自擬康腎口服液對大鼠慶大霉素急性腎損傷模型的影響

趙京生，易偉國

康腎口服液由人參、生黃芪、白術、茯苓、淫羊藿、懷山藥、地龍、紅花、金櫻子、芡實、甘草等組成，具有益氣溫陽，固本澀精，活血通絡之功，用于慢性腎炎、腎病綜合征、陽痿早泄等治療。為探究療效原理筆者對慶大霉素誘發大鼠急性腎損傷模型的影響進行了實驗研究。室提供，批號20110425；尿毒清顆粒，山康辰藥業（內蒙古）有限責任公司生產，批號20110114；呋塞咪片，天津力生制藥股份有限公司生產，批號1101008；氯化鈉注射液，河南太龍藥業股份有限公司生產，批號11082465；硫酸慶大霉素注射液，河南輔仁懷慶堂制藥有限公司生產，批號1108301；甲醛溶液（分析純），煙臺市雙雙化工有限公司生產，批號20110310；冰乙酸（分析純），天津市恒興化學試劑制造有限公司生產，批號20110113；肌酐（Cr）試

1 實驗材料

1.1 藥品 康腎口服液由解放軍第371醫院制劑劑盒，南京建成生物工程研究所生產，批號20111223；尿素氮（BUN）試劑盒（脲酶法），南京建成生物工程研究所生產，批號20111223；尿蛋白定量試劑盒，南京建成生物工程研究所生產，批號20120109；尿 N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(NAG)（ELISA）試劑盒，南京建成生物工程研究所生產，批號20111201B；考馬斯亮蘭試劑盒，南京建成生物工程研究所生產，批號20111227；SOD試劑盒，南京建成生物工程研究所生產，批號20120105；丙二醛（MDA）試劑盒，南京建成生物工程研究所生產，批號20111227。

1.2 實驗動物 大鼠，清潔級，Wistar，河北省動物實驗中心提供，合格證號1112128。

1.3 儀器 UV－2000紫外可見分光光度計，尤尼柯 （上海）儀器有限公司；酶標儀，680Microplate Reader，Bio-Rad Laboratories；TGL-16G 臺 式 離 心機，上海安亭科學儀器廠；DY89-1型電動玻璃勻漿機，寧波新芝生物科技有限公司；可調式移液器，上海雷勃分析儀器有限公司。

1.4 實驗方法 取清潔級雄性Wistar大鼠84只，隨機均勻分為7組，12只/組；其中1組為空白對照組，其余6組造慶大霉素急性腎損傷模型。造模型6組大鼠分別于每天上午腹腔注射硫酸慶大霉素注射液140 mg/kg造模（1 ml/100 g），下午分別灌服大、中、小劑量康腎口服液（20 ml原藥液/kg、10 ml原藥液/kg、5 ml原藥液/kg，原藥液、生理鹽水稀釋1倍、生理鹽水稀釋2倍，2 ml/100 g）、尿毒清顆粒混懸液（4.2 g/kg，用生理鹽水配成 0.21 g/ml，2 ml/100 g）、呋塞咪片混懸液（6.6 mg/kg，用生理鹽水配成0.33 mg/ml，2 ml/100 g）和同體積的生理鹽水（2 ml/100 g）；空白對照組腹腔注射等體積生理鹽水和灌服同體積生理鹽水。每天上午造模型、下午灌服相應藥物，連續用藥7 d。于第7天造模后灌服相應藥物，于給藥后1 h將大鼠放入代謝籠中收取24 h尿液，按試劑盒說明書測尿肌酐、尿N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（NAG）；第8天大鼠眶靜脈采血，分別測血肌酐、尿素氮；然后處死大鼠，迅速開腹取兩側全腎，用濾紙吸干腎表面血液后稱重；取右腎臟制成10%的勻漿，按試劑盒說明書測SOD、MDA水平；左腎用10%甲醛固定，切片，鏡檢。

1.5 測定項目 腎系數的測定：將大鼠處死后，迅速開腹取兩側全腎，用濾紙吸干腎表面血液后稱重，腎系數=兩側腎質重和（g）/體質重（kg）×100%。

血、尿標本測定：血肌酐（除蛋白法）、尿素氮及尿肌酐（除蛋白法）由紫外分光光度計完成，尿N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(NAG)由酶標儀完成。嚴格按說明書操作。

腎皮質勻漿測定：超氧化物歧化酶（SOD）（羥胺法），丙二醛（MDA）（TBA法）。采用南京建成生物工程研究所試劑盒。嚴格按說明書操作。

腎組織形態學檢測：腎組織標本用10%甲醛固定，石蠟包埋，切成3 μm厚的切片，分別做HE染色，以做光學顯微鏡檢查。

計算公式：

蛋白含量（g/L）=測定管OD值-空白管OD值標準管OD值-空白管OD值×標準管濃度（g/L）

表 1 各組大鼠腎指數及尿蛋白總量（±s）

表 1 各組大鼠腎指數及尿蛋白總量（±s）

注：與模型組比，#P<0.01

組別 n 劑量（ml原藥液/kg） 腎指數（g/100 g） 尿蛋白總量（mg/L）空白對照組 12 0.799±0.040# 616.3±144.0#模型組 11 1.200±0.030 1702.8±140.3呋塞米片組 11 6.6 mg 1.100±0.098# 1373.6±241.1#尿毒清顆粒組 12 4.2 g 1.030±0.081# 1373.0±188.9#大劑量腎康口服液組 12 20 1.079±0.089# 1533.0±175.8#中劑量腎康口服液組 12 10 1.028±0.085# 1589.4±129.6#小劑量腎康口服液組 12 5 1.029±0.068# 1513.6±175.1#

2 結果

從表1可看出，與空白對照組比，模型組腎指數及尿蛋白總量均顯著增加（P<0.01），說明造慶大霉素大鼠腎病模型成功。與模型組比，大、中、小劑量康腎口服液組、呋塞咪片組和尿毒清顆粒組均可顯著降低腎指數（P<0.01），均可顯著降低尿蛋白總量（P<0.01）；以中、小劑量康腎口服液組對腎指數的降低作用為好，以小劑量康腎口服液組對尿蛋白總量的降低作用為好。

從表2可看出，與空白對照組比，模型組血肌酐、尿素氮均顯著增高（P<0.01），尿肌酐顯著減少（P<0.01），說明造慶大霉素性大鼠腎病模型成功。與模型組比，大、中、小劑量腎康口服液組和尿毒清顆粒組均可顯著降低血肌酐（P<0.01）；小劑量康腎口服液組和尿毒清顆粒組可顯著降低尿肌酐 （P<0.01），中劑量康腎口服液組可明顯降低尿肌酐（P<0.05）；各給藥組均有降低尿肌酐的趨勢（P<0.05）；以中、小劑量康腎口服液組對血肌酐、尿素氮的降低作用為好。

從表3可看出，與空白對照組比，模型組血NAG 和MDA水平均顯著升高（P<0.01），血SOD活力顯著降低（P<0.01），說明造慶大霉素性大鼠腎病模型成功。與模型組比，大、中劑量康腎口服液組和尿毒清顆粒組均可顯著降低血NAG水平（P<0.01），小劑量康腎口服液組和呋塞咪片組可明顯低血NAG水平（P<0.05）；中、小劑量康腎口服液組和尿毒清顆粒組均可顯著降低血MDA水平 （P<0.01），大劑量康腎口服液組和和呋塞咪片組可明顯降低血MDA水平（P<0.05）；大劑量康腎口服液組和尿毒清顆粒組可顯著降升高血SOD活力 （P<0.01），中、小劑量康腎口服液組可明顯升高血SOD活力（P<0.05）；以大、中劑量康腎口服液組對慶大霉素性大鼠腎病模型血NAG和MDA水平的降低作用、對血SOD活力升高作用為好。

表 2 各組大鼠血肌酐、尿素氮和尿肌酐水平（±s）

表 2 各組大鼠血肌酐、尿素氮和尿肌酐水平（±s）

注：與模型組比，*P<0.05，#P<0.01

組別 動物數（只） 劑量（ml原藥液/kg） 血肌酐（μmol/L） 尿素氮（mmol/L） 尿肌酐（μmol/L）空白對照組 12 24.411±5.678# 9.463±2.324# 4391.9±1315.6#模型組 11 79.383±16.854 32.20±6.822 2566.0±1686.9呋塞咪片組 11 6.6 mg 68.238±18.134 28.515±7.953 2837.9±1115.3尿毒清顆粒組 12 4.2 g 57.533±11.994# 24.235±4.208# 3232.8±1085.3大劑量腎康口服液組 12 20 59.684±13.816# 24.663±10.488 3409.8±1471.4中劑量腎康口服液組 12 10 53.016±9.612# 24.417±6.951* 3285.2±1311.8小劑量腎康口服液組 12 5 55.382±13.140# 21.339±4.092# 3374.9±1006.2

表 3 各組大鼠血NAG、MDA水平和SOD活力（±s）

表 3 各組大鼠血NAG、MDA水平和SOD活力（±s）

注：與模型組比，*P<0.05，#P<0.01

組別 動物數（只） 劑量（ml原藥液/kg） NAG（u/L） MDA（nmol/mg） SOD（u/mg）空白對照組 12 3.626±0.720# 0.785±0.116# 239.0±63.1#模型組 11 7.257±0.886 1.384±0.392 162.8±19.0呋塞咪片組 11 6.6 mg 6.134±1.452* 0.963±0.356* 186.9±38.9尿毒清顆粒組 12 4.2 g 4.167±0.846# 0.814±0.199# 209.1±43.3#大劑量康腎口服液組 12 20 5.881±0.698# 0.972±0.387* 195.8±25.9#中劑量康腎口服液組 12 10 5.811±1.084# 0.810±0.178# 191.0±32.9*小劑量康腎口服液組 12 5 6.015±1.374* 0.901±0.298# 188.6±34.6*

3 討論

本實驗造慶大霉素大鼠急性腎損傷模型成功。與模型組比康腎口服液組、呋塞咪片組和尿毒清顆粒組均可顯著降低腎指數（P<0.01），顯著降低尿蛋白總量（P<0.01）；康腎口服液組和尿毒清顆粒組均可顯著降低血肌酐（P<0.01）以中、小劑量康腎口服液組對血肌酐、尿素氮的降低作用為好。大、中劑量康腎口服液組和尿毒清顆粒組均可顯著降低血NAG水平（P<0.01），小劑量康腎口服液組和呋塞咪片組可明顯低血NAG水平（P<0.05）；中、小劑量康腎口服液組和尿毒清顆粒組均可顯著降低血MDA水平（P<0.01），大劑量康腎口服液組和和呋塞咪片組可明顯降低血MDA水平（P<0.05）；大劑量康腎口服液組和尿毒清顆粒組可顯著降升高血SOD活力（P<0.01），中、小劑量康腎口服液組可明顯升高血SOD活力（P<0.05）；以大、中劑量康腎口服液組對慶大霉素性大鼠腎病模型血NAG和MDA水平的降低作用、對血SOD活力升高作用為好。

本實驗提示：康腎口服液對慢性腎炎、腎病綜合征有較好的治療作用，且優于尿毒清顆粒和呋塞咪片。

志謝 本實驗在河南中醫學院苗明三教授指導下完成，特此致謝

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