山茶籽對去卵巢大鼠子宮和相關(guān)激素水平的影響

李 海 陳建海 王金花 黃海玲 黎 飚 (右江民族醫(yī)學院組織胚胎學教研室，廣西 百色 533000)

衰老致性腺分泌性激素減少是導致老年性疾病重要原因之一。雌激素在中老年婦女疾病防治和保健方面廣泛應用，甚至濫用，其副作用和并發(fā)癥日益顯現(xiàn)，人們希望用安全有效的植物性雌激素來替代雌激素。山茶籽榨油后的茶麩富含植物性雌激素〔1～3〕，本文觀察其對大鼠卵巢、子宮和相關(guān)激素影響。

1 材料與方法

1.1 材料及設(shè)備 選用80只6月齡健康雌性大鼠(廣西醫(yī)科大學實驗動物中心提供，合格證號SCXK桂2009-0102)，山茶籽醇提取物為廣西巴馬縣山茶籽榨油后的茶麩用石油醚脫脂三次，再用95%乙醇回流提取剩余物三次合并濃縮至濃度為8.6 g生藥/g，滅菌后2～5℃密封冰箱保存，用藥時用蒸餾水稀釋成5 g生藥/g。北京瑞利分析儀器公司的WFX-IE2型原子吸收分光光度計，上海分析儀器廠生產(chǎn)半自動生化儀器測定;德國Reichert-Jung公司的820-Ⅱ輪式組織切片機;廈門麥克奧迪公司生產(chǎn)的攝像光學顯微鏡。

1.2 方法

1.2.1 動物編號和分組 按體重編號，手術(shù)前將80只大鼠隨機分成4組(n=20)。(1)假手術(shù)(sham)組;(2)去卵巢模型組(OVX);(3)山茶籽+去卵巢(Ts+OVX)組;(4)山茶籽+假手術(shù)(Ts+sham)組。各組大鼠在二級動物室給予分籠飼養(yǎng)，標準飼料，溫度(25±1)℃，自由飲水，飼養(yǎng)環(huán)境條件相同。

1.2.2 去卵巢動物模型(OVX)的建立 隨機取兩組大白鼠用10 g/L戊巴比妥鈉溶液腹腔麻醉(3.0 mg/kg)，無菌條件下經(jīng)腹部單切口進入腹腔，切除雙側(cè)卵巢，切口分層縫合。切下的卵巢經(jīng)組織學鑒定確認。術(shù)后用硫酸慶大霉素注射3 d，防止傷口感染，1 w后用藥組開始用藥。sham組手術(shù)方法與去卵巢動物模型組的手術(shù)方法相同，只切除卵巢旁的一小塊脂肪墊，不切除卵巢。術(shù)后用硫酸慶大霉素注射3 d，防止傷口感染，1 w后用藥組開始用藥。

1.2.3 2個治療組用藥 ①Ts+OVX組，山茶籽醇提物水溶液灌胃，10 ml·kg－1·d－1(5 g 生藥/g);②Ts+sham 組，山茶籽醇提物溶液灌胃，10 ml·kg－1·d－1(5 g生藥/g)。兩組均連續(xù)用藥12 w。

1.2.4 觀察的指標 ①光鏡下子宮組織形態(tài)結(jié)構(gòu);②體重、子宮濕重、子宮系數(shù);③血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、促卵泡激素(FSH)和黃體生成素(LH)含量。

1.2.5 觀察時間和方法 在實驗第12周每只大鼠稱重后，用10 g/L戊巴比妥鈉溶液腹腔麻醉(3.0 mg/kg)取左心血5 ml，再處死取子宮(包括子宮頸和雙側(cè)子宮)。細心分離清除子宮周圍的組織后精確稱重，再計算子宮系數(shù)。稱重后，新鮮的子宮甲醛固定，截取Y型子宮交叉處上方段約1 cm的子宮，常規(guī)脫水、浸蠟、包埋，切片和HE染色，顯微鏡下觀察各組大鼠子宮壁三層組織結(jié)構(gòu)的變化。血液通過1-15PK離心機4 000 r/min，離心10 min分離血清，保存于-20℃冰箱待測。血清E2、P、FSH和LH含量均用放免測試盒測定。

2 結(jié)果

2.1 光鏡下子宮組織形態(tài)結(jié)構(gòu) sham組子宮大小正常，組織切片光鏡下子宮內(nèi)膜、肌層和外膜的三層結(jié)構(gòu)清楚，內(nèi)膜較厚。子宮腺發(fā)達豐富，腺體長而彎曲，腺腔較大。子宮基質(zhì)細胞豐富。OVX組的子宮明顯萎縮變小，組織切片光鏡下子宮內(nèi)膜、肌層和外膜的三層均變薄，內(nèi)膜最為明顯。子宮腺很少，腺體短而直，腺腔較小，子宮基質(zhì)細胞分布稀疏。與OVX比較，Ts+OVX組切片光鏡下子宮內(nèi)膜、肌層和外膜的三層均變厚。子宮腺變多，腺體增長，腺腔增大。與sham組比較，Ts+sham組子宮光鏡下切片組織形態(tài)結(jié)構(gòu)沒有明顯的改變。見圖1。

圖1 各組子宮橫切面組織形態(tài)結(jié)構(gòu)(HE，×40)

2.2 各實驗組的體重、子宮濕重、子宮系數(shù)測量結(jié)果 與sham組比較，OVX組子宮重量明顯減輕(P＜0.01)，子宮系數(shù)顯著變小(P＜0.01);與OVX組比較，Ts+OVX組的子宮增重明顯(P＜0.01)，子宮系數(shù)明顯變大(P＜0.01);與sham組比較，Ts+sham組的子宮重量、子宮系數(shù)變化沒有顯著性(P＞0.05)。見表1。

表1 各組大鼠體重、子宮濕重、子宮系數(shù)比較(±s，n=20)

表1 各組大鼠體重、子宮濕重、子宮系數(shù)比較(±s，n=20)

與sham組比較:1)P﹤0.01;與OVX組比較:2)P﹤0.01;下表同

組別 體重(g) 子宮濕重(g) 子宮系數(shù)(%)360.04±15.14 0.714±0.125 0.208±0.023 OVX組 371.15±14.38 0.128±0.0451) 0.035±0.0141)Ts+OVX組 349.45±21.74 0.571±0.1022) 0.163±0.0212)Ts+sham組sham組368.30±17.34 0.684±0.148 0.186±0.019

2.3 各實驗組大鼠血清相關(guān)激素測量結(jié)果 與sham組比較，OVX組的血清E2和P含量明顯減少(P﹤0.01)，而血清FSH和LH含量明顯升高(P﹤0.01);與OVX組比較，Ts+OVX組血清E2和P含量明顯升高(P﹤0.01)，而血清FSH和LH含量明顯降低(P﹤0.01);與sham組比較，Ts+sham組的血清E2、P、FSH和LH含量沒有明顯變化(P＞0.05)。見表2。

表2 各組大鼠血清相關(guān)激素結(jié)果(±s，n=20)

表2 各組大鼠血清相關(guān)激素結(jié)果(±s，n=20)

組別 E2(ng/L) P(μg/L) FSH(U/L) LH(U/L)20.78±3.25 19.43±2.02 3.01±0.64 3.62±0.85 OVX組 2.39±0.821)10.24±1.731)5.84±1.161)7.89±2.121)Ts+OVX組13.32±2.502)14.56±2.112)4.16±0.522)5.46±1.032)Ts+sham組sham組19.45±4.22 20.12±1.87 2.97±0.61 3.35±1.10

3 討論

卵巢是雌激素和孕激素主要分泌器官，摘除卵巢雌激素和孕激素分泌減少，其血液所含水平明顯下降，引起生長期的子宮停止生長，成熟期子宮新陳代謝降低。隨著時間的延長，子宮萎縮變小，子宮重量減輕。雌激素對子宮增重作用還受到子宮的功能狀態(tài)、年齡、劑量等多種因素的影響。

本文結(jié)果顯示與sham組比較，Ts+sham組的子宮重量、子宮系數(shù)沒有顯著性變化，究其原因可能有兩方面的因素。一方面，所用的實驗大鼠屬于成年期，子宮已發(fā)育成熟，所以雌激素對子宮增重作用不明顯;第二方面，山茶籽醇提物主要含有異黃酮，屬于植物性雌激素，其有別于體內(nèi)的雌激素，有雙向調(diào)節(jié)作用。當體內(nèi)雌激素缺乏時，它可轉(zhuǎn)化為有活性雌激素;當體內(nèi)雌激素充足時，它有可以與雌激素受體結(jié)合并起到抑制雌激素作用〔6，7〕。OVX組的雌激素和孕激素血液所含水平明顯下降是因為卵巢沒有雌激素和孕激素主要來源。而OVX組的血清FSH和LH含量明顯升高是因為血液雌激素和孕激素含量的下降，其對垂體反饋抑制減弱，從而垂體分泌更多的FSH和LH升高〔8〕。

本文結(jié)果說明山茶籽所含的植物性雌激素在提可轉(zhuǎn)化為體內(nèi)的雌激素(E2)，而且植物性雌激素可促進體內(nèi)其他組織合成和分泌孕激素。另一方面，雌激素和孕激素血液水平升高，其對垂體反饋抑制增強，導致垂體分泌FSH和LH減少，所以Ts+OVX組的FSH和LH比OVX組明顯降低。

本結(jié)果說明山茶籽所含的植物性雌激素在體內(nèi)的雙向調(diào)節(jié)作用。因為Ts+sham組的大鼠體內(nèi)雌激素并不缺乏，植物性雌激素進入體內(nèi)沒有轉(zhuǎn)化為有活性體內(nèi)雌激素，對下丘腦-垂體-卵巢調(diào)節(jié)軸影響不明顯。因為這種藥理作用，植物性雌激素在臨床上應用會大大減少雌激素的副作用。人們有理由期待山茶籽這種榨油后的資源豐富且經(jīng)濟的茶麩所含植物性雌激素在婦女雌激素缺乏所致的疾病和保健方面發(fā)揮重要作用。

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