正交設計優選芪歸通絡口服液純化工藝

★ 范宋玲 熊帶水 張建軍 麥炳明（廣東省第二中醫院 廣州 510095）

芪歸通絡口服液為我院神經內科臨床經驗方，由黃芪、當歸、三七等八味藥物組成，具有益氣養血，活血化瘀通絡之功，主治中風病氣虛血瘀證，臨床療效確切。為進一步提高本品的澄清度和穩定性，使其質量更穩定，療效更可靠，本文采用正交試驗對其水提液醇沉工藝參數進行了優選，為批量生產提供科學合理的純化工藝。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（Agillent1100）二級管陣列檢測器；電子分析天平（Sartorius德國）恒溫水浴鍋（HWS26）；甲醇為色譜純；重蒸水；其他試劑均為分析純；芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110736-200630）；黃芪等8味中藥飲片：由廣東省第二中醫院提供，由張誠光主任中藥師鑒定為藥典及地方標準里收載的正品。

2 方法與結果

2.1 因素水平

中藥復方提取液中常含有大量的糖類、無機鹽、黏液質等成分，這些成分對制劑的穩定性影響較大，因此，對提取液進行除雜處理是必須的。影響醇沉除雜工藝的主要因素包括藥液濃縮比、乙醇濃度、攪拌速度、pH值、醇沉溫度等因素。本實驗選取乙醇濃度、藥液濃縮比、醇沉pH值為考察因素，采用L8（4×24）正交表安排實驗，因素水平表見表1。

表1 因素水平表

2.2 固形物的收率測定

取各正交試驗號濃縮液20mL，加乙醇至含醇量為80%，靜置過夜，取上清液于干燥蒸發皿中水浴蒸干，105℃烘箱干燥至恒重，取出，干燥器中放冷，精密稱重，即得。

2.3 含量測定

參照高效液相色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥD）測定。

2.3.1 色譜條件 色譜柱：phenomenex C18柱（4.6×250mm，5μm）；流動相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（34.5：65.5）；檢測波長：230nm；流速：1mL/分；柱溫：30℃。

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品21.36mg置50mL容量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，精密吸取5.0mL，置25mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得（每1mL含芍藥苷85.44μg）。

2.3.3 供試品溶液的制備 精密吸取樣品溶液5mL，加于聚酰胺柱（30-60目，3g）上，用水洗脫，準確收集洗脫液50mL，搖勻，精密吸取10mL，置25mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。

2.3.4 陰性樣品溶液的制備 為了考察芍藥苷含量測定有無干擾，需制備陰性樣品。稱取除赤芍外的藥材加9倍量水，煎煮2次，80分鐘/次，藥液濾過，合并濾液，濃縮并定容至250mL，取5mL濃縮液，自供試品溶液的制備項下“取樣品溶液5mL”起同法操作，制得陰性樣品溶液。

2.3.5 標準曲線的繪制 精密量取芍藥苷對照品溶液1，2，4，8，12，16μL進樣，記錄色譜圖，測定其峰面積，回歸方程：Y=1134.23X+13.94，r=0.9999。結果表明：在0.085-1.367μg范圍內，芍藥苷峰面積與進樣量呈良好的線性關系。

2.3.6 陰性干擾的判斷 吸取上述對照品、供試品及陰性對照溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果顯示，陰性對照圖譜與對照品、供試品圖譜中芍藥苷相應的保留時間無其他峰干擾，表明選擇性良好，陰性無干擾。

2.3.7 樣品含量測定 精密吸取各正交實驗供試品溶液各10μL進樣，記錄色譜圖，根據供試品吸收度積分值與對照品積分值，外標兩點法計算即得。

2.4 正交試驗安排及結果

按處方比例稱取處方量的黃芪、赤芍等藥材按提取工藝提取，提取完成后，濾過，合并濾液，分成8份，按正交試驗設計的方法進行純化，濾過，濾液減壓濃縮，定容至250mL，備用，分別測定固形物的收率和芍藥苷轉移率。以芍藥苷的轉移率為考察指標之一（轉移率越高越好），權重系數定為0.6；作為除雜效果的直接表征，以總固形物收率為指標（收率越低越好），權重系數定為0.4，進行綜合評分。

對評分結果作直觀分析和方差分析，以判斷各因素對純化效果的影響程度，篩選出在該試驗條件下最優的純化條件，試驗安排及結果見表2，方差分析結果見表3。

表2 試驗安排及結果

表3 方差分析結果

結果分析：由直觀分析可知，影響醇沉效果的因素順序為：乙醇濃度（A）＞藥液濃縮比（B）＞藥液pH值（C），由此得出的最佳工藝組合為A4B1C2。經過方差分析，三個因素對醇沉結果均具有顯著性影響。綜合考慮到縮短生產周期，降低生產成本等綜合因素，選擇醇濃度70%，藥液濃縮比為1：1，醇沉pH值為4.5作為本工藝的醇沉濃度。

2.5 驗證試驗

為確定該工藝的優劣和穩定性，據所篩選的條件，既醇濃度70%，藥液濃縮比為1：1，醇沉pH值為4.5，驗證3批，結果芍藥苷平均轉移率為78.76%，80%醇浸出物平均為26.86%，驗證試驗結果與正交試驗優選結果吻合，說明正交試驗選出的工藝條件合理，工藝條件穩定可行。

3 討論

3.1 在運用各種除雜技術使藥液達到澄清的同時應保證成品質量的有效性。本文以固形物收率、芍藥苷保留率作為工藝篩選的考察指標，采用水提醇沉法對本品進行純化。純化后大大增加制劑的穩定性，同時減小制劑的服用量，克服傳統中成藥“粗、大、黑”的缺點。經中試放大表明，本試驗純化條件易于控制，穩定性好，適于工業化生產。

3.2 中藥口服液的澄明度受pH值影響顯著，藥液堿性較強，生物堿易析出；酸性較強時，則部分皂苷易沉淀析出，它們各自有最適pH值。另外由于口服液制劑需高溫滅菌，高溫滅菌前后PH值易發生變化，造成滅菌前澄清的口服液，在滅菌后澄明度發生改變，沉淀重新析出。控制好口服液的PH值，對提高制劑的澄明度和穩定性，確保制劑療效具有重要意義。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010版一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010.

[2]鄭琴，徐德生，馮怡.改善中藥口服液澄明度的思路[J].中成藥，2006，28（10）：1 502.