兔膝骨關節炎動物模型的構建

王棟棟，熊健斌（廣西柳州市人民醫院骨科，廣西 柳州 545001）

骨性關節炎（OA）是一個多病因、發病機制復雜的常見病，目前各種OA動物模型制作方法周期長、操作復雜、損傷大[1]。尋找一種理想的造模方法是研究膝OA的關鍵所在。本實驗擬在Hulth模型的基礎上，克服其原來缺點，建立更符合臨床癥狀的兔關節炎模型為探討關節炎的發病機制及骨關節炎軟骨修復研究提供了科學的研究平臺。

1 資料與方法

1.1 一般資料：新西蘭家兔，雌雄各半，體重1.8～2.2 kg，18只，普通級，由廣西醫科大學大學實驗動物中心提供。

1.2 藥品和試劑與儀器：HE染液，南京建成；甲醛，天津大茂；無水乙醇，天津大茂；硝酸，天津大茂，其他試劑均為分析純。倒置相差顯微鏡，德國Olympus公司。

1.3 實驗方法：①實驗分組：家兔按體重性別隨機分為實驗組與對照組，實驗組實驗方法制備關節炎模型，而對照組家兔不做處理。模型制備：家兔麻醉后，使用剃須刀將關節處處理干凈后，消毒處理，取內側髕旁入路，切斷內側副韌帶，打開關節腔，剪斷前后交叉韌帶，同時去除內側半月板，手術結束后，止血并縫合傷口。家兔正常飼養于標準家兔飼養籠中，不限制飲食，不固定患肢，可自由活動[2]。②實驗指標的測定：造模10周后，處死家兔，觀察膝關節積液、滑囊腫脹及軟骨的改變。取造模部位股骨端，10%甲醛固定、10%硝酸脫鈣、石蠟包埋切片，進行HE染色。

2 結果

對照組家兔滑膜、軟骨外觀基本正常，呈藍白色，色澤明亮，無裂紋及軟化，滑液量少透明。實驗組家兔滑膜部分呈結節樣增生，滑液量少但混濁，軟骨缺損形成，深達骨質，軟骨下骨暴露，骨贅形成。HE染色：對照組關節軟骨表面光滑，軟骨細胞排列整齊呈柱狀，細胞核清晰，染色均勻，潮線完整，軟骨基質分布勻稱； 實驗組兔膝關節滑膜細胞輕度增生，下層疏松纖維姐織增生，膠原化，可見少量散在淋巴漿細胞浸潤，部分區域軟骨細胞核固縮、裂解、壞死，偏于一側，鈣化層軟骨細胞呈簇狀堆積，排列紊亂，潮線多不規整或完全消失，甚至軟骨下骨質外露、軟骨下骨囊性變。

3 討論

幾十年來國內外相繼報道了多個動物模型對應于臨床，OA有原發性和繼發性，故從制作方法上可將OA動物模型分為兩大類，其一為誘發模型，即通過各種操作方法如制動、手術、關節內注藥、關節內植入軟骨碎片或微粒等誘導OA產生；另一類為自發模型，即不用任何外界干預，動物自發OA，如C57黑鼠等[3-5]。最經典的是傳統Hulth造模法，但該方法仍具有其局限性，主要表現在切除了膝關節維持靜態穩定的主要韌帶，造成關節極其不穩，手術創傷大，不同術者造模效果差異較大等。

本研究中在經典模型的基礎上加以改進，切斷前交叉韌帶、切除內側半月板，其優點主要表現在，創傷不大，且方便取關節液，10周模型可見股骨內骸和脛骨內側平臺軟骨缺失骨質暴露及周圍明顯增生的骨贅，關節的緩沖作用減少，脛股關節面應力局部增大，分布不均；切斷前交叉韌帶造成膝關節失穩，形成軟骨退變的起始環節，加之長期被迫活動進一步加重了軟骨損傷而形成OA。10周內可成功復制出膝不骨關節炎，其在外觀觀察和病理學均和臨床觀察一致，與病理進展有一定相關性。本研究證實了此種改良方法的可行性，且為利用此動物模型進行骨關節炎的深入研究打下了基礎。

[1] 歐云生,安 洪.鼠骨關節炎動物模型建立的現狀[J].中國比較醫學雜志,2004,14(1):41.

[2] 楊 峰,史宗道.用木瓜蛋白酶建立兔顳頜關節骨關節炎模型的研究[J].華西口腔醫學雜志,2002,20(5):330.

[3] 汪青春,沈培芝,王海彬.骨關節炎動物模型的建立及選擇[J].中醫正骨,1998,10(3):39.

[4] 劉伯齡,劉獻祥.骨關節炎動物模型的建立概況[J].福建中醫藥,2003,34(4):49.

[5] 聶 林,張學義,陳國瑞.骨關節炎的實驗模型[J].中華實驗外科雜志,1990,20(1):97.