骨肉瘤中CD147、MMP-2的表達(dá)和意義

崔 陽(yáng)，崔麗嶸，張 濤，徐志濤，田 躍

(1.承德醫(yī)學(xué)院，河北承德 067000;2.安國(guó)市醫(yī)院;3.保定市第二醫(yī)院)

骨肉瘤是最常見的惡性成骨性腫瘤之一，好發(fā)于青少年，特點(diǎn)是容易早期肺轉(zhuǎn)移，5年生存率低，預(yù)后極差，嚴(yán)重影響青少年的身心健康。骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)長(zhǎng)期、多步驟、多因素參與的復(fù)雜過(guò)程，目前相關(guān)的分子機(jī)制尚不完全清楚。細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)劑(EMMPRIN/CD147)及基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)作為降解細(xì)胞外基質(zhì)的重要酶類，已成為近年來(lái)腫瘤領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。目前的研究表明，CD147、MMPs可高度表達(dá)于多種腫瘤，并可通過(guò)多種途徑誘導(dǎo)MMPs的釋放，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[1-2]。本研究采用免疫組織化學(xué)染色SP法檢測(cè)了CD147、MMP-2在骨肉瘤中的表達(dá)情況，并分析了二者與骨肉瘤臨床病理特征的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 2003年l月-2013年5月，承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院、保定市第二醫(yī)院、河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院手術(shù)切除的骨肉瘤標(biāo)本37例，骨軟骨瘤標(biāo)本10例，均經(jīng)病理檢查證實(shí)。37例骨肉瘤患者中，男20例、女17例，平均年齡22.5歲(3-58歲);臨床分期按Enneking外科分期法，組織分型參照Dahlin標(biāo)準(zhǔn);有肺轉(zhuǎn)移23例。

1.2 方法 所有標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，5μm連續(xù)切片。CD147、MMP-2兔抗人多克隆抗體購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)公司，工作濃度分別為1:100和1:50。采用SP免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)CD147和MMP-2的表達(dá)情況。以細(xì)胞膜或細(xì)胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng);用已知CD147或MMP-2陽(yáng)性的肺癌標(biāo)本做陽(yáng)性對(duì)照，PBS替代一抗作陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 免疫組化結(jié)果根據(jù)染色程度及陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)進(jìn)行評(píng)分。染色程度:基本不著色者為0分，著色淡者為1分，著色適中者為2分，著色深者為3分;陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù):每張切片于高倍鏡下(×400)隨機(jī)選取10個(gè)視野，計(jì)算每個(gè)視野陽(yáng)性細(xì)胞的百分比，取10個(gè)視野的平均值作為陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，≤5%為0分、6%-25%為1分、26%-50%為2分、≥51%為3分。以染色程度得分和陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)得分的乘積計(jì)算總分:0-1分為陰性(－)，2-3分為弱陽(yáng)性(+)，4-5分為中度陽(yáng)性(++)，≥6分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，樣本率的比較采用卡方檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Spearman檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 CD147、MMP-2在骨肉瘤和骨軟骨瘤中的表達(dá) CD147、MMP-2陽(yáng)性產(chǎn)物位于骨肉瘤細(xì)胞的胞膜和胞漿，為棕黃色顆粒樣，間質(zhì)及正常組織中無(wú)著色或少量著色。骨肉瘤中CD147、MMP-2的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于骨軟骨瘤，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見表1。

表1 CD147、MMP-2在骨肉瘤和骨軟骨瘤組織中的表達(dá)

2.2 CD147、MMP-2表達(dá)與骨肉瘤臨床病理特征的關(guān)系CD147、MMP-2在骨肉瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)與年齡、性別和Dahlin組織分型無(wú)關(guān)(P＞0.05)。CD147、MMP-2在骨肉瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)與Enneking分期和肺轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.01):隨骨肉瘤臨床分期的增加，CD147和MMP-2的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸升高;有肺轉(zhuǎn)移者CD147和MMP-2的陽(yáng)性表達(dá)明顯高于無(wú)肺轉(zhuǎn)移者。見表2。

表2 CD147、MMP-2表達(dá)與骨肉瘤臨床病理特征的關(guān)系

2.3 骨肉瘤中CD147與MMP-2表達(dá)的相關(guān)性 骨肉瘤中，CD147與MMP-2的表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.01)。見表3。

表3 骨肉瘤中CD147與MMP-2表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多因素參與、多步驟的復(fù)雜過(guò)程，包括原發(fā)腫瘤浸潤(rùn)、基底膜降解、腫瘤細(xì)胞進(jìn)出血管和腫瘤細(xì)胞對(duì)靶組織的侵襲等環(huán)節(jié)[3]。此過(guò)程中，細(xì)胞外基質(zhì)是腫瘤遷移的自然屏障，起著關(guān)鍵性作用。MMP-2是MMPs超家族成員之一，它能特異性降解基質(zhì)膜中的主要成分Ⅳ型膠原，使基底膜喪失完整性，還能通過(guò)毛細(xì)血管內(nèi)生、新生血管生成等促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和擴(kuò)散。CD147屬于免疫球蛋白超家族，不但能刺激腫瘤細(xì)胞及腫瘤間質(zhì)成纖維細(xì)胞產(chǎn)生MMPs，也可以通過(guò)影響血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子刺激腫瘤的血管生成，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。近年來(lái)，關(guān)于CD147與腫瘤關(guān)系的研究報(bào)道表明，在惡性黑色素瘤、結(jié)直腸癌、肝癌等腫瘤細(xì)胞中均發(fā)現(xiàn)有CD147表達(dá)的增高，且與腫瘤的惡性程度和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[4-6]。

本研究發(fā)現(xiàn)，骨軟骨瘤基本不表達(dá)CD147，骨肉瘤中CD147、MMP-2的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于骨軟骨瘤，并且隨著腫瘤臨床分期的增高，CD147和MMP-2的表達(dá)也升高且有肺轉(zhuǎn)移的骨肉瘤患者CD147、MMP-2的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)肺轉(zhuǎn)移的，說(shuō)明二者的表達(dá)與骨肉瘤的轉(zhuǎn)移和惡性程度有關(guān)。Wu等[7]報(bào)道，膽囊癌中CD147和MMP-的表達(dá)明顯高于慢性膽囊炎性病變，且CD147與MMP-同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)預(yù)后最差，可見二者在膽囊癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，聯(lián)合檢測(cè)可以提示腫瘤預(yù)后。本研究還發(fā)現(xiàn)骨肉瘤中CD147和MMP-2的表達(dá)呈正相關(guān)，與Zhong等[8在前列腺癌中的研究相符，提示二者在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有協(xié)同作用。因此推測(cè)，CD147和MMP-2同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)是多種惡性腫瘤預(yù)后差的重要標(biāo)志。

綜上所述，CD147和MMP-2與骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展以及侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，二者聯(lián)合檢測(cè)有助于骨肉瘤的早期診斷及預(yù)后評(píng)估。

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