γ射線輻照單采血小板功能及臨床應用研究＊

何其通，余晉林，郭如華，羅益紅

（廣東省佛山市中心血站 528000）

輸血相關移植物抗宿主病（TA-GVHD）是輸血反應中最嚴重的并發癥之一，因其臨床表現缺乏特異性，易漏診和誤診并且病死率高達80%～90%，目前該病主要以預防為主［1］。TA-GVHD的主要原因是與輸入血液（成分）中含有活性的T淋巴細胞有關。國外從20世紀70年代就發現γ、X射線可以有效破壞淋巴細胞活性，從而射線輻照血液被認為是一種預防TA-GVHD的惟一有效、可靠的方法。怎樣的輻照劑量可以最大限度的滅活淋巴細胞而又可以最大限度的保持血小板的功能是一個值得探討的課題。本文就不同劑量的γ射線輻照單采血小板，對血小板的功能及臨床應用效果進行了觀察，現報道如下。

1 材料和方法

1.1 儀器 血液輻照儀Gammacell GC-3000Elan-I加拿大諾迪安公司，放射源為137Cs，活度為50.7E＋12Bq。流式細胞儀FACS Cabibur美國BD公司。顯微鏡Olympus CX32RTSF日本Olympus公司。

1.2 試劑 植物血凝素（PHA）、淋巴細胞分離液、瑞氏染液、CD41a、CD62p。

1.3 血液標本的制備輻照 將單采血小板分裝于5個血袋中，分別作為未輻照組（對照組）和25、30、35、40Gy不同劑量輻照組。輻照組樣本分不同劑量置于血液輻照儀中輻照。

1.4 實驗方法 將上述經輻照前后的血小板標本經淋巴細胞分離液分離出淋巴細胞后，用植物血凝素（PHA）刺激T淋巴細胞，使其轉化為淋巴母細胞，經瑞氏染色后用顯微鏡分別計數轉化為母細胞的百分率，選取轉化率為零的起始輻照劑量為實驗劑量。取80份用實驗劑量輻照前后的血小板按文獻［2］的方法用CD41a、CD62p標記后，用流式細胞儀檢測其陽性率。

1.5 臨床分組 選取40例接受化療的急性白血病患者隨機分為對照組和治療組，其中對照組20例，男13例，女7例，年齡17～49歲，中位數年齡32.5歲，其中急性淋巴細胞性白血病12例，急性粒細胞性白血病5例，急性單核細胞性白血病3例；治療組20例，男15例，女5例，年齡16～51歲，中位數年齡29.8歲，其中急性淋巴細胞性白血病8例，急性粒細胞性白血病5例，急性單核細胞性白血病7例。輸注前血小板計數均小于20×109／L，并伴有不同程度的出血表現。治療組病例輸注1個治療量經γ射線輻照單采血小板，對照組病例輸血1個治療量單采血小板。記錄患者輸前的血小板計數和輸血后1h血小板計數。

1.6 臨床療效判斷 血小板糾正增加指數（CCI）＝（輸后血小板計數－輸前血小板計數）×體表面積（m2）／輸入血小板總數（1011），CCI＞10為輸注有效［3］。

1.7 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件進行數據處理，兩計量資料的比較用t檢驗，計數資料率的比較用χ2檢驗。

2 結 果

表1 不同劑量照射前后淋巴細胞轉化結果 （n＝12）

由表1可知，經過4種不同的劑量輻照后，淋巴細胞轉化率均有顯著性變化，劑量為35Gy時，淋巴細胞的轉化率開始為0，說明35Gy能使淋巴細胞全部滅活。

表2 35Gyγ射線輻照前后血小板CD41a、CD62p陽性率的比較（n＝80）

表3 觀察組和對照組血小板輸注有效率的比較

3 討 論

TA-GVHD是因為輸入的血液中CD4輔助T淋巴細胞識別宿主表達的異源性主要和次要組織相容性抗原（MHC）而激活，進而分泌可溶性細胞因子如白細胞介素-2（IL-2），促使宿主抗原特異性細胞毒性T淋巴細胞活化增殖，從而形成效應細胞，誘導TA-GVHD的發生［4－5］。大量的實驗報道證實了輻照可以有效地誘導淋巴細胞的凋亡［6－7］。

CD41a、CD62p是血小板功能的檢測指標，檢測CD41a可反映血小板的聚集功能，檢測CD62p可知血小板是否處于激活狀態，也反映血小板的釋放功能［8］。CD62p在活化和非活化血小板間差別最顯著，而且不被血漿蛋白所掩蓋，不隨時間的推移而在活化血小板表面消失，是目前所知反映血小板活化與釋放最特異性的標志物［9］。

血液制品的最佳輻照劑量以既能滅活淋巴細胞又能維持其他血液成分的功能與活力和最小的損傷為選擇。早期國外推薦劑量為15Gy，后來分別報道了接受15～20Gy輻照血液后仍產生TA-GVHD的報道［10］。FDA把輻照中心靶劑量定為25Gy，其他部位不得低于15Gy，歐洲學術委員會制定的輻照劑量為25～40Gy。本研究探討了不同劑量輻照后淋巴細胞的滅活和對血小板功能的影響，結果表明劑量達到35Gy時，對血小板功能沒有明顯的損傷，可以有效地誘導淋巴細胞的凋亡，減少活性淋巴細胞的數量，起到預防TA-GVHD的發生的效果，是一個比較適合的輻照劑量。

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