中晚期肺腺癌化療前后患者外周血T淋巴細胞亞群水平變化

王曙光，王慶華，呂坤聚，楊銀榮

近年的流行病調查數據顯示，肺癌是我國人群中發病率和病死率上升最快的癌癥[1]。衛生部最新公布的死因調查結果中，肺癌居我國癌癥死因首位，占全部癌癥死因的22.7%，與20世紀70年代相比，我國癌癥病死率上升4.65倍。培美曲塞（pemetrexed，PEM）是一種新型的多靶點抗葉酸制劑，和順鉑聯合應用已經成為標準的非小細胞肺癌一線化療方案[2]。研究發現多種癌癥患者外周血T淋巴細胞存在數量變化，并且與多數腫瘤的進展和預后有關[3]。本研究通過流式細胞技術對2009—2011年收治46例確診中晚期肺腺癌化療前后外周血各亞類T淋巴細胞：CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比例。結合臨床特征，探討T淋巴細胞亞群及化療效果的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 46例均為 2009￣01—2011￣12筆者所在醫院住院患者。均經病理診斷證實為肺腺癌。所有患者均符合以下標準：根據NCCN（第7版）分期標準判定為Ⅲb期或Ⅳ期；ECOG評分≤2分；治療前檢查血象、肝腎功能基本正常，無嚴重心臟病和其他合并癥；明確治療前未接受過全身化療、放療、手術或免疫治療；預計生存期>3個月。46例患者中男24例，女22例；年齡35～70歲，中位年齡52歲。ECOG評分0～1分42例，2分4例。吸煙者10例，不吸煙者36例。Ⅲ期患者36例，Ⅳ期患者10例。對照組：健康志愿者38人，男21人，女17人；年齡18～58歲，平均36.7歲。

1.2 化療方法 用藥前1周開始給予口服葉酸400 μg/d，貫穿整個療程。用藥前1周給予維生素B121000 μg肌肉注射1次；以后肌肉注射1次/9周。用藥前1 d，當天，后1 d給予地塞米松4 mg口服，2次/d。PEM 500 mg/m2，靜脈滴注，第1天；順鉑75 mg/m2，靜脈滴注，第1天；21 d為1個周期。

1.3 淋巴細胞亞群檢測

1.3.1 儀器和試劑 BD FACSCalibur流式細胞儀、溶血素、流式上樣管和T淋巴細胞亞群三色抗體 （CD3-PerCP/CD4-FITC/CD8-PE）均購自BD公司。所有試劑4～8℃貯藏，有效期內使用，用前室溫平衡30 min。

1.3.2 標本采集 對照組每人抽血2 ml/次；治療組化療第1療程前1 d及第2療程化療的第4周末各抽血2 ml，EDTANa抗凝，標本立即送檢。

1.3.3 流式細胞檢測 向3組已編好號的上樣管中分別加入20 μl T淋巴細胞亞群三色抗體；再分別向試管中加入混勻的 50 μl抗凝血；混勻，避光，室溫孵育 15～20 min；溶血劑1 ml加入試管，避光10 min；上機測樣。根據前向光散射和側向光散射收集的細胞分布圖，自動圈定淋巴細胞群，并對其表型進行檢測、分析。

2 結果

與對照組比較，化療前肺腺癌組 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+明顯低下（P<0.01）；化療前肺腺癌組 CD8+明顯增高（P<0.01）。與化療前組比較，化療后肺腺癌組CD4+、CD4+/CD8+明顯增高（P<0.01）；化療后肺腺癌組CD8+略微降低，但無統計學差異。與對照組比較，化療后肺腺癌組CD4+、CD4+/CD8+明顯低下（P<0.01）；化療后肺腺癌組CD8+明顯增高（P<0.01）。見表1。

表 1 對照組與肺腺癌組患者化療前后淋巴細胞亞群（±s）

表 1 對照組與肺腺癌組患者化療前后淋巴細胞亞群（±s）

注：與對照組比較，*P<0.01；與化療前比較，#P<0.01

項目 對照組 肺腺癌組化療前 化療后CD4+ 42.21±2.32 28.25±3.33* 31.36±2.67#CD8+ 24.42±1.20 29.22±2.34* 28.13±1.39*CD4+/CD8+ 1.55±2.18 0.98±1.22* 1.12±1.22#

3 討論

培美曲塞是一種新的多靶點抗葉酸化療藥物，主要通過干擾細胞復制過程中葉酸代謝途徑而發揮抗腫瘤作用。培美曲塞通過對關鍵酶活性進行多靶點抑制，減少嘌呤和胸腺嘧啶核苷的生物合成，從而影響腫瘤細胞和RNA的合成[4]。培美曲塞聯合順鉑對非磷非小細胞肺癌有很好療效。

機體免疫功能低下，或者腫瘤細胞變異產生的免疫逃逸，是腫瘤產生和發展的必要條件。而腫瘤的發展又會抑制機體的免疫功能，因此機體免疫功能狀態對腫瘤的發展和預后具有重要的作用[5]。

最近研究證明，T淋巴細胞在抗腫瘤免疫中具有極其重要的作用。CD3+T細胞數量上代表機體的總T細胞數量，CD4+T細胞為輔助T細胞，輔助機體完成腫瘤免疫。CD8+T細胞為殺傷性T細胞具有特異性殺傷活性。CD4+/CD8+比值保持動態平衡，可維持機體細胞免疫功能穩定，其比值降低表明細胞免疫功能降低[6]。

本組肺腺癌患者CD4+T細胞顯著減少，CD8+T細胞明顯增加，CD4+/CD8+顯著下降，且都具有統計學差異。表明腫瘤患者較正常人免疫功能下降，與文獻報道的一致[7]。

化療后較化療前比較，CD4+/CD8+明顯提高，說明患者化療后免疫力有所恢復，但并未恢復至正常水平，免疫力恢復主要是CD4+T細胞增加，CD8+T細胞有所減少。

[1]全國腫瘤防治研究辦公室.中國惡性腫瘤死亡調查研究（1990-1992）[M].北京：人民衛生出版社，2008.82-101.

[2]Adjei AA.Pemetrexed(ALIMTA)，a novel multitargeted antineoplastic agent[J].Clin Cancer Res，2004，10(12Pt2):4276-80s.

[3]Chow Y，Miyamoto，Kato K，et al.CD4+and CD8+T cells cooperate to improve prognosis of patients with ceophageal squamous cell carcinoma[J].Cancer Res，2003，63(7):1555-1559.

[4]Chattopahyay S，Moran RG，Goklman ID.Pemetrexed:brochemical and cellular pharmacology，mechanisms，and clinical applications[J].Mol Cancer，2007，6（4）:404-417.

[5]Kuss I，Hathway B，Ferriskl，et al.Decreased absolute counts of T lymphocyte subseds and their relation to disease in squamous cell carcinoma of the head and neck[J].Clin Cancer Res，2004，10(11):3755-3762.

[6]湯釗猷.現代腫瘤學[M].上海：上海醫科大學出版社，1993.121-139.

[7]金從國，王熙才，伍治平，等.癌癥患者外周血T細胞亞群水平及臨床意義[J].腫瘤研究與臨床，2003，15(1):33-34.