電針對骨癌痛模型大鼠下丘腦β－內啡肽的影響

趙文麟，趙文樹，黃洪偉，仲麗麗

(1．黑龍江中醫藥大學，黑龍江哈爾濱150040;2．上海龍華醫院，上海200032;3．黑龍江省中醫研究院，黑龍江 哈爾濱150001)

《素問·保命全形論》篇載:“凡刺之真，必先治神。”《靈樞·刺節真邪》亦談:“用針之類，在于調氣。”故對實驗用動物采用電針“調氣”，即調節機體的氣血運行。本實驗觀察電針攢竹穴對骨癌痛大鼠所引起的下丘腦神經元結構中β－內啡肽(β－Endorphin，β－EP)含量的改變，說明電針對骨癌痛的影響和調節作用。

1 材料與方法

1．1 實驗動物與分組

重70～80 g雌性Wistar大鼠1只，SD雌性大鼠40只，體重180～200 g，由山東省青島市派特福德白鼠養殖專業合作社提供。購入后適應飼養1周，清潔飲水，自由攝食，每次行為實驗前均進行環境適應性訓練，以排除應激干擾。行為學測定時間在上午10點至下午2點之間。按隨機數字表將SD大鼠隨機分為空白組、假手術組、模型組、電針組，每組10只。

1．2 主要試劑與儀器

Walker256乳腺癌細胞株由中國協和醫科大學提供，10%水合氯醛(武漢博士德生物工程有限公司)，Rabbit anti－β－EP試劑、DAB顯色試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)，JL－C2刺激器(與上海嘉龍教儀廠合作改裝)，0．22 mm×13 mm針灸針(蘇州東邦醫療器械有限公司)，YLS－3E電子壓痛儀(山東省醫學科學院設備站)，YLS－6B智能熱板儀(濟南益延科技發展有限公司)，韓氏電針儀LD202H(北京華衛公司)，Bx－600光學顯微鏡(上海儀圓光學儀器有限公司)，眼科手術器械、針、線、血管鉗、鑷子等。

1．3 模型制備

將1只重70～80 g雌性Wistar大鼠腹部注射入制備好的0．5 ml乳腺癌walker256細胞懸液(約2×107cells/ml)，約6～7天后，大鼠腹部明顯膨隆時，抽取大鼠腹水制成2×104cells/ml的大鼠腹水瘤細胞懸液，置于冰上保存。對模型組和電針組SD大鼠左側脛骨結節下外方與骨面呈45°朝尾側進針，注入細胞懸液5 ul(1×105cells)，用無菌骨蠟封閉針孔。假手術組注入等量無菌生理鹽水。空白組不做處理。

1．4 治療方法

電針組在手術后8天開始治療，取“攢竹”穴，參照人體穴位骨性標志對大鼠穴位定位，在大鼠的額骨近內眥前1/3處，內眶緣斜面向內眥方向平刺5 mm，以0．22 mm×13 mm的毫針進行針刺，雙側接電刺激器，頻率:2/100 Hz，強度:0．3 mA。每次留針 13 min，每日1次，連續治療6天，停1天，再連續治療6天。

1．5 行為學測定

每日觀察大鼠的皮毛、精神狀態、步態以及對食物和水的攝入量、體重等是否有改變及改變的程度變化。

1．5．1 機械性痛敏(PWT) 各組于造模前用YLS－3E電子壓痛儀測定鼠尾基礎機械痛閾，并于造模5天開始隔天1次測量各組大鼠鼠尾機械性痛閾。

1．5．2 熱痛敏(PWL) 各組于造模前使用YLS－6B智能熱板儀測定基礎熱痛閾，造模5天開始隔天1次評價大鼠對熱刺激的反應。

1．6 免疫組化測定

1．6．1 取材及染色 造模21天行為學測定完畢后，將大鼠斷頭，冰浴條件下迅速取腦組織后行固定、石蠟包埋、切片;HE染色、常規進行β－EP免疫組化法測定。

1．6．2 圖像分析 BX－600光學顯微鏡下觀察，每組選10張切片，每張切片選取3個視野，測量大鼠下丘腦β－EP樣陽性纖維的光密度和顆粒面積。應用Image－Pro Plus 6．0光學分析軟件進行分析，對不同組別下丘腦核團β－EP陽性纖維進行定量分析。

1．7 統計處理

實時定量數據用SPSS18軟件進行分析，以平均值±標準差(ˉx±s)表示，組間差異采用方差分析(ANOVA)，以P＜0．05作為顯著性差異的標準。

2 結果

大鼠于造模8天左右逐漸出現皮毛不亮、喜臥、不喜動，偶爾出現間歇性跛行，食物攝入量較空白組大鼠減少，體重增加幅度減小。

2．1 機械痛敏(PWT)

造模9天起，模型組機械性痛敏與空白組、假手術組和電針組相比有顯著性差異(P＜0．05);電針組與空白組、假手術組相比有顯著性差異(P＜0．05)。各組大鼠機械性痛敏見圖1。

2．2 熱痛敏(PWL)

造模11天起，模型組熱痛敏與空白組、假手術組和電針組相比有顯著性差異(P＜0．05);電針組與空白組、假手術組相比有顯著性差異(P＜0．05)。各組大鼠熱痛敏見圖2。

圖1 各組大鼠機械性痛敏比較

圖2 各組大鼠熱痛敏比較

2．3 β－EP免疫組化

圖4 各組大鼠β－EP免疫組化結果比較

從封三彩圖3及圖4可見各組大鼠下丘腦內β－EP陽性纖維的密度有所不同，腦內β－EP陽性纖維假手術組、電針組及模型組含量均高于空白組?？瞻捉M含量為0．21 ±0．05;假手術組含量為 0．37 ±0．04;電針組含量為 0．62±0．02;模型組含量為 0．69±0.03。其中模型組與空白組及假手術組比較差異性顯著(P＜0.05)，電針組與空白組及假手術組比較差異性顯著(P＜0．05);電針組與模型組比較差異性顯著(P ＜0.05)。

3 討論

本實驗所得行為學結果與小鼠骨癌痛時間點有所區別［1］。β －EP 是機體的主要的內源性阿片肽［2］，在腦內主要分布在下丘腦、杏仁核等部位。它的主要功能是使機體在應激狀態下保持平衡，主要調節疼痛、心血管和免疫功能［3］。β－EP經下丘腦垂體門脈系統進入血液中，參與體內多種生理活動，有疼痛、免疫、應激、抗心肌缺血［4］以及味覺嗜好［5］等。β － 內啡肽的鎮痛作用較強，因此與鎮痛作用的聯系最緊密。

根據免疫組化法檢測結果推測電針可能抑制大鼠腦內β－EP的釋放，甚至可能抑制β－EP的合成，使腦內的β－EP樣陽性纖維的密度減低，從而減少與腦內阿片受體的結合，以減輕癌癥骨轉移帶來的疼痛。

癌癥骨轉移給患者帶來的疼痛機制比較復雜，經研究表明與中樞神經系統的β－EP含量有關。出現骨轉移疼痛時機體生理機能降低、微環境穩態失衡，因而出現各系統功能紊亂，β－EP在機體內的生物學效應較為廣泛，其主要作用是針對應激時全身各系統的機能協調，起到調節機體的各種生理功能的作用，但其作用機制還需進一步研究。

通過本實驗證明2/100 Hz電針可以抑制大鼠腦內因骨癌痛被激活的β－EP。使其與腦內阿片受體結合產生作用的機會減少，從而減輕β－EP對骨癌痛的作用。

骨癌痛時機體出現功能紊亂，β－EP在機體內主要作用是協調和統一應激時全身各系統的機能，它可 以調節機體的各種生理功能。

［1］ 任炳旭，馬正良，靳艷卿，等．身痛逐瘀湯對骨癌痛小鼠痛行為及脊髓星形膠質細胞活化的影響［J］．中國中西醫結合雜志，2011，31(3):381－385

［2］ 韓焱晶，代偉偉，彭磊，等．針刺對應激性胃黏膜損傷大鼠血漿和下丘腦中β－內啡肽含量的影響［J］．針刺研究，2011，36(5):341－346

［3］ 王世英．阿片肽研究的回顧和展望［J］．生物學通報，2001，36(1):5－7

［4］ 涂乾，王華，王亞文，等．電針內關穴后下丘腦室旁核、β－內啡肽及白細胞介素1的變化［J］．中國臨床康復，2006，10(11):126－128

［5］ 馬雋，劉麗萍，趙毅剛，等．味覺嗜好學習對大鼠下丘腦β－內啡肽表達及運動行為的影響［J］．河北體育學院學報，2007，21(4):9－11