毛節纈草揮發油成分分析及鎮靜作用實驗研究

杜 娟，劉 娟，王麗紅，楊春榮，胡艷秋，王偉娥，彭惜媛，吳 嵐

（佳木斯大學藥學院，黑龍江 佳木斯154007）

毛節纈草Valeriana alternifolia Bunge var.stoloniferaBar.et Skv.為敗醬科（Valerianaceae）纈草屬（Valeriana）多年生草本植物[1]，其根及根莖入藥。由于該屬植物的藥用價值具有鎮靜安神、解痙止痛的功效，已得到高度重視和廣泛的研究[2]，毛節纈草在東北地區分布較多，目前，對于毛節纈草的顯微鑒別研究已經有報道[3]，本實驗對黑龍江省分布小興安嶺的毛節纈草中揮發成分及其鎮靜作用進行了分析研究，旨在為其開發利用提供依據。

1 實驗材料與方法

1.1 材料與試劑

毛節纈草采自黑龍江省伊春地區，經本校生藥學教研室劉娟教授鑒定為敗醬科植物毛節纈草Valeriana alternifolia Bunge var.stolonifera Bar.et Skv.的根莖；乙醚（分析純）上海哈勃技術公司；無水碳酸鈉（分析純）：天津科茂化學試劑有限公司。昆明健康小鼠，清潔級，體重18～25g，由佳木斯大學動物實驗中心提供。

1.2 儀器

GC－17A型氣相色譜儀，日本島津公司；MSQP5050A質譜儀，日本島津公司，電子恒溫電熱套，天津市泰斯特儀器有限公司；揮發油提取器，上海玻璃儀器廠（密度小于1）。ZZ－6小鼠自主活動測試儀，成都泰盟科技有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 提取方法

毛節纈草揮發油提取采用水蒸氣蒸餾法：取粉碎后的藥材過篩，采用水蒸氣蒸餾裝置提取揮發油。

1.3.2 色譜條件

氣相色譜條件：檢測器FID；彈性石英毛細管色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）；進樣口溫度280℃ ；流 速41.8 mL／min；爐初始溫度230℃；柱前壓40.00kPa；分流比50：1；進樣量2μL；程序升溫：60℃（保持3 min）4℃／min80℃（保持2 min）4℃／min225℃（保持10 min）。

質譜條件：EI離子源；電子能量70ev；掃描范圍40～500AMV；掃描速率1000amu／s；離子源溫度230℃；接口溫度280℃；倍增電壓1.30 KV；檢索譜庫 DATABASE／NIST98L[4]。

1.3.3 鎮靜作用實驗

取小鼠60只，雌雄各半，隨機分為5組：生理鹽水對照組，揮發油低劑量組（0.03g／kg）、揮 發 油 中劑量組（0.06g／kg）、揮發油高劑量組（0.12g／kg），地西泮組（1 mg／kg），每組12只。對正常小鼠自發活動的影響，于末次給藥30 min后，置于自發活動儀內，先適應環境5 min，再記錄10 min內小鼠的自發活動次數。試驗要求在安靜、光線較暗的環境下進行。

1.4 統計學方法

所得實驗數據用SPSS11.0統計軟件，組間結果作t檢驗。

2 實驗結果

2.1 揮發油含量測定

采用毛節纈草揮發油所含成分的含量為峰面積，利用歸一化的面積百分比計算總含量。從分離的額67個峰中，用質譜鑒定出34個化合物，占總含量的91.12%。

2.2 揮發油成分測定

通過圖譜檢索鑒定化合物，毛節纈草揮發油成分中主要以烯、酯、醇 為主，其 中 乙 酸 龍腦 酯 （30.57%）、龍 腦（7.41% ）、石竹烯（3.98% ）、蒎 烯（3.12% ）、莰烯（2.23% ）、石竹烯（3.98%）、纈草酮（1.22%）等，另外還含有芳樟醇（0.26% ）、百里香甲醚（0.11% ）、α－松油醇（0.72% ）、α－古蕓烯（1.03%）、α－欖香烯（2.68%）、3－乙烯基甲醇（0.23% ）、大根香葉烯D（0.91% ）、鄰苯二酚（0.96% ）、紫羅蘭酮（0.95% ）、佛手柑油烯（1.86% ）、烯戊酸（1.06% ）、匙葉桉油烯醇（0.16%）、紫丁香酚（0.83%）、紅沒藥醇（0.08%）、α－杜松醇（0.34%）、十八烯酸（0.13%）、十八酸二烯酸甲酯（0.45% ）等。

2.3 鎮靜作用結果

與生理鹽水組比較，毛節纈草揮發油提取物的高、中、低劑量組能顯著抑制小鼠自主活動次數，差異具有顯著性（P＜0.05）。提示毛節纈草揮發油成分具有鎮靜的藥理作用，結果見表1。

表1 毛節纈草揮發油成分對小鼠自主活動次數的影響（n＝12，次，±s）

表1 毛節纈草揮發油成分對小鼠自主活動次數的影響（n＝12，次，±s）

注：與生理鹽水對照組比較，＊P＜0.05，＊＊ P＜0.01。

組給藥前活動次數 給藥后活動次數生理鹽水對照組 142.3±26.0 17.6±26.別2揮發油低劑量組 140.1±34.2 164.6±29.5＊揮發油中劑量組 142.2±26.7 161.9±23.2＊＊揮發油高劑量組 141.8±34.2 157.6±32.2＊＊地西泮組 142.5±29.7 61.3±13.8＊＊

3 討論

本實驗通過對毛節纈草提取的揮發油進行成分的分析，確立毛節纈草的GC－MS分析色譜條件，共鑒定出34種成分，以莰烯、蒎烯、檸檬烯、龍腦、乙酸龍腦酯等含量多占比例較多，鑒定的成分占揮發油總量的91.12%。在毛節纈草中發現纈草酮成分（1.22%），在陳虎彪報道的毛節纈草揮發油成分中未見有[5]。通過小鼠行為學觀察毛節纈草揮發油提取物的高、中、低劑量組均能顯著抑制小鼠活動，說明提取物具有顯著的鎮靜活性，目前有關纈草屬的藥理研究中，均認為是揮發油和纈草素共同發揮鎮靜安神作用作用，后續實驗將從鎮靜安神機制進行研究，這也為毛節纈草的開發利用提供了科學數據。

[1]傅沛云主編.東北植物檢索表[M].第2版，北京：科學出版社，1995，627－629

[2]朱有昌主編.東北藥用植物[M].哈爾濱：黑龍江科學出版社，1989，1073－1076

[3]楊春榮，單靜穎，劉莉，等.毛節纈草的解剖構造觀察[J].黑龍江醫藥科學，2003，26（6）：25－26

[4]杜娟，黃英，劉娟，等.栽培黑水纈草中揮發油成分分析[J].黑龍江醫藥科學，2010，33（6）：32－33

[5]陳虎彪，徐學明，趙玉英.毛節纈草揮發油化學成分的研究[J].中國中藥雜志，1998，23（7）：418－419