腎活檢標本的制備

孫 璟，武芳芳，郎冬梅

腎活檢病理不同于常規病理，除了光學顯微鏡外，還需要借助免疫病理和電鏡的觀察，才能作出病理診斷。在腎穿刺活檢標本制片過程中，組織的前期處理對標本制作的效果起著關鍵性作用[1]。根據筆者所在科近年來50例腎活檢標本制備體會進行分析，現將在長期實踐中摸索出來的一套較好的制備方法介紹如下。

1 標本取材前準備

腎活檢標本要進行3種病理檢查，因此取出腎標本后就立即分為3部分送檢。各種標本固定液均應在穿刺前按不同檢視方法置于干凈的小瓶內待用。①光鏡：清潔的5 ml小瓶，裝滿FAA混合固定液（配方為10%甲醛10 ml、冰醋酸5 ml和90%乙醇溶液85 ml）蓋緊常溫保存；②免疫熒光：清潔的5 ml小瓶，瓶中放入浸濕生理鹽水的紗布，冰桶內保存備用；③電鏡：清潔的1 ml的離心管，加滿2%的戊二醛蓋緊置冰桶內保存備用[2]。

2 標本的判斷與分割

腎穿刺一般應用穿刺針在B超定位下進行。一次可獲取1.0～1.5 cm腎組織。肉眼觀腎組織髓質顏色暗紅，皮質稍淺；在放大鏡下，皮質部分可見到腎小球呈小紅點結構，放入固定液中，可沉于瓶底。另外，在取材時應注意標本的鑒別，如肌肉組織的顏色與腎組織的顏色相似，相對密度也和腎組織差不多，但其看不到腎皮質小紅點。脂肪組織呈黃白色，相對密度小，漂浮于固定液表面。結締組織呈灰白色，較腎組織質地柔韌，不易切割。如發現無腎小球或不是腎組織，則應重新穿刺取材。

常規在確定為腎組織標本后，應立即分割進行光鏡、免疫熒光或電鏡檢查。操作中需注意標本未固定時，攝取標本動作一定要輕，切勿擠壓，避免人為破壞腎組織結構，應在短時間分切標本，不宜過長時間將標本暴露在空氣中或強光下，以保持標本的濕潤性，否則標本將會縮小、干枯。方法如下：將腎穿刺標本輕輕放在軟木板上，分清皮質端和髓質端，用鋒利的小刀進行切割，自皮質端切下1～2 mm（分配1～2個腎小球）供電鏡檢查用，依次再切下3～4 mm（分配1～5個腎小球）供免疫熒光檢查用，其余大部分（分配不少于10個腎小球）供光鏡檢查，如取材標本較少，應先滿足染色光鏡標本，其次為免疫病理標本。筆者所在科一般制作冰凍切片7～8 張，厚度為 3～4 μm，做 IgG、IgA、IgM、C3、Clq、C4 等抗體檢查，石蠟包埋切片 2～3 μm， 分別做常規 HE染色，PAS，Masson、PASM以及剛果紅和甲基紫等特殊染色。

標本分割后應立即放于事先準備好的容器內，做免疫熒光的標本，放在經生理鹽水浸溫的紗布上，連同紗布置于干凈容器內，及時經OTC包埋劑包埋切片。光鏡標本即放進FAA混合固定液內，電鏡標本立即放入2.5%戊二醛內于4℃冰箱內固定。標本裝瓶后應及時加蓋，并在瓶上寫清患者姓名、科室及床號。若未能及時送檢標本應置于冰箱中保存待檢。

3 標本的具體制備方法

3.1 免疫熒光的制片 方法是腎臟病理學中最重要的方法，最好用冷凍切片機，冷凍切片的腎組織新鮮，抗原保存良好，若暫時不能切片，應將標本放在-70℃低溫冰箱內保存。將標本置于冷凍切片機的冷凍頭上，加少許OTC包埋劑，于冷室內-20℃切片，厚度要求3～4 mm附貼于載玻片上需要10片以上備用。光鏡觀察切片有無腎小球（不染色），如有腎小球，則視需要選擇相應抗體的種類，切出相應數量的片子，剩余腎組織放入冰箱備用。

3.2 石蠟包埋制備方法 組織的固定：腎組織在固定液內于室溫下固定45 min。脫水、透明、浸蠟、包埋：①梯度酒精脫水，以70%-80%-90%-無水乙醇，每梯 2缸，每缸 20 min，二甲苯透明，分2缸，每缸10 min；②浸蠟包埋：優質石蠟（58～62℃）2缸，每缸30 min后包埋。切片：修理蠟塊，置于冰箱預冷40 min，在切片機上切出2～3 μm的切片。在實踐中發現石蠟切片時需要注意室溫不能過高，應保持在25～28℃之間，否則蠟塊易溶，不易制片。

3.3 電鏡標本制備方法 ①取材：標本要求含有腎小球；②固定：標本立即放入2.5%戊二醛內于4℃冰箱內固定4 h后入0.05 mol/L磷酸緩沖液沖洗3 h，再入1%鋨酸于室溫下固定1 h；③脫水包埋：依次用50%-65%-75%-85%-95%-無水乙醇脫水，30 min/次；氧化丙烯酸浸透 3 次，15～30 min/次；浸透：浸透1 h；固化，使之聚合變硬，呈淡黃色透明塊狀；④超薄切片：將包埋塊修整，用切片機制成超薄片[2]。許多類型的腎小球疾病診斷必須以電鏡下觀察其超微結構或免疫電鏡結果，才能得出正確診斷。

圖1 光鏡標本

圖2 冰凍標本

4 結果

筆者所在科所處理的98%左右的腎穿刺標本都能確保光鏡（圖 1）、冰凍（圖 2）、電鏡（圖 3）標本都有腎小球。 按上述程序操作的特殊染色對比鮮艷，效果好，完全可以滿足病理診斷。

圖3 電鏡標本

5 體會

結合50例腎穿刺活檢病理標本制備情況，現總結體會如下：首先要進行腎活檢標本的判斷和辨認，因腎穿組織較普通病理體積較小，組織塊一定要包好。其次組織在標本分割時要注意動作要輕柔，切片刀要鋒利，切片要平整。再次，標本根據需要選擇固定液進行固定。在此需要注意的是固定液應為標本體積的10倍。標本裝瓶后應及時加蓋。最后，進行切片。在標本制片過程中，組織的前期處理對組織制片的效果起到關鍵作用。所以，在腎穿刺活檢組織標本制片中一定要掌握時間，才能保證做出良好的腎臟病理切片，更好的為臨床醫師診斷提供幫助。

[1]鄒萬忠.腎活檢病理診斷標準指導意見[J].中華腎臟病雜志，2001，17（3）：270-275.

[2]王伯沄，李玉松，黃高昇，等.病理學技術[M].北京：人民衛生出版社，2001.948-952.

[3]龔志錦.病理組織制作和染色技術[M].上海：上海科學技術出版社，1994.359.