三種因素對痰培養結果的影響

時金艷，逄 宇，孟爾旺，潘端偉△

（1.江蘇省連云港市第四人民醫院 222000；2.中國疾病預防控制中心結核病預防控制中心，北京 102206）

我國是世界上結核病負擔最重的國家之一，據估算我國現有活動性肺結核患者500萬，其中涂陽肺結核患者150萬，每年新發肺結核患者約100萬［1－2］。因此，結核患者的早期發現和診斷對于我國結核病防治工作具有重要作用。目前，痰涂片是我國使用最為廣泛的結核病診斷技術［3］，然而，由于該方法的檢測靈敏度較低，因此僅作為篩查患者的方法；傳統羅氏培養被認為是實驗室診斷活動性肺結核的金標準［4］，與涂片相比，培養靈敏度有顯著的提高，因而在臨床診斷中發揮重要的作用。然而，在臨床工作中，許多因素都可能影響羅氏培養的結果，本研究本院臨床收集的611份痰標本，分別分析痰標本儲存時間，陽性級別，患者用藥情況等因素對痰培養結果的影響，從而為臨床痰培養工作提供一定的參考。

1 材料和方法

1.1 標本收集及儲藏 2010年1～10月，本院收集的611份涂陽肺結核患者痰標本，在收集標本同時獲得患者的抗結核治療狀況。未進行培養的標本保存于4℃冰箱。

1.2 方法

1.2.1 痰涂片及陽性級別 實驗室采用萋－尼氏染色法，結果報告標準參照《中國結核病防治規劃實施工作指南》執行。

1.2.2 實驗室痰培養 實驗室采用中性離心法［5］進行痰培養，每份患者標本培養兩管。以無菌吸取前處理液0.1mL，接種于2支中性羅氏培養基斜面上。將培養管斜面水平置于37℃培養24h后，直立置于37℃培養繼續培養。接種后第3天和第7天觀察培養情況，而后每周觀察并記錄培養結果，如在培養后第8周培養基上無菌落生長則報告培養陰性。其中，涂陽培陰率＝培養陰性的標本例數／（培養陽性的標本例數＋培養陰性的標本例數），污染率＝污染的培養管數／總培養管數。

1.3 統計學方法 采用 Microsoft Office 2003進行數據錄入，SPSS11.0進行數據統計分析，統計方法采用χ2檢驗。

2 結 果

2.1 不同因素對痰培養涂陽培陰率的影響 如表1所示，611份痰標本的涂陽培陰率為20.5%，當按照標本的陽性級別對標本進行統計時，611份標本中包括23份實際條數，176份1＋標本，182份2＋標本，123份3＋標本和107份4＋標本。隨著陽性級別的提高，痰標本的涂陽培陰率逐漸減小，從33.3%降至11.3%。選取涂陽培陰率最低的4＋的標本的涂陽培陰率作為基準，其余陽性級別的結果分別和4＋進行比較后，本文發現陽性級別為實際條數（χ2＝6.68，P＝0.017）、1＋（χ2＝10.04，P＝0.001）和2＋（χ2＝5.54，P＝0.025）的痰標本的涂陽培陰率顯著高于4＋的標本，而3＋（χ2＝0.703，P＝0.408）的標本涂陽培陰率與4＋差異無統計學意義。

表1 痰標本的陽性級別對涂陽培陰率的影響

除了標本的陽性級別，筆者還按照標本來源患者的抗結核治療的情況進行分析，結果如表2所示。在611份標本中，有410份來自于初治患者，201份來自于復治患者，初治患者和復治患者的涂陽培陰率分別為17.2%和27.1%，與初治患者相比，復治患者的涂陽培陰率顯著提高（χ2＝7.95，P＝0.007）。

表2 病例抗結核治療狀況對涂陽培陰率的影響

在標本儲存時間對涂陽培陰率的影響方面，筆者將標本的儲藏時間分為三個區間：分別為小于3d，3～7d（含7d）和大于7d，在三個區間的標本分別包括499份、87份和25份標本，其對應的涂陽培陰率分別為16.2%，40.2%和45.5%。與小于或等于3d的標本的涂陽培陰率相比，3～7d（χ2＝24.78，P＝0.000）和大于7d（χ2＝12.52，P＝0.002）標本的涂陽培陰率都有極顯著的提高，差異有統計意義（表3）。

表3 痰標本的儲存時間對涂陽培陰率的影響

2.2 不同因素對痰培養污染率的影響 本研究共完成了1 222管培養，其中培養結果為污染的73管，培養為非污染的1149管，污染率為6.0%。當按照陽性級別進行統計時，如表4所示，對陽性級別為實際條數、1＋、2＋、3＋、4＋的標本分別完成了46管、352管、364管、246管、214管培養，其中上述標本污染管數分別為4管、21管、25管、15管和8管，各陽性級別的污染率分別為8.7%、6.0%、6.7%、6.1%和3.7%。與4＋的污染率相比，實際條數（χ2＝2.11，P＝0.234），1＋（χ2＝1.36，P＝0.326），2＋（χ2＝2.45，P＝0.139），3＋（χ2＝1.34，P＝0.288）的污染率均與4＋相比差異無統計學意義。

表4 痰標本的陽性級別對污染率的影響

在完成的培養的1 222管培養中，有820管來源于初治患者，其余402管來自于復治患者，初治患者和復治患者的痰標本中培養的污染率各有51管和22管，污染率分別為6.2%和5.5%。分析初治患者和復治患者痰培養的污染情況時，差異無統計學意義（χ2＝0.27，P＝0.700）（表5）。

表5 病例的抗結核治療狀況對污染率的影響

如表6所示，標本儲存的不同時間后，包括小于或等于3 d、3～7d和大于7d，進行培養的管數分別為998管、174管、50管，各組污染管數分別為52管、20管、7管。當統計污染率時，小于或等于3d標本的污染率為5.2%，3～7d的污染率為11.5%和大于7d的污染率為14.0%。選擇小于或等于3d的標本為標準，其余兩組分別于其進行統計，發現3～7d（χ2＝10.15，P＝0.003）和大于7d（χ2＝6.92，P＝0.018）的標本比小于或等于3d的標本進行培養的污染率有顯著的提高，有統計學意義。

表6 痰標本的儲存時間對污染率的影響

3 討 論

結核分枝桿菌羅氏培養由于其靈敏度較高，因此被認為是實驗室診斷的金標準，但是由于該方法需要使用強堿性溶液對標本進行消化，且操作步驟比較繁瑣，因此，諸多因素對于培養的結果存在影響，其中標本的質量對于培養具有重要影響。

在本研究中，本文分析了不同因素對痰培養涂陽培陰率影響后，發現痰標本的陽性級別、患者的初復治情況以及標本的儲藏時間對涂陽培陰率均有顯著性影響。其中，標本的陽性級別越高，涂陽培陰率越低，且統計差異越顯著。上述結果可能是由于結核分枝桿菌羅氏培養采用高濃度的NaOH處理痰標本以達到消化痰液并去雜菌的作用，但是強堿性對結核分枝桿菌也有一定的破壞性，因此，隨著痰標本的陽性級別降低，涂陽培陰率提高。復治患者被認為是曾經或者正在使用抗結核藥物，本研究中復治患者標本的涂陽培陰率顯著高于初治患者，推測可能是由于抗結核藥物對結核分枝桿菌的殺傷作用，導致復治患者中的活菌的數目減少，而初治患者由于未服用抗結核藥物，因此痰標本中活菌比例較高，因此標本的涂陽培陰率在初治患者中顯著高于復治患者。此外，標本的儲藏時間較長使得標本中的活菌數目以及結核桿菌的活力下降，進而使痰培養的涂陽培陰率降低，該結果與Paramasivan等報道的結果類似［6］。

在污染率方面，本研究發現標本的儲藏時間對培養污染率有顯著性影響，而標本的陽性級別以及患者的初復治情況對培養污染率沒有影響。結核分枝桿菌屬于慢生長分枝桿菌，它的繁殖和代謝過程都較慢，體外培養周期較長（4周左右）。在標本的儲藏過程中，相比于結核分枝桿菌，其他微生物的繁殖速度顯著快于結核分枝桿菌，因此標本中的其他病原微生物以及在標本收集過程中污染的其他微生物所占比例不斷提高，而結核分枝桿菌所占比例不斷降低，上述狀況在培養結果中反映為污染率顯著提高。

涂陽培陰率和污染率被認為是實驗室中室內質控的一個重要標準，然而諸多因素均會影響培養結果，本研究第一次闡述了基層地市級結核病專科醫院開展痰菌培養以及影響痰菌培養的因素，通過本研究發現標本的儲藏時間對于涂陽培陰率以及污染率的影響最為顯著，因此，建議實驗室在收集到標本3d內應該開展傳統培養；后續研究將圍繞針對陽性級別較低以及復治患者的標本的前處理方法的改進展開，以保證痰菌培養獲得理想的結果。

［1］ 劉劍君，姜世聞，成詩明.中國結核病控制現狀分析及對策［J］.中國防癆雜志，2003，25（3）：129-131.

［2］ 陳海強，羅凱.207例痰標本涂片檢查對培養結果分析［J］.檢驗醫學與臨床，2011，8（6）：741-742.

［3］ 葛倫傳.肺結核的防治新進展［J］.臨床肺科雜志，2004，9：659-660.

［4］胡忠義.結核分枝桿菌耐藥性快速測定方法及其評價［J］.中華結核和呼吸雜志，2003，26（2）：107.

［5］ 衛生部疾病預防控制局，衛生部醫政司，中國疾控預防控制中心.中國結核病防治規劃實施工作指南［S］.北京：中國協和醫科大學，2009：12-13.

［6］ Paramasivan CN，Narayana A，Prabhakar R，et al.Effect of storage of sputum specimens at room temperature on smear and culture results［J］.Tubercle，1983，64（2）：119-124.