免疫組化染色在體液細(xì)胞塊中的作用

吳才良，龍瓊先，劉欣雅，王平

（南充市中心醫(yī)院·川北醫(yī)學(xué)院第二臨床學(xué)院病理科，南充 637000）

在臨床實踐中，很多患者就診時已出現(xiàn)體液，為了明確形成體液的原因，常抽取體液做病理學(xué)分析。過去常用的檢測方法是標(biāo)本離心后涂片法，此方法收集到的細(xì)胞較少，背景干擾因素多；目前廣泛應(yīng)用于臨床的體液檢查方法是液基細(xì)胞學(xué)和離心沉淀物細(xì)胞塊檢查。本院對送檢的體液標(biāo)本首先做液基細(xì)胞學(xué)檢查，如有疑問，則進(jìn)一步做離心沉淀物細(xì)胞塊檢查。但僅用HE觀察切片，難以明確病變性質(zhì)及組織來源，為此本文淺談免疫組化檢測在體液中的作用及價值，并探討免疫標(biāo)記的選擇方法。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集本院2009年1月～2012年10月臨床各科室送檢的體液標(biāo)本148例，男86例，女62例；年齡20～85歲，平均年齡53歲；其中22例患者行手術(shù)切除病變。選用CK（pan）、CK7、CEA、TTF-1、NapsinA、P63、CD56、Syn、CDX-2、TTF-1、WT-1、PAX-8、ER、PRVim、LCA 等抗體，均從北京中杉生物公司購買。

1.2 方法

將送檢的新鮮體液標(biāo)本（放置時間＜2h）置于50mL離心試管內(nèi)，2 000r/min，離心10min，棄去上清液，如沉淀物較少，再次中速離心5～10min棄上清液，沉淀物中加入10%中性甲醛50mL固定12h，收集所有固體物用包埋濾紙包裹，放入脫水機(jī)中脫水、透明、浸蠟，切片后脫蠟至水，進(jìn)行常規(guī)HE染色。需要行免疫組化染色的病例按常規(guī)要求進(jìn)行染色，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封固。顯微鏡下觀察HE及免疫組化染色結(jié)果，并將體液離心沉淀物細(xì)胞塊診斷與手術(shù)切除組織診斷進(jìn)行比較。

2 結(jié)果

2.1 HE及免疫組化診斷

148例體液標(biāo)本經(jīng)觀察HE染色切片后，確定為良性病變78例，惡性病變56例，另有14例無法判斷其良惡性。14例無法判斷良惡性病例經(jīng)免疫組化染色后診斷為惡性9例；65例惡性病例經(jīng)免疫組化染色后能確定組織來源60例，無法確定組織來源5例。

2.2 體液中的腫瘤類型

148例體液標(biāo)本中，經(jīng)免疫組化染色診斷惡性腫瘤65例，確定組織類型60例，常見腫瘤有肺癌、卵巢癌、肝癌，其類型具體分布如下（見表1）。

表1 腫瘤在體液中分布類型（n）

2.3 離心沉淀物細(xì)胞塊診斷與手術(shù)切除組織診斷的比較

具有體液表現(xiàn)的148例患者中22例進(jìn)行了手術(shù)切除，術(shù)后組織均診斷為惡性腫瘤；體液離心沉淀物細(xì)胞塊檢查漏診病例1例，符合率為95.5%。

3 討論

1853年Downe率先從體液中發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤，開創(chuàng)了漿膜腔積液脫落細(xì)胞學(xué)診斷的先河。而積液細(xì)胞學(xué)診斷最重要的是鑒別良性或惡性，其次識別組織類型，同時探討原發(fā)部位［1］。常規(guī)使用的離心涂片法，陽性細(xì)胞的檢出率較低，主要原因是：1）常規(guī)涂片法中所收集的細(xì)胞數(shù)量少，標(biāo)本中大量細(xì)胞隨殘液棄去。2）制出的涂片厚薄不均，細(xì)胞重疊堆積，常常造成診斷困難而出現(xiàn)假陰性。3）常規(guī)涂片中高分化腺癌細(xì)胞與間皮細(xì)胞鑒別困難，又無法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，不能做出肯定的診斷。制備離心沉淀細(xì)胞塊切片及免疫組化聯(lián)合多抗體檢測明顯減少了人為主觀因素的影響，使結(jié)果更具科學(xué)性。據(jù)文獻(xiàn)［2］報道細(xì)胞塊切片檢查較傳統(tǒng)的細(xì)胞學(xué)涂片診斷陽性率高10倍。奉孝榮等［3］回顧性分析85例組織學(xué)證實的胸腹腔腫瘤所致的胸腹水沉積物，離心沉淀細(xì)胞塊檢查全部為陽性，而傳統(tǒng)的細(xì)胞學(xué)涂片陽性為49例。

免疫組化是腫瘤病理診斷中常用的技術(shù)，其結(jié)果有助于確定腫瘤的良惡性、組織亞型及組織來源。就體液細(xì)胞學(xué)的病理診斷聯(lián)合應(yīng)用多種抗體的免疫組化有助于鑒別間皮細(xì)胞和惡性上皮細(xì)胞，有助于確定轉(zhuǎn)移性腫瘤的組織來源［4－6］。本研究應(yīng)用免疫組化檢測14例HE染色無法確定性質(zhì)的病例發(fā)現(xiàn)有9例為惡性，應(yīng)用免疫組化染色確定組織類型有60例。免疫組織化學(xué)可提高陽性檢出率，由常規(guī)HE染色的37.8%提高到47.3%。在本研究中，我們認(rèn)為應(yīng)結(jié)合臨床病史、其他相關(guān)檢查及HE鏡下特點選擇合適的標(biāo)記。首先要確定體液中細(xì)胞是增生的間皮細(xì)胞還是癌細(xì)胞，常選用的標(biāo)記是 MC、D2-40、EMA、CEA；其次是針對不同體液確定腫瘤細(xì)胞的組織來源。胸水病例主要考慮肺癌相關(guān)免疫標(biāo)記，如TTF-1、P63、NapsinA及CK14；腹水病例主要考慮胃腸癌、肝癌、女性卵巢癌及男性前列腺癌等相關(guān)免疫標(biāo)記，如CDX-2、MUC-2、AFP、CA125、PSA 等。Westfall等［7］研究認(rèn)為對男性患者的體液細(xì)胞宜選用calretinin、TTF-1、P504S、PSA 和 CDX-2，女性患者宜選用calretinin、TTF-1、WT-1、PAX-8、ER、PR和CA125。

本研究顯示免疫組化檢測體液細(xì)胞的病理診斷與手術(shù)切除組織的病理診斷符合率為95.5%，僅有1例因腫瘤組織為混合性組織類型，體液細(xì)胞有限，未能做出準(zhǔn)確的診斷。由此可見，結(jié)合臨床病史及HE鏡下特點，選擇恰當(dāng)?shù)拿庖邩?biāo)記，可以準(zhǔn)確地診斷體液細(xì)胞的性質(zhì)，協(xié)助判斷組織來源。對無手術(shù)指征的晚期腫瘤患者，檢測體液細(xì)胞的免疫表型能確定腫瘤的性質(zhì)及組織來源，有助于晚期腫瘤患者的治療。

［1］馬正中，闞秀，劉樹范，等.診斷細(xì)胞病理學(xué)［M］.鄭州：河南科技出版社，2000：249-250.

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