兩種抗凝劑對(duì)血小板的影響因素臨床分析

劉學(xué)斌， 鄒雪松， 黃冬梅， 董志偉

(1.河北省承德市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科， 河北 承德 067000 2.河北省承德市中心血站， 河北 承德 067000)

目前，隨著工作量的逐漸加大，血常規(guī)已經(jīng)由全自動(dòng)分析儀代替了手工計(jì)數(shù)，而血常規(guī)標(biāo)本大部分以EDTA鹽作為抗凝劑，EDTA鹽對(duì)紅、白細(xì)胞形態(tài)影響很小，根據(jù)國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員1993年文件建議，血細(xì)胞計(jì)數(shù)用EDTA二鉀作為抗凝劑。但極少數(shù)患者或正常人血液中血小板會(huì)受EDTA－K2的影響而發(fā)生聚集，導(dǎo)致血細(xì)胞分析儀在計(jì)數(shù)過程中出現(xiàn)血小板的降低，即發(fā)生EDTA依賴性假性血小板減少(PTCP)。由此所造成的血小板計(jì)數(shù)的假性減少會(huì)給臨床醫(yī)生的診治過程帶來很大困擾，極易造成誤診而引起不必要的麻煩。現(xiàn)就我院1例EDTA依賴性假性血小板減少癥患者的血液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分析報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料:患者，男，42歲。因感冒上呼吸道感染來我院，查血細(xì)胞分析PLT計(jì)數(shù)為42×109L－1，無出血、瘀點(diǎn)、瘀斑等癥狀。

1.2 儀器與試劑ABX Panter60血細(xì)胞分析儀;Olympus CX21顯微鏡;20ul微量吸管;EDTA－K2抗凝管，枸櫞酸鈉抗凝管;全血質(zhì)控物由ABX公司提供;瑞氏染液(珠海貝索公司生產(chǎn))，血小板稀釋液(自配)，細(xì)胞計(jì)數(shù)板。

1.3 方 法

1.3.1 用微量吸管取患者未抗凝血20ul于血小板稀釋液中，后加于細(xì)胞計(jì)數(shù)板，與顯微鏡下手工計(jì)數(shù)三次，取平均值。

1.3.2 分別用EDTA－K2抗凝管和枸櫞酸鈉抗凝管抽取患者靜脈血，上下顛倒混勻，分別于5min、10min、20min、30min、1h、2h 在 ABX Panter60 血細(xì)胞分析儀上進(jìn)行計(jì)數(shù)，所有操作均按操作規(guī)程進(jìn)行。

1.3.3 將EDTA－K2抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血和指尖血各做血涂片一張，用瑞士染液按照操作步驟染色，顯微鏡下觀察。

2 結(jié)果

2.1 參考結(jié)果:計(jì)數(shù)三次結(jié)果分別為:161、156、172，取平均值結(jié)果為 163×109L－1。

2.2 EDTA－K2抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血在不同時(shí)間血小板計(jì)數(shù)，見表1。

表1 EDTA－K2抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血在不同時(shí)間血小板計(jì)數(shù)

2.3 三張血涂片經(jīng)瑞氏染液染色后顯微鏡下可見:EDTA－K2抗凝血涂片中大部分血小板呈聚集狀態(tài)，僅可見少量分散狀血小板，且聚集的血小板大小不一，多數(shù)分布在血膜的兩側(cè)和尾部;枸櫞酸鈉抗凝血和未抗凝血涂片中血小板大小正常，散在分布，無聚集現(xiàn)象。

3 討論

乙二胺四乙酸(EDTA)鹽對(duì)紅細(xì)胞、白細(xì)胞形態(tài)影響很小，因此國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(ICSH)推薦將EDTA－K2作為血細(xì)胞計(jì)數(shù)的抗凝劑，目前在世界各地廣泛應(yīng)用［1］。但EDTA二鉀可誘導(dǎo)血小板某些成分發(fā)生改變，從而發(fā)生聚集、堆積等現(xiàn)象，導(dǎo)致血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀不能正常識(shí)別血小板，而使血小板假性減少。到目前EDTA引起的血小板假性減少的機(jī)制并不完全清楚，其發(fā)生的原因可能有兩點(diǎn)，其一是在作為免疫介導(dǎo)的血液中，出現(xiàn)的冷抗血小板自身抗體［2］，這種EDTA依賴的冷抗血小板自身抗體可與單核細(xì)胞或淋巴細(xì)胞膜上Fc受體結(jié)合，出現(xiàn)衛(wèi)星現(xiàn)象;其二是EDTA可導(dǎo)致血小板活化，因而改變血小板膜表面某種隱匿性抗原構(gòu)象，從而與存在于血漿中的自身抗體結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物激活了細(xì)胞膜中的PLA、PLC、AA、ADP、52TH等活性物質(zhì)。這些血小板活性物質(zhì)又能不同程度的活化血小板纖維蛋白原受體，促使血小板與纖維蛋白原聚集成團(tuán)，出現(xiàn)血小板聚集現(xiàn)象，導(dǎo)致血小板假性減少。

在本實(shí)驗(yàn)中結(jié)果2中可看出，用EDTA－K2抗凝的血細(xì)胞分析中血小板計(jì)數(shù)明顯低于手工計(jì)數(shù)的參考結(jié)果，而且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，血小板計(jì)數(shù)呈下降的趨勢(shì);而用枸櫞酸鈉抗凝的結(jié)果接近手工計(jì)數(shù)的參考結(jié)果，且沒有隨著時(shí)間的延長(zhǎng)有明顯的趨勢(shì)性變化，再結(jié)合結(jié)果3的涂片鏡檢可以看出此患者是EDTA依賴性血小板假性減少。在血細(xì)胞分析的過程中，血小板的聚集可導(dǎo)致血細(xì)胞分析儀錯(cuò)將聚集的血小板誤認(rèn)為白細(xì)胞或巨大血小板從而導(dǎo)致出現(xiàn)低血小板計(jì)數(shù)。通過本實(shí)驗(yàn)可以看出，EDTA－K2能導(dǎo)致血小板假性減少，而且，是隨著時(shí)間的延長(zhǎng)血小板的計(jì)數(shù)也隨之下降，所以時(shí)間也可能是加速EDTA依賴性血小板減少的另一因素;而枸櫞酸鈉可以用作疑似PTCP患者的篩查血小板的抗凝劑使用;而未抗凝血加于血小板稀釋液中的手工計(jì)數(shù)方法仍作為血小板計(jì)數(shù)的參考方法。PTCP的發(fā)生率雖然很低，有報(bào)道其約為0.09－0.21%，但在近幾年的文獻(xiàn)報(bào)道中并不少見。在2011年劉春生等的報(bào)道中［3］，他們對(duì)EDTA－K2和檸檬酸鈉這兩種抗凝劑做了針對(duì)正常人群的對(duì)比分析，最后得出EDTA－K2能導(dǎo)致血小板假性減少，檸檬酸鈉能一定程度降低血小板計(jì)數(shù)的影響，同時(shí)也指出，時(shí)間也能影響血小板的假性減少，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)論一致。在張茹、張濤的報(bào)道中［4］，他們是用EDTA－K2和肝素鈉作為對(duì)比進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)分析，其結(jié)論為EDTA－K2能導(dǎo)致血小板假性減少，肝素鈉可作為PTCP患者篩查血小板的抗凝劑來使用。而對(duì)于檸檬酸鈉和肝素鈉是否可以作為PTCP患者篩查血小板的抗凝劑，有待在以后的實(shí)驗(yàn)中分析證實(shí)。

綜上所述，日常工作中，在進(jìn)行血常規(guī)檢測(cè)時(shí)，如遇血小板顯著減少，血小板直方圖異常，且患者無淤點(diǎn)、淤斑等出血情況，可考慮假性血小板減少。對(duì)于這種血小板減少的患者，首先要進(jìn)行血涂片鏡檢，觀察血小板的數(shù)量和形態(tài)，尤其要注意觀察血膜的尾部和兩側(cè)是否有血小板的聚集;其次，告知患者后，用枸櫞酸鈉抗凝管重新抽取患者血液，做血細(xì)胞分析，并抽取患者未抗凝血20ul于血小板稀釋液中，手工計(jì)數(shù)作為參考方法，以避免因血小板假性減少而引起的誤診，為臨床醫(yī)生提供準(zhǔn)確可靠的診斷依據(jù)。

［1］張文，周強(qiáng)，黃憲章.臨床檢驗(yàn)抗凝劑特點(diǎn)及應(yīng)用［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2005，26(8):1158－1160.

［2］魯平，王丹，靳偉東，等.32例EDTA－K2抗凝血引起血小板假性減少的結(jié)果分析［J］.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，44(6):618－619.

［3］劉春生，柳發(fā)虎，等.不同抗凝劑對(duì)血小板檢測(cè)結(jié)果的影響［J］.臨床醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8(8):899－900.

［4］陳言偉，張一民，董娟.EDTA依賴性假性血小板減少癥1例分析［J］.中國(guó)誤診學(xué)雜志，2011，11(4):849.