合物，利用時(shí)間分辨熒光分析儀，測(cè)定復(fù)合物中稀土發(fā)射的熒光強(qiáng)度，從而確定待測(cè)抗原的量。提高了檢測(cè)的靈敏度及特異性，有利于臨床上分析患者病情同時(shí)指導(dǎo)治療方案。而定量分析HbsAg的濃度變化，可預(yù)見(jiàn)急性乙型肝炎是否處于恢復(fù)期，對(duì)乙型肝炎的動(dòng)態(tài)觀察和病情監(jiān)視、治療具有積極的意義［6］。

3種方法在檢測(cè)HBsAg于實(shí)際工作中各有優(yōu)缺點(diǎn)，ACON簡(jiǎn)便快速，可進(jìn)行個(gè)別檢測(cè)，能滿足急診檢驗(yàn)和“床旁檢驗(yàn)”的需要但其靈敏度不高，在臨床應(yīng)用中應(yīng)引起高度重視。ELISA比ACON靈敏度高、特異性強(qiáng)、實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求簡(jiǎn)便、無(wú)放射核素污染，且成本低于TRFIA適用于臨床初篩實(shí)驗(yàn)或流行病學(xué)的調(diào)查研究。TRFIA方法特異性強(qiáng)，靈敏度高（可達(dá)到0.2～1ng／mL），標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍寬，分析速度快，標(biāo)記物制備簡(jiǎn)便，有效使用期長(zhǎng)，無(wú)放射性污染，是當(dāng)前檢驗(yàn)專業(yè)公認(rèn)的乙肝定量的很好方法，較傳統(tǒng)方法更準(zhǔn)確和更可靠，值得臨床推廣應(yīng)用［7］。

［1］ 王靜霞，肖飛，王婭琳，等.兒童乙型肝炎血清標(biāo)準(zhǔn)物的檢測(cè)分析［J］.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，2009，29（3）：281-281.

［2］ 楊凡，單詠梅，周宏，等.不同方法學(xué)檢測(cè)乙型肝炎血清標(biāo)志物結(jié)果的評(píng)價(jià)分析［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2010，25（9）：723-726.

［3］ 趙春燕，黃連貴，任力，等.膠體金免疫層析法在 HBsAg檢測(cè)中的應(yīng)用評(píng)價(jià)［J］.中國(guó)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2008，9（4）：214-215.

［4］ 王靖，高書(shū)鈺，張娜.探討改變酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)條件對(duì)ELISA室內(nèi)質(zhì)控的影響［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7（8）：329-730.

［5］ 徐曉玲，陳芳.乙型肝炎兩對(duì)半定量檢測(cè)結(jié)果分析［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，4（8）：902-904.

［6］ 歐翠華，熊符，陳健文.時(shí)間分辨免疫熒光法和電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)HbsAg的對(duì)比分析［J］.江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，2007，25（2）：99-101.

［7］ 崔曼曼，龔連生.兩種方法測(cè)定乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物的結(jié)果分析［J］.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2012，22（8）：1750-1751.