高效液相色譜法測定加味定喘片中鹽酸麻黃堿含量

李文烈，姬雪禮，曹海芳，魏 剛

(石家莊以嶺藥業股份有限公司，河北 石家莊 050035)

加味定喘片是由麻黃、白果、黃芩等藥物組方的中藥復方制劑，具有宣肺降氣、清熱化痰之功效，臨床治療哮喘具有確切的療效。麻黃為方中君藥，為有效控制其質量，采用高效液相色譜法測定了麻黃中鹽酸麻黃堿的含量，結果較滿意，現報道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(Agilent 1100系列)。鹽酸麻黃堿對照品(批號為171241－200506，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所);加味定喘片(自制);乙腈為色譜純，水為雙蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Phenomenon Gemini C18柱(150 mm × 4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈－0.1%磷酸(10∶90);檢測波長:207 nm，流速:1.0 mL/min。理論板數按鹽酸麻黃堿峰計算不得低于3 000。

2.2 溶液制備

取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細，取1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質量，超聲處理30 min，放冷，稱重，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，精密量取續濾液20 mL，置蒸發皿中，水浴上揮干，殘渣用0.1 mol/L的鹽酸溶液15 mL溶解，轉移至分液漏斗中，加入6 mol/L氫氧化鈉溶液 1 mL，搖勻，用乙醚萃取 6 次(15，15，15，10，10，10 mL)，合并乙醚層，加鹽酸－甲醇(1∶100)1 mL，水浴上揮干，殘渣用流動相溶解，轉移至10 mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。精密稱取鹽酸麻黃堿對照品15 mg，置25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取2 mL，置25 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.3 方法學考察

空白干擾試驗:按加味定喘片的制備方法制成不含麻黃的模擬制劑，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液，按含量測定方法進行測定。結果表明，方中其他組分對測定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:取鹽酸麻黃堿對照品溶液(0.615 2 g/L)，加入甲醇，依次稀釋成質量濃度分別為 12.304，24.608，49.216，73.824，123.040 μg/mL 的系列對照品溶液，分別精密吸取 10 μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標、質量濃度為橫坐標繪制標準曲線，回歸方程為 Y=11.040 X+15.114，r=0.999 98(n=5)。結果表明，鹽酸麻黃堿質量濃度在12.304～123.040 μg/mL范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液及同一供試品溶液，注入液相色譜儀，按上述分離條件進行分析，連續進針6次，測定峰面積。結果對照品峰面積的 RSD為0.25%，供試品峰面積的 RSD為0.20%，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:精密吸取對照品溶液及同一供試品溶液，每隔一定時間進樣，測定峰面積。結果在測定的24 h內，對照品的峰面積的 RSD為0.20%，供試品的峰面積 RSD為0.14%，表明溶液在24 h內基本穩定。

重現性試驗:取同一批樣品，分別取高、中、低3個樣品量，每個樣品量3份，按供試品溶液的制備方法，分別進行提取、制備、測定。結果鹽酸麻黃堿的 RSD為0.76%，表明方法重現性良好。

加樣回收試驗:取同一批樣品9份，分別加入低、中、高3個質量濃度的鹽酸麻黃堿對照品溶液50 mL，按供試品溶液的制備方法，進行提取、制備、測定，計算回收率。結果見表1。

表1 鹽酸麻黃堿加樣回收試驗結果(n=9)

耐用性試驗:對流動相比例變化、不同品牌的色譜柱、柱溫變化、不同流速、不同檢測波長對鹽酸麻黃堿含量的影響進行了考察。結果流動相比例發生小的變化(乙腈－0.1%磷酸分別為8∶92，10 ∶90，12 ∶88)，測定的同一份樣品含量變化的 RSD 為0.79%;更換不同品牌的色譜柱[Waters Symmetry C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，Agilent XDB C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)，Phenomenon Gemini C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)]測定同一份樣品，含量的 RSD 為 0.28%;柱溫發生變化(15，25，35 ℃)，測定同一份樣品含量的 RSD為 0.67%;不同流速(0.8，1.0，1.2mL/min)測定同一份樣品含量的 RSD為0.54%;不同檢測波長(204，207，210 nm)測定同一份樣品含量的 RSD為0.52%。

2.4 樣品含量測定

按擬訂的色譜條件，對3批中試樣品及中試藥材進行了含量測定，并計算了轉移率，分別為 39.70% ，41.35% ，40.27% ，平均轉移率為40.44%，說明該制劑的工藝基本穩定。

3 討論

本品為十幾味藥材組成的中藥復方制劑，麻黃為方中君藥。麻黃中主要含生物堿類成分，其中鹽酸麻黃堿是其止咳平喘的有效成分[1]。根據鹽酸麻黃堿的性質，采用甲醇超聲提取樣品，又利用生物堿易溶于酸水，堿化游離生物堿易溶于乙醚等低極性有機溶劑的特性，對供試品進行了純化，結果有效消除了其他成分的干擾，在所采用的色譜條件下，鹽酸麻黃堿色譜峰與相鄰色譜峰達到了基線分離，能夠滿足定量分析的要求。

采用紫外分光光度法，在200～400 nm波長范圍內進行光譜掃描，檢測鹽酸麻黃堿的光譜圖，在207 nm波長處有最大吸收，故選擇207 nm作為檢測波長，以提高檢測的靈敏度。對萃取溶劑進行了考察，結果乙醚和三氯甲烷萃取的含量接近，說明二者對鹽酸麻黃堿的萃取能力相似。從安全和環保角度考慮，選擇乙醚為萃取溶劑。對萃取次數進行了考察，結果第6次和第7次萃取液中均未檢出鹽酸麻黃堿吸收峰，說明萃取5次能夠萃取完全。考慮到不同操作者之間可能存在的差異，為保證萃取完全，將萃取次數定為6次。此外，還對提取溶劑的種類及用量，提取方式及提取時間進行了考察，采用文中所用方法，節能環保，效果較好。

[1]丁麗麗，施松善，崔 健，等.麻黃化學成分與藥理作用研究進展[J].中國中藥雜志，2006，31(20):1 661 －1 664.