Bcl-2蛋白在宮頸癌變組織中的表達及其與人乳頭瘤病毒感染的關聯性

黃平，唐秋英，金瑛，陳光元

（深圳市寶安區松崗人民醫院婦產科，廣東深圳518105）

·論著·

Bcl-2蛋白在宮頸癌變組織中的表達及其與人乳頭瘤病毒感染的關聯性

黃平，唐秋英，金瑛，陳光元

（深圳市寶安區松崗人民醫院婦產科，廣東深圳518105）

目的基于宮頸癌發病的病毒學原因，探討Bcl-2基因在宮頸癌中的表達及其與人乳頭瘤病毒感染的相關性。方法采用免疫組織化學法檢測Bcl-2蛋白在30例宮頸上皮內瘤變（CIN）、20例宮頸癌及20例正常宮頸組織中的表達。采用PCR技術檢測上述標本中HPV16/18DNA的表達。結果Bcl-2蛋白在CIN中的表達率為40%，宮頸癌中為70%，正常宮頸中表達為5%。HPV16/18在上述組織中的表達率依次為50%、75%、5%。Bcl-2蛋白和HPV16/18DNA在正常宮頸組織、CIN及宮頸癌中的表達兩兩比較差異均具有統計學意義；Bcl-2蛋白在CINⅠ/Ⅱ及CINⅢ中的差異也具有統計學意義，但與宮頸癌病理類型及分化和臨床分期無關。結論Bcl-2及HPV16/18參與了宮頸癌的發生及發展，聯合檢查HPV16/18和Bcl-2有望為宮頸癌的臨床早期診斷和治療提供理論依據。

宮頸上皮內瘤變；宮頸癌；Bcl-2基因

宮頸癌的發生與人乳頭瘤病毒(HPV)感染密切相關，宮頸癌組織中HPV陽性率達95%，而其中高危型HPV16/18占了約60%以上[1]。而目前公認的HPV16/18感染參與正常宮頸組織-CIN-宮頸癌發病的機制為：HPV病毒整合于宿主基因組，其中的E6、E7蛋白可使癌基因激活、抑癌基因失活及抗凋亡基因過度表達，從而導致細胞的惡性生物學行為[2]。Bcl-2基因是最早發現的凋亡抑制基因。本研究采用免疫組織化學法和原位雜交法檢測Bcl-2基因和HPV16/18DNA在正常宮頸組織、宮頸上皮內瘤變和宮頸癌組織中的表達，探討Bcl-2基因在宮頸癌病變過程中的作用及其與HPV16/18感染的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇我院2011年1月至2012年5月間經病理科診斷的宮頸病變組織切片50例，包括宮頸鱗癌14例、腺癌6例，CINⅠ～Ⅱ15例及CINⅢ15例，以及20名正常宮頸組織做對照。根據最新FIGO分期進行臨床分期：Ⅰ～Ⅱa期16例，Ⅱb～Ⅲ期4例。病理學分級：高中分化6例，低分化14例。取材前均未接受任何治療。

1.2 方法

1.2.1 Bcl-2蛋白檢測采用免疫組化鼠抗人Bcl-2多克隆抗體和免疫組化試劑盒(購自東盛生物有限公司)，嚴格按照試劑盒操作說明進行。結果判斷：細胞質中出現棕黃色顆粒為Bcl-22陽性，高倍鏡下隨機觀察10個視野，記錄陽性細胞百分比，＜10%為陰性，＞10%為陽性。

1.2.2 HPV16/18DNAPCR的檢測按照Baay等[3]的文章設計HPV16、18型特異性引物并送公司合成。脫蠟水化，經蛋白酶K消化。取10 μl標本加入100 μl PCR體系。PCR反應條件為：95℃預變性8 min，94℃變性30 s，52℃退火30 s，72℃延伸1 min，35個循環。最后72℃延伸7 min。產物經1.5%的瓊脂糖凝膠電泳，在395 bp、116 bp處出現條帶為陽性。

1.3 統計學方法樣本率差異比較采用卡方檢驗及Fisher精確概率法，兩者相關性采用Spearman秩相關分析。采用SPSS13.0軟件，以P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Bcl-2蛋白和HPV16/18DNA在不同宮頸組織中的表達Bcl-2蛋白陽性定位主要在胞質中，呈棕黃色顆粒。Bcl-2在正常宮頸組織中的陽性表達率為5%(1/20)，在CIN中為40%(12/30)，而在宮頸癌中高達70%(14/20)。在正常宮頸組織、CIN及宮頸癌中的表達呈現逐漸增強的趨勢，且在CINⅢ中表達高于CINⅠ和CINⅡ。同樣，HPV 16/18在上述三種組織中逐漸增加，且差異具有統計學意義，HPV陽性率與臨床分期、病理類型無關，見表1。

表1 不同臨床病理特征的宮頸組織Bcl-2基因和HPV16/18陽性表達情況

2.2 Bcl-2表達與HPV16/18感染的相關性經Spearman等級相關分析，宮頸癌組織Bcl-2蛋白表達與HPV16/18感染具有正相關性，r=0.864，P＜0.000，見表2。

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3 討論

Bcl-2基因是最早在B細胞白血病和濾泡型淋巴瘤的研究中發現的一種細胞凋亡抑制基因，定位于染色體18q21，由于t(14;18)染色體易位以及轉錄后調節異常導致Bcl-2蛋白過度表達[4]。隨后研究報道，Bcl-2的過度表達除了與淋巴造血組織腫瘤相關外，在非淋巴造血組織腫瘤的發生發展中也起著重要作用。有研究[5]結果顯示Bcl-2基因在CINⅢ級中的表達明顯高于CINⅠ級和CINⅡ級，提示Bcl-2基因的過表達可能與癌前病變的發生即鱗狀上皮進一步分化失敗有關，是宮頸癌發生的早期事件。本研究中，我們發現Bcl-2在正常宮頸組織、CIN及宮頸癌組織中表達逐漸增強，且差異具有統計學意義，這就提示Bcl-2的過表達不僅是宮頸癌發病的早期事件，其也參與了宮頸癌病變的發展。

Bcl-2基因抑制凋亡或者程序性細胞死亡的作用是肯定的，Bcl-2基因的過度表達能夠阻止或者減少不同刺激如化療藥物、射線等對細胞的殺傷作用，從而使得表達Bcl-2的腫瘤包括宮頸癌對放化療不敏感與其不良預后有關[6]。然而很多關于不同腫瘤類型的研究也表明表達Bcl-2蛋白的腫瘤患者較Bcl-2陰性患者手術治療后的預后要好，這可能與Bcl-2對細胞周期的抑制作用有關[7]。目前為止共有7項研究報道接受手術治療的宮頸癌患者的預后與Bcl-2的關系，其中僅有Dimitrakakis等[8]的一項研究中的患者接受手術治療，而其他六項研究中的患者同時接受了適當的放療或者化療。Dimitrakakis等[8]發現表達Bcl-2的宮頸癌患者術后5年存活率明顯高于Bcl-2陰性患者，分別為74%和49%。國內齊榮義等[9]研究也有此發現。我們研究結果也顯示：Bcl-2在分化較好的宮頸鱗癌中陽性表達率有增高趨勢，然而必須注意的是，這種分析并不涉及其他一些重要的預后因素如腫瘤分級、侵潤深度及有無淋巴轉移等，因此，Bcl-2對宮頸癌的預后價值尚需進一步探討。

宮頸癌由良性病變發展到CIN及CIN進一步發展到癌是一個連續過程，雖然部分CIN可逆轉，但CIN發展至癌的過程中與高危因素的存在也是密不可分的。高危型HPV感染與宮頸癌的臨床進展和預后密切相關[10]。高危型HPV主要為HPV16/18亞型，可導致CINⅡ、CINⅢ級病變及宮頸癌的發生。我們的研究結果顯示：在正常宮頸中HPV16/18的感染率為5%，CIN中為50%，其中CINⅢ級中為60%，宮頸癌中為80%，三者感染率逐漸升高，且差異具有顯著統計學意義。這就意味著宮頸癌的發生發展與高危型HPV16/18有關，總的來說，臨床上積極預防和治療HPV感染還是有重要意義的。

總之，宮頸癌的發生是遺傳背景下多種因素相互作用的結果，HPV感染、抗凋亡基因過表達等共同調節著其發生，聯合Bcl-2基因、HPV16/18DNA檢測有望為宮頸癌的診斷治療及預后提供有價值的參考。

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Expression of Bcl-2 protein in cervical intraepithelial neoplasia and cervical carcinoma and its correlation with HPV16/18 infection.

HUNAG Ping,TANG Qiu-ying,JIN Ying,CHEN Guang-yuan.Department of Obstetric and Gynecology,Songgang People's Hospital of Baoan District of Shenzhen City,Shenzhen 518105,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression of Bcl-2 protein in cervical carcinoma and cervical intraepithelial neoplasia,and to analyze the correlation between expression of Bcl-2 protein with HPV16/18 infection.MethodsWith immunohistochemiacal method,the expression of Bcl-2 protein was detected in 30 cases of cervical intraepithelial neoplasia(CIN),20 cases of cervical carcinoma and 20 cases of normal cervical tissues.Also,the HPV16/18 DNA was detected by PCR.ResultsThe positive rates of Bcl-2 protein in the above three tissues were 40%,70%and 5%,respectively,while the percentages of HPV16/18 infection were 50%,75%,and 5%,respectively, both with statistically significant difference in the three tissues.The expression of Bcl-2 was related with the grade of CIN rather than clinical pathological type and clinical stage.ConclusionBcl-2 and HPV16/18 may take part in the occurrence and development of cervical carcinoma.It would be useful to detect the Bcl-2 and HPV16/18 in the early diagnosis and treatment for cervical carcinoma.

Cervical intraepithelial neoplasia(CIN);Cervical carcinoma;Bcl-2

R737.33

A

1003—6350(2013)01—0003—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.01.0002

2012-05-12)

2010年度深圳市科技計劃項目（編號：201003382）

黃平。E-mail：youping77731@yahoo.com.cn