白沙糖漿質量標準研究

【摘要】 目的 建立了白沙糖漿的質量標準。方法 采用TLC法對處方中白楊、半枝蓮、苦參進行了定性鑒別；用HPLC法測定半枝蓮中野黃芩苷含量。結果 在TLC色譜中均能檢出白楊、半枝蓮、苦參；野黃芩苷在00502-08032μg范圍內呈良好線性關系（r=09999），平均回收率為9986%，RSD為138%。結論 本方法簡便可行，重現性好，為白沙糖漿的質量控制提供了方法。

【關鍵詞】 白沙糖漿；質量標準；野黃芩苷；TCL；HPLC

doi：103969/jissn1004-7484（s）201306566 文章編號：1004-7484（2013）-06-3274-02

白沙糖漿為苗族驗方，由白楊、沙塘木、半枝蓮、苦參等藥味組成，具有止咳、祛痰、平喘之功效，用于慢性支氣管炎所致的咳嗽痰多，胸悶氣急。為了有效控制產品內在質量，本文用TLC法建立了白楊、半枝蓮、苦參的薄層色譜鑒別，結果滿意；并參照文獻[1]，采用HPLC法對其主要藥味半枝蓮中的有效成分野黃芩苷進行含量測定，結果具有較好的分離效果，陰性無干擾，方法重現性好，可作為其質量控制指標。

1 儀器、試劑與樣品

Shimadzu LC-10ATvp高效液相色譜儀，SPD-6Apv紫外檢測器，CLASS-vp（ver501）色譜工作站；COT-10Asvp色譜柱溫箱；電子天平（METTLER）；TCQ-250超聲波清洗器（北京醫療設備二廠）。紫外光燈（365nm）；硅膠G（青島海洋化工廠）；甲醇、乙晴為色譜純，水為重蒸餾水，其它均為分析純；苦參堿、槐定堿對照品、野黃芩苷（由中國藥品生物制品檢定所提供）；白楊對照藥材（由貴陽德昌祥藥業有限公司提供）。

白沙糖漿及缺有關藥味的陰性對照樣品均由貴陽德昌祥藥業有限公司提供。

2 薄層鑒別

21 白楊的TCL 取樣品10ml，加水10ml，混勻，加水飽和的正丁醇提取3次，每次25ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。按處方藥味比例，取不含白楊的陰性樣品，按供試品溶液方法制備陰性樣品溶液。另取白楊對照藥材2g，加石油醚20ml，回流提取40分鐘，濾過，棄去石油醚，殘渣加甲醇20ml，加熱回流40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml，同法制成對照藥材溶液。吸取上述3種溶液各10μl，分別點于同一4%醋酸鈉硅膠G板上，用醋酸丁酯-甲酸-水（7：4：3）的上層溶液為展開劑，展開后晾干，用5%三氯化鐵乙醇溶液顯色。供試品色譜與對照藥材色譜在相應的位置上顯相同顏色的主斑點，而陰性無干擾。

22 半枝蓮的TCL 取樣品10ml，加稀鹽酸調節PH值至2，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。取缺半枝蓮的陰性樣品，同法制成陰性樣品溶液。另取半枝蓮對照藥材1g，加石油醚（60-90℃）20ml，回流提取30分鐘，濾過，棄去石油醚，藥渣加甲醇20ml回流提取1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml，同法制成對照藥材溶液。再取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述4種溶液各10ul，分別點于同一以含4%醋酸鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以醋酸丁酯-甲酸-水（7：4：3）的上層溶液為展開劑，預飽和30分鐘，展開，后，噴5%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜與對照品及對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點；而陰性無干擾。

23 苦參的TCL 取樣品10ml，加濃氨試液05ml，用三氯甲烷提取2次，每次30ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加無水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取苦參對照藥材1g，加乙醇20ml，回流提取30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣用20ml水分次溶解，收集溶液與按處方比例制備的不含苦參的陰性樣品，分別同法制成對照藥材溶液和陰性樣品溶液。再取苦參堿和槐定堿對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的苦參堿和槐定堿溶液，作為對照品溶液。吸取上述供試品溶液和對照藥材溶液、陰性樣品溶液各10μl，對照品溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-醋酸乙酯-濃氨試掖（2：3：4：02）為展開劑，置氨蒸汽飽和的層析缸內飽和30分鐘，展開晾干后，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜與對照藥材和對照品色譜在相應的位置上，顯相同顏色的斑點；且陰性無干擾。

3 含量測定

31 色譜條件 色譜柱 Hypeisil-ODS柱（5um，250×46㎜，大連依利特科學儀器有限公司）；流動相：甲醇-水-冰醋酸（26：70：4）；流速：1ml/min；柱溫：25℃；檢測波長335nm。理論板數按野黃芩苷計不得少于3000。

32 檢測波長的確定及流動相的選擇 參照中國藥典一部]半枝蓮藥材的檢測波長，故選用335nm作為野黃芩苷的檢測波長。選用甲醇-水-冰醋酸系統進行試驗，結果甲醇-水-冰醋酸（26：70：4）的流動相，供試品保留時間適當，樣品分離效果較好，故被采用。在此條件下，野黃芩苷在3500-4500，故規定野黃芩苷峰的理論板數不低于3000。

33 供試品溶液的制備 精密吸取樣品10ml，置100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（045um）濾過，取續濾液，即得。該方法簡單、且雜質較少，能有效分離。

34 對照品溶液的制備 精密稱取野黃芩苷對照品適量，加甲醇溶解并制備成1ml含80μg的溶液，即得對照品儲備溶液。精密吸取對照品溶液加甲醇制成每ml含野黃芩苷20μg對照品溶液。

35 陰性對照試驗 取缺半枝蓮藥材按工藝制成陰性對照制劑，按供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。分別吸取陰性對照、供試品、野黃芩苷對照品三種溶液，按上述條件進行測定，結果顯示供試品與野黃芩苷對照品有相同保留時間的色譜峰，而陰性對照在相同的位置未有相應的色譜峰，說明其他藥味不干擾（見下圖）。

36 線性關系的考察 精密吸取野黃芩苷對照品儲備溶液（8032μg/ml），加甲醇分別制成502，1004，2008，3012，4016，6024，8032μg/ml的溶液，各精密吸取10μl，注入高效液相色譜儀，以對照品進樣量（μg）為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，回歸方程為Y=176802341x-33543，r=09999，表明野黃芩苷對照品在00502-08032μg范圍內，呈良好的線性關系。

37 穩定性考察 取供試品溶液在0，1，2，4，8hr按上述色譜條件測定，峰面積的RSD=132%，表明供試品溶液在8hr內穩定。

38 精密度及重復性試驗 精密吸取供試品溶液10μl，注入液相色譜儀重復測定5次，RSD值為027%，說明儀器的精密度良好。分別取同一批樣品，按上述條件和方法重復5次進行測定，測結果平均含量為0167mg/ml，RSD為079%，表明本方法重復性良好。

39 回收率試驗 采取加樣回收法，精密吸取已知含量的同一批樣品6份，分別精密加入一定量的野黃芩苷對照品，依法測定，結果平均回收率為9986%，RSD=138，說明該方法可行。

310 樣品測定 取三批樣品（20101001、20101101、20101102），依法測定，結果含量分別為0167、0154、0172mg/ml。

4 討 論

41 白楊為苗族民間用藥，為楊柳科植物山楊及響葉楊的干燥莖枝[2]，含酚苷，主要為特貝楊苷、白楊苷[3]等成分，采用正丁醇提取，正丁醇飽和的水洗后，可以出去大部分干擾。白楊藥材采取先脫脂，再用甲醇提取，目的是排除干擾。因制劑成分多，展開后斑點只有一個主斑點對應。用氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：02）為展開劑，噴以10%硫酸乙醇溶液，結果也一樣。但前者易觀察。

42 半枝蓮TCL對照藥材先脫脂，再按樣品的處理方法處理，在展開野黃芩苷時需預飽和30分鐘，分離效果較好。

43 流動相的選擇是參照中國藥典半枝蓮的含量測定條件，選用甲醇-水-冰醋酸系統，在比例為35：61：4和22：74：4和26：70：4進行比較，結果比例為26：70：4，保留時間適當，分離效果較好。

參考文獻

[1] 中華人民共和國藥典2010版一部[S]北京：化學工業出版社，2010

[2] 貴州省藥品監督管理局編，貴州省中藥材、民族藥材質量標準（2003年版）[S]貴州科技出版社，2003

[3] 北京醫學院主編中草藥成分化學[M]北京：人民衛生出版社，2003