分光光度法評價氧化鋁對白花檵木浸膏脫色效果的研究*

★ 管 成 董德剛 王曼瑩* 裘 梁 喬貝貝（江西中醫(yī)學院生物技術(shù)研發(fā)中心 南昌 330006）

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白花檵木（Loropetalum chinense Oliv.）為金縷梅科（Hamamelidaeeae）檵木屬（Loropetalv R.Br.）植物，分布在我國中部、南部、西南等各省，是一種常見的灌木。近些年來，白花檵木的藥用價值愈來愈受到重視。其根、葉、花、果均可入藥，具有清熱解毒、通經(jīng)活絡，止咳，消炎，鎮(zhèn)痛，止血等功能；可用于治療咳嗽，咯血，痢疾，紫斑病，燒傷，子宮出血，外傷出血等病癥[1]。本實驗選取白花檵木葉作為研究對象，黃酮為其主要有效成分[2]。本文采取超聲提取法對總黃酮進行提取，以比色法測定含量。以總黃酮脫色前后的含量為指標，分析活性氧化鋁對檵木浸膏進行脫色后其有效成分的回收率，為白花檵木有效成分提取提供高質(zhì)量高純度的原料。

2 實驗部分

2.1 儀器和試劑

分析天平（北京賽多利斯天平有限公司），離心機（飛鴿牌系列離心機TGL-16G），UV1102紫外分光光度計（上海天美科學儀器有限公司），超聲波清洗器（上海天美科學儀器有限公司），六兩裝高速萬能粉碎機（浙江屹立工貿(mào)有限公司220V，1500W）；蘆丁標樣（上海市松江區(qū)生工生物公司），亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、石油醚、95%無水乙醇、正丁醇、乙酸乙酯均為國產(chǎn)分析純，氧化鋁（上海市松江區(qū)生工生物公司），活性炭（上海市松江區(qū)生工生物公司），白花檵木購于江西省宜黃縣。

2.2 白花檵木浸膏的制備

將清洗干凈的白花檵木嫩葉用粉碎機碾磨成粉末狀，再用乙醇索氏回流提取3次，每次1.5小時，合并提取液，回收乙醇至無醇味，55℃真空干燥，將白花檵木葉浸膏制備成2g/1mL的水懸浮液。

2.3 總黃酮的測定

2.3.1 標準樣品的制備 精密稱取120℃干燥至恒重的蘆丁25mg，60%乙醇熱溶解后冷卻并定容至50mL，得到濃度為0.5mg/mL的蘆丁標準液備用。

2.3.2 測定波長的選擇 精密量取1mL蘆丁標準液加1mL5%亞硝酸鈉搖勻后放置6分鐘左右，加1mL10%硝酸鋁搖勻后放置6分鐘左右，加5mL1.5mol/L氫氧化鈉放置10分鐘，再加60%乙醇定容至10mL搖勻，顯色10分鐘后，進行200-600nm掃描，在467nm處有最大吸收，故選擇467nm為測定波長。

2.3.3 標準曲線的制作 精密量取蘆丁標準液0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL，參照波長測定中的顯色程序操作，測定各顯色液在最大吸收波長下的吸光度值，以各顯色液的吸光度為縱坐標，對應的蘆丁濃度為橫坐標，計算蘆丁濃度-吸光度直線回歸方程。

2.4 白花檵木浸膏的脫色

2.4.1 定性研究 用氧化鋁對檵木浸膏脫色做定性研究，觀察氧化鋁對檵木浸膏脫色效果。取10mL檵木浸膏水懸浮液置于燒杯中添加5g活性氧化鋁，震蕩吸附約5分鐘后，抽濾獲得濾液，與原液進行比較，觀察其對浸膏脫色效果。

2.4.2 脫色試驗的優(yōu)化 各取15mL檵木浸膏水懸浮液于A、B、C 3個燒杯中，分別加入10、15、20 g氧化鋁于檵木原液中，攪拌靜置一段時間，抽濾觀察其脫色效果。

2.4.3 脫色前后總黃酮的測定 取檵木浸膏20mL加入20g氧化鋁，脫色一段時間后抽濾得濾液。各取脫色前后的檵木浸膏液1mL于離心機中離心。取脫色后并經(jīng)離心的檵木浸膏液100μL，加入900μL蒸餾水（即將檵木浸膏液稀釋10倍）；取離心的檵木浸膏原液100μL，加入900μL蒸餾水（即將檵木浸膏原液稀釋10倍），按照蘆丁標準曲線制作的顯色程序各取3份進行平行測定，最大吸收波長處測定其吸光度，代入標準曲線方程計算出脫色前后檵木浸膏中總黃酮的含量，計算出總黃酮的回收率R。

其中W1為脫色后溶液所含總黃酮的質(zhì)量，W2為脫色前溶液所含總黃酮的質(zhì)量。

3 結(jié)果

3.1 標準曲線制備

以吸光值（Y）與濃度（X）繪制標準曲線，回歸方程為Y=0.3762X+0.0142，r=0.9993，說明蘆丁在此濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關系。

3.2 白花檵木浸膏脫色

定性研究表明，氧化鋁對檵木浸膏脫色效果明顯；當加入15 g氧化鋁時，即物料比為1：1時，脫色效果較為明顯，繼續(xù)加入氧化鋁，顏色并沒有太大改變。故選用1：1的物料比對檵木浸膏進行脫色。

3.3 脫色前后總黃酮的測定

脫色前后檵木浸膏溶液測定吸光值，均值分別為0.923和0.514。由標準曲線計算脫色前原液總黃酮含量W2為24.16 mg/mL，脫色后的總黃酮含量W1為13.29mg/mL，總黃酮的回收率R為55.01%。在脫色過程中，總黃酮并沒有大量流失，氧化鋁可作為白花檵木浸膏的脫色劑。

4 結(jié)論

在進行檵木浸膏的脫色過程中，曾用活性炭和氧化鋁兩種脫色劑進行對比。雖然用活性炭脫色后顏色也變得較淺，但是由于活性炭本身就是黑色的細小顆粒，在脫去檵木浸膏色素的同時又加入了自身的顏色，摻入了新的雜質(zhì)。故綜合分析后，決定采用氧化鋁作為檵木浸膏的脫色劑。

為定量分析活性氧化鋁對浸膏脫色效果，本文通過分光光度法比較脫色前后的總黃酮含量來評價。實驗表明，總黃酮的回收率為55.01%，在脫色過程中，總黃酮并沒有大量流失。本實驗為使用氧化鋁法對中藥浸膏脫色提供了相關數(shù)據(jù)，在今后的實驗中可重點研究如何提高總黃酮的回收率。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部.中藥新藥臨床研究指導原則[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2002：139-143.

[2]魏希穎，何悅，蔣立鋒，等.泡桐花體外抑菌作用及黃酮含量的測定[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2OO6，（18）：401-404.