培元解毒法對無癥狀HIV感染者CD4+計數和血清IL-8、sIL-2R水平的影響*

王丹妮，姜 楓

(1.河南中醫學院第一附屬醫院艾滋病臨床研究中心，鄭州 450000;2.國家中醫藥管理局艾滋病重點研究室(扶正排毒)，鄭州 450000;3.廣西中醫藥大學附屬瑞康醫院，廣西中醫(中西醫結合)艾滋病研究中心，南寧 530011)

無癥狀HIV感染期之“無癥狀”是指尚未出現艾滋病發病的典型癥狀。此期正邪相爭激烈，一旦邪盛正衰則各種疾病紛至沓來［1］。我們從“十五”科技攻關時便提出將無癥狀HIV感染期作為中醫藥治療艾滋病的黃金切入點［2］，使用扶正排毒片以培元解毒法為治療艾滋病無癥狀期的基本法則，以期達到提高患者生存質量、延緩發病甚至終生帶毒不發病的全新理念，經臨床驗證療效確切［3］。為進一步了解其對無癥狀HIV感染者免疫功能調節的影響，對32例患者治療前后CD4+計數和血清白細胞介素8(Interleukin-8，簡稱IL-8)、可溶性白細胞介素2受體(soluble Interleukin-2 receptor，簡稱 sIL-2R)水平變化進行檢測，并與健康體檢者比較，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

治療組為培元解毒法組，32例來源于2009年6月在河南省南陽市宛城區收集的未接受高效抗逆轉錄病毒療法的無癥狀HIV感染者，臨床診斷均符合國家衛生部2005年頒布的《艾滋病診療指南》無癥狀HIV感染期診斷標準［4］。培元解毒法治療組中男性17例，女性15例，年齡分布為32～65歲，平均(43.38±8.89)歲。服用中藥扶正排毒片(藥品批號L2006Z002)每次5片，每日3次，溫開水沖服，共服用6個月。治療前后分別采集血漿標本。22名健康對照的血漿標本全部來自河南中醫學院第一附屬醫院體檢中心，其中男性13例，女性9例，年齡28～57歲，平均年齡(48.95±9.44)歲，無重要臟器疾患及各種病毒感染，肝、腎功能試驗正常。2組在性別構成、年齡上基線一致(年齡t=0.441，P=0.661;性別x2=0.188，P=0.665)，具有可比性。

1.2 觀察指標及方法

CD4+淋巴細胞水平檢測使用美國BD公司生產的FACS Calibur流式細胞儀進行檢測。IL-8及sIL-2R水平檢測應用熱電上海儀器有限公司生產的MK3型酶標儀，于450nm處讀取數值，根據標準質量濃度制定標準曲線，在標準曲線上查找相應的值。以上檢測由國家中醫藥管理局艾滋病重點實驗室工作人員負責。

1.3 統計學方法

采用SPSS 13.0軟件統計分析，所有統計檢驗均為雙側檢驗，取α=0.05水準;基礎值的均衡性分析采用t檢驗和χ2檢驗，對數值變量采用均數±標準差(±s)表示，治療組療前療后比較采用配對t檢驗，治療組和對照組比較用獨立樣本t檢驗并做相關分析。

2 結果

2.1 培元解毒法治療組治療前后CD4+淋巴細胞計數變化比較

表1顯示，32例患者治療后CD4均數由治療前的(368.63±111.54)個/mm3上升為(412.72±159.63)個/mm3。治療組32例，有效15例，穩定10例，無效7例，總有效率78.13%。

2.2 治療前后血清IL-8水平變化比較

表2顯示，治療前治療組血清IL-8水平明顯高于健康對照組(P＜0.05);治療6個月后與治療前比較明顯下降(P＜0.05)，但仍高于健康對照組;治療后與健康對照組比較差異無統計學意義(P＞0.05)。

2.3 治療前后血清sIL-2R水平變化比較

表2顯示，治療前治療組血清sIL-2R水平明顯高于健康對照組(P＜0.05);治療6個月后與治療前比較雖有下降但仍高于健康對照組，無統計學意義(P＞0.05);治療后與健康對照組比較，差異仍有統計學意義(P＜0.05)。

2.4 直線相關分析

治療前sIL-2R與CD4+淋巴細胞計數呈負相關，CD4與 sIL-2R療前相關度(r=－0.461，P=0.008＜0.05)呈負相關關系。

表1 培元解毒組治療前后CD4+計數水平(個/mm3，±s)及有效率比較

表1 培元解毒組治療前后CD4+計數水平(個/mm3，±s)及有效率比較

注:培元解毒組治療后與治療前CD4+計數平均升高44.09個/mm3，有效率78.13%

例數 治療前 治療后 有效 穩定 無效 有效率(%)培元解毒組32 368.63±111.54 412.72±159.63 15 10 7 78.13 t=－1.888 P =0.068

表2 健康對照組與培元解毒組治療前后IL-8、sIL-2R(±s)(pg/ml)

表2 健康對照組與培元解毒組治療前后IL-8、sIL-2R(±s)(pg/ml)

注:治療組治療后與治療前比較:*P=0.004＜0.05，＊＊P=0.867＞0.05

IL-8 sIL-2R組 別 例數 治療前 治療后 治療前 治療后培元解毒組 32 8.61±5.25 6.03±5.05*1267.91±612.28 1257.01±436.31＊＊健康對照組 22 5.50±2.54 839.35±380.97 2組P值比較0.013 0.649 0.003 0.001

3 討論

培元解毒治則是基于病因病機辨證提出的，是通過國家“973”重點課題資助項目“艾滋病中醫病因及發病機制的研究”驗證的。艾毒是一種新發疫毒，經血絡進入人體，在體內化濕生熱，表現為毒、濕、熱等病邪特征。艾毒直接損傷并漸進性地消耗人體元氣，導致多臟腑之氣虧損，進而氣化失常，繼發痰飲、瘀血、毒聚等實邪。早期即表現為虛實夾雜證候，實質為本虛標實。其虛實交錯、互為因果，終致變證叢生，命元諸臟衰竭，陰陽離決而亡。因此，艾毒入絡是艾滋病的直接病因，伏而傷元是其核心病機，培元解毒是其基本治則［5、6］。扶正排毒片由黃芪、西洋參、女貞子、山茱萸、白花蛇舌草、連翹、生白術、防風、甘草等組成。黃芪與西洋參合用，在藥性上一涼一溫，從歸經上涵蓋心、肺、脾、肝、腎，通過補益五臟之氣從而達到“培元”之效果。連翹、白花蛇舌草、山茱萸三藥合用，歸經既考慮到五臟、三焦，更重要的是三藥分別入小腸、大腸、膀胱，使濕熱得以從二便排出，從而起到“清熱解毒利濕”之功效。現代藥理研究顯示，西洋參、黃芪、連翹、白花蛇舌草等合用可增強機體免疫功能，抗HIV病毒、抗腫瘤等。在以前的臨床研究［3］和本次研究中［7］已觀察到，培元解毒中藥干預無癥狀HIV感染者在癥狀體征、免疫學指標、生存質量等方面的療效，且臨床用藥安全，但對該藥的作用機理尚未開展深入研究。我們試圖從免疫激活角度尋找突破口，因此本研究通過對無癥狀HIV感染者治療前后CD4+計數和血清IL-8、sIL-2R水平進行探索。

人體感染HIV后出現的免疫學異常可以概括為［11］:① CD4+T淋巴細胞數量減少;② CD4+T淋巴細胞功能障礙;③異常免疫激活。異常免疫激活可以造成CD4+T細胞的功能喪失和數量耗竭［8］，因此增加CD4+T淋巴細胞數量和功能，抑制異常免疫激活是很有必要的。

HIV主要侵犯人CD4+淋巴細胞，導致其數量上的減少和功能缺陷，CD4+是維護機體免疫功能的重要細胞，是免疫反應的中心細胞，其數量及功能變化是評價疾病發展和藥物療效的重要指標。本研究CD4+計數統計結果顯示，治療后CD4+計數與療前在α=0.05水準上無統計學意義(P＞0.05)。但治療6個月后CD4+計數平均升高44.09/mm3，提示扶正排毒片具有穩定或提高感染者CD4+計數的作用。

酶聯免疫檢測結果顯示，治療前培元解毒治療組的IL-8、sIL-2R水平顯著高于健康對照組(P=0.013或0.003＜0.05)，證實無癥狀HIV感染者確實存在異常免疫激活現象，這與Sodora DL［9］提出的人體感染HIV后出現重要的免疫學異常改變與異常免疫激活是一致的。IL-8是一種多源性炎性細胞因子，對中性粒細胞、嗜堿性粒細胞和T淋巴細胞有強烈趨化作用，并釋放活性物質，加強免疫反應，造成組織損傷。檢測結果顯示，無癥狀HIV感染者血清IL-8在療前與健康對照組在α=0.05的水平上差異有統計學意義(P＜0.05)，且血清IL-8水平明顯高于非治療組，與以往研究報道急性炎癥應答一致［10］。其升高的機理可能是無癥狀HIV感染者本身也可以刺激單核細胞、上皮細胞等分泌IL-8，使血清中IL-8水平升高，是否還有其他原因導致IL-8水平升高尚待進一步的研究與探討。sIL-2R是1985年發現的重要免疫抑制因子，在許多T細胞介導的免疫反應性疾病中是增加的［11］。檢測結果顯示，無癥狀HIV感染者血清sIL-2R在療前與健康對照組在α=0.05的水平上差異有統計學意義(P＜0.05)，血清sIL-2R水平高于健康對照組，與以往研究報道一致［12］。其升高的機理可能是無癥狀HIV感染者免疫功能受損時，激活的T淋巴細胞對IL-2Rα 鏈的表達失去控制［13，14］，活化的 T 淋巴細胞膜mIL-2Rα鏈成分脫落于血清及其他體液中，造成sIL-2R水平增高。

治療后數據顯示，IL-8水平明顯下降與治療前比較差異有統計學意義(P=0.004＜0.05)，說明培元解毒法對血清IL-8有較好的干預效果。治療后sIL-2R水平略有下降，與治療前比較無統計學意義(P=0.867＞0.05)，但仍高于健康對照組(P=0.001＜0.05)，說明異常免疫激活中，sIL-2R與無癥狀HIV感染者更加密切，與其有關的細胞免疫參與其發病的全過程，可以作為了解無癥狀HIV感染者體內細胞免疫狀態、治療效果及預后判斷的重要指標之一。

CD4與 sIL-2R前相關度(r=－0.461，P=0.008＜0.05)呈負相關關系，這與馮鮮妮等報道［12］sIL-2R隨著HIV感染者CD4的下降而進行性增高，CD4與sIL-2R呈負相關(r=－0.656)是一致的。說明細胞因子充分參與了T細胞的活化，并在T細胞激活中發揮著重要作用，且能夠彼此提供預后的信息。

據報道，在許多免疫系統被激活的炎癥性疾病中有變化，且與機體免疫狀態、病情輕重及預后密切相關。本文從免疫激活的角度入手，研究中醫藥治療艾滋病療效機制是一個新的熱點。檢測無癥狀HIV感染者血清IL-8、sIL-2R水平變化，對了解病情、指導臨床實踐和療效判定均具有重要意義，可以作為了解無癥狀HIV感染者體內細胞免疫狀態、治療效果及預后判斷的參考指標之一，同時說明培元解毒法立論的正確性。

［1］王丹妮，陳秀敏，蔣自強，等.濕邪與艾滋病免疫功能低下的相關性探討［J］.中華中醫藥雜志，2012，27(12):3038-3040.

［2］彭勃，王丹妮.無癥狀HIV感染期是中醫藥治療艾滋病的黃金切入點［J］.中國臨床康復，2006，10(19):166-167.

［3］郭會軍，劉學偉，王丹妮.扶正排毒片對艾滋病無癥狀期的療效觀察［J］.上海中醫藥雜志，2006，40(1):20-21.

［4］中華醫學會感染病學分會艾滋病學組.艾滋病診療指南［J］.中華傳染病雜志，2006，24(2):133-143.

［5］郭選賢，郝秀梅，謝世平，等.艾滋病中醫病因命名探討［J］.河南中醫學院學報，2008，23(5):5-8.

［6］姜楓，彭勃，謝世平，等.基于“艾毒傷元”假說的艾滋病中醫病因病機臨床調查表的制定［J］.時珍國醫國藥，2011，22(11):2777-2778.

［7］王丹妮.扶正排毒片對無癥狀HIV感染者免疫功能調節的研究［D］.南京:南京中醫藥大學博士學位論文，2011.

［8］Kelley CF，Kitchen CM，Hunt PW，et al.Incomplete peripheral CD4+cell count restoration in HIV-infected patients receiving long-term antiretroviral treatment［J］.Clin Infect Dis，2009，48(6):787-794.

［9］Sodora DL，Silvestri G.Immune activation and AIDS pathogenesis［J］.AIDS，2008，19，22(4):439-446.

［10］Nanthakumar NN，Fusunyan RD，Sanderson I，et al.Inflammation in the developing human intestine:A possible pathophysiologic contribution to necrotizing enterocolitis［J］.Proc Natl Acad SciUSA，2000，97(11):6043-6048.

［11］SHVIDEL L，DUKSIN C，TZIMANIS A，et al.Cytokine release by activated T-cell in large granular lymphocytic leukemia associated with autoimmune disorders［J］.Hematol J，2002，3(1):32-37.

［12］馮鮮妮，吳昊，汪習成，等.可溶性白介素-2受體對艾滋病病毒感染者和(或)艾滋病患者的臨床意義［J］.臨床薈萃，2004，19(4):189-192.

［13］Di LORENZO G，PACOR M L，MORICI G，et al.Measurement of inflammatory mediators of eosinophils and lymphocytes in blood in acute asthma:serum levels of ECP influence the bronchodilator response［J］.Int Arch Allergy Immunol，2002，127(4):308-315.

［14］EVEREKLIOGLU C，ER H，TURKOZ Y，et al.Serum levels of TNF-alpha，sIL-2R，IL-6，and IL-8 are increased and associated with elevated lipid peroxidation in patients with Behcet’s disease［J］.Mediators Inflamm，2002，11(2):87-93.