hMSH6和P53在散發性結腸癌中的表達及意義

1 材料與方法

1.1 臨床資料保定市第一中心醫院病理科2010年-2012年經手術切除的結腸癌患者的存檔蠟塊60例，以距腫瘤邊緣＞5.0cm的正常癌旁組織60例作為對照，所有病例均經病理明確診斷。所有結腸癌患者臨床資料完整，術前未接受放療和化療，TNM分期為Ⅰ-Ⅳ期。除外家族性多發性腺癌(FAP)患者和HNPCC患者。

1.2 方法與試劑石蠟包埋的組織4μm連續切片，采用免疫組化Envision二步法檢測hMSH6和P53蛋白的表達，一抗(購自福州邁新生物技術開發有限公司，工作濃度1:100)4℃孵育過夜，DAB顯色，蘇木素復染。以PBS代替一抗作為陰性對照。以細胞核中出現棕黃色顆粒為陽性反應。

1.3 結果判定每張切片計數5個高倍視野(10×40)，每個視野計數100個細胞。根據Fromowitz等[5]的方法判定結果:①不著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;②著色細胞占計數細胞百分率≤5%為0分，6%-20%為1分，21%-50%為2分，≥51%為3分。以染色程度與染色細胞百分率得分乘積為最后得分:0-1分為陰性，2分以上為陽性。

1.4 統計分析采用SPSS 17.0統計軟件處理數據，計數資料行卡方檢驗，相關分析采用Spearman相關分析。

2 結果

2.1 SCC和癌旁正常組織hMSH6和P53蛋白的表達情況 hMSH6和P53蛋白陽性產物位于細胞核。SCC中hMSH6的陽性表達率明顯低于癌旁組織，P53的陽性表達率明顯高于癌旁組織，差異均具有統計學意義(P＜0.01，P＜0.05)。見表1。

表1 SCC和癌旁組織hMSH6和 P53蛋白的表達情況[n(%)]

2.2 hMSH6和 P53表達與SCC臨床病理特征的關系SCC中hMSH6蛋白的表達與腫瘤浸潤深度和發生部位有關(P＜0.05);與患者性別、年齡、腫瘤大小、組織學分級、有無淋巴結轉移無關(P＞0.05)。SCC中P53蛋白的表達與以上臨床病理特征均無關(P＞0.05)。見表2。

表2 hMSH6和P53表達與SCC臨床病理特征的關系(n=60)

2.3 SCC中hMSH6與P53表達的相關性 SCC中hMSH與P53的表達呈負相關(P＜0.05)。見表3。

表3 SCC 中hMSH6與P53表達的相關性

3 討論

MMR是近年來在研究HNPCC時分離出來的一組遺傳易感基因，是一種能修復細胞中DNA堿基錯配的安全保障體系。MMR系統失活導致腫瘤發生的途徑主要是引起微衛星不穩定(MSI)以及MMR系統失活直接導致癌基因激活或抑癌基因失活，從而誘發癌變[6]。

hMSH6作為MMR家族的重要成員，在結腸癌的發生發展中具有重要作用。hMSH6亦稱為G/T錯配結合蛋白(GTBP)，1995年發現hMSH6參與構成錯配結合因子，1997年首次報道了人類hMSH6基因突變，其突變時癌基因和抑癌基因的突變率增加，進而引起遺傳不穩定復制錯誤增加和MSI，使細胞的腫瘤易感性增加[7]。本研究發現，60例SCC中hMSH6蛋白陽性表達率為76.7%與林武華等[8]的研究結果一致，表明SCC中確實存在hMSH6的低表達。本研究還發現，SCC中hMSH6陽性表達與腫瘤浸潤深度和發生部位有關，因此，對高危人群進行hMSH6篩查，可為結腸癌的發生和轉歸提供依據。

p53基因分為野生型和突變型兩種，野生型p53為抑癌基因，它在細胞中含量很少且半衰期短，免疫組化法很難檢出;突變型p53是一種癌基因，能促進細胞的惡性轉化，在細胞中其蛋白的表達量較高且半衰期延長，通過免疫組化法檢測到的P53蛋白基本上是突變型P53蛋白[9]本研究發現，60例SCC中，突變型P53蛋白的陽性表達率為55%，明顯高于癌旁正常組織，說明突變型p53基因與結腸癌的發生關系密切;但本研究未發現突變型p53基因與SCC的臨床病理特征有關。

但一個癌基因的激活不足以引起細胞的惡性轉化，本研究中SCC組織hMSH6蛋白與突變型P53蛋白的表達呈負相關，表明SCC中hMSH6蛋白的低表達可能是p53蛋白高表達的原因之一，二者共同作用導致了SCC的發生發展。hMSH6蛋白低表達和突變型P53蛋白高表達可能是結腸癌發生的危險因素，二者與SCC發生的確切關系還有待進一步的研究。

[1]de la Chapelle A. Genetic predisposition to colorectal cancer[J].Nat Rev Cancer, 2004, 4(10):769-780.

[2]Esteller M, Levine R, Baylin SB, et al. MLH1 promoter hypermethylation associated with the microsatellite instability phenotype in sporadic endometrial carcinomas[J]. Oncoqene,1998, 17(18):2413-2417.

[3]Knudson AG. Hereditary predisposition to cancer[J]. Ann N Y Acad Sci, 1997, 833:58-67.

[4]Walther A, Houlston R, Tomlinson I. Association between chromosomal instability and prognosis in colorectal cancer: a meta-analysis[J]. Gut, 2008, 57(7):941-950.

[5]Fromowitz FB, Viola MV, Chao S, et al. ras p21 expression in the progression of breast cancer [J].Hum Pathol, 1987,18(12):1268-1275.

[6]Kang Y, Zhang Z, Wang J, et a1. Expression of hMSH2 gene and mutant p53 in sporadic digestive tract tumors [J]. Chin Med J(Engl), 2003, 116(1):53-56.

[7]Fong K, Zimmerman P. Microsatellite instability and other molecular abnormalities in non-small cell lung cancer [J].Cancer Res, 1995, 55(1): 28-30.

[8]林武華，孫念緒，張青平.散發性結直腸癌微衛星不穩定性與hMSH3和hMSH6基因突變的研究[J].武警醫學，2001，12(7):392-395.

[9]Villunger A, Michalak EM, Coultas L, et al. p53- and druginduced apoptotic responses mediated by BH3-only proteins puma and noxa [J]. Science, 2003, 302(5647):1036-1038.